横慢性頭蓋窓の準備を有効インビボマウスの遠位中大脳動脈閉塞後に観測

サマリー

遠位中大脳動脈の分岐（MCAO）の外科的閉塞は実験的ストローク研究で頻繁に使用されるモデルです。この原稿は、マウスの縦生体顕微鏡検査のための機会を提供しています横頭蓋窓の挿入と組み合わせて永久にMCAoの基本的な手法について説明します。

要約

局所脳虚血（ すなわち、虚血性脳卒中）は、神経機能の深刻な損失に、その結果、運動および認知障害のホストにつながる、主要な脳損傷を引き起こす可能性があります。ストロークが¹世界中の長期障害と死の主な原因の一つであるとして、その高い有病率は、深刻な健康負担をもたらします。神経機能の回復は、ほとんどの場合、唯一の部分です。これまでに、治療オプションが原因で血栓溶解^2,3ための狭い時間ウィンドウに、特に、非常に制限されます。脳卒中からの回復を加速するための方法を決定することは、プライム医療目標です。しかしながら、これは、回復プロセス中に不十分な機構的洞察により妨げられてきました。実験ストローク研究者が頻繁に局所脳虚血の齧歯類モデルを採用しています。急性期を越えて、脳卒中の研究は、脳虚血次亜急性および慢性期にますます集中しています。ほとんどのストロークの研究者は、永続的またはトラン適用しますマウスまたはラットにおけるMCAのトランジェント閉塞。患者では、MCAの閉塞は、虚血性脳卒中⁴の最も頻繁な原因の一つです。フィラメントモデルを用いて、MCAの近位閉塞のほか、遠位MCAの外科的閉塞は実験的ストローク研究⁵の中で最も頻繁に使用されるモデルは、おそらくです。 MCAブランチ（lenticulo-線条動脈の分岐まで）遠位の閉塞は、通常、線条体を惜しみ、主に新皮質に影響を与えます。血管閉塞は、永久的または一時的であることができます。長期転帰に対する病変体積と非常に低い死亡率の高い再現性は、このモデルの主な利点です。ここでは、矢状静脈洞に慢性頭蓋窓（CW）準備横を実行するために、その後どのように開頭術アプローチを使用して、ウィンドウの下に遠位脳卒中を引き起こす外科的方法を示しています。このアプローチは、ビアの虚血後の急性および慢性の変化の連続画像形成のために適用することができます落射照明、共焦点レーザー走査、及び二光子生体顕微鏡。

概要

脳卒中は^{、世界中で長期的な}障害と死亡の主な原因の一つであり、冠状動脈性心臓病に次いで2番目です。さらに、脳卒中は長期障害の主な原因であり、その甚大な社会経済的影響を強調しています^6-8。急性期治療を超えて、脳卒中後の回復を加速および強化するための新しいアプローチとメカニズムを調査することは、依然として主要な医学的目標^です7。

>jove_content<過去数十年にわたり、実験的な脳卒中研究からのデータは、虚血によって引き起こされる複雑な病態生理学的カスケードの理解に大きく貢献してきました^9,10。興奮毒性、アポトーシス、梗塞周囲脱分極、および炎症は、限局性脳虚血後の細胞死の最も関連性の高いメディエーターとして特定されています。さらに、脳虚血の動物モデルを使用して、重要な概念、診断方法、および治療アプローチが開発され、検証されています(例:「半影」や血栓溶解)¹¹。

実験的な脳卒中モデルの利用可能性は、非侵襲的な画像診断法(例えば、磁気共鳴画像法（MRI)、コンピュータ断層撮影法、またはレーザースペックルコントラスト分析）と組み合わせれば、研究者は虚血性傷害によって誘発される超急性および慢性の病態生理学的変化を縦断的に調査することができます¹².進化する病変の時空間プロファイルを研究するとともに、ニュー....

プロトコル

倫理の声明：動物を対象とした実験は、該当する場合、Landesamt fuerお大事にウントSoziales、ベルリン、ドイツ（G0298 / 13）とARRIVE基準によって定められたガイドラインおよび規則に従って行いました。 12週齢の雄のC57BL / 6Jマウスに本研究では、10-に使用しました。

1.横慢性頭蓋窓の準備

1. 皮下ケタミンの注射（90 mgの/ kg）およびキシラジン（10mg / kg）で麻酔を行います。痛みの刺激との適切な鎮静のためのテスト。
2. 70％エタノールで手術器具および手術野を滅菌します。
3. げっ歯類のシェーバーを使用して、目に首から頭皮の毛を削除します。
4. 定位フレームにヘッドを固定してください。
5. 脱水症状を避けるために、両眼にデクスパンテノール眼軟膏を使用してください。
6. すべての毛を除去し、74.1パーセントのエタノールと10％2-プロプラノロールの3層で、それを滅菌する手術領域を清掃してください。
7. 正中線を実行しますメスを用いて目に首から切開。
8. 4テンティング縫合糸で皮膚フラップにまたがります。
9. 頭筋が始まる点にメスでそ​​れを掻き落とし左半球に慎重に骨膜を削除します。
   注：この製剤はまた、カバーガラスを固定する歯科接着剤、のための良好な接着領域を作成するのに役立ちま....

結果

タイムライン及び代表的な結果を図2および図3に示されています。上矢状静脈洞（ 図2 B、C、D）経験豊富な外科医によって行われる非常に低い死亡率および罹患率率の結果に小さな頭蓋窓の横で頭蓋窓の準備、。 10匹の動物の全てが生存し、そしてすべての慢性CWも28日目、手術後、高品質の画像化に使用することができます。創傷感染症や他の合併症には問題はありませんでした。

揮発性麻酔とわずかな脳損傷、約10の短い露出に - 15遠位にMCAo分後、加熱回復ケージに移し、全ての動物が自由に回復ケージに移動し、同腹子との相互作用、目を覚ましました。一般的に、遠位MCAOモデルの死亡率は5％未満であると、主血管Iの結果として生じますMCAO手術中njuryとその後の出血。遠位にMCAo、次の28日間の観察期間中の死亡率はごくまれにしか発生しません。形態学的に、病変は、.......

ディスカッション

ストロークが¹世界中の長期障害と死の主な原因の一つです。急性期治療を超えて、脳卒中後の回復を促進し、強化するための新しいアプローチやメカニズムを調査すると、プライム医療目標⁷のまま。実験ストローク研究者が頻繁に局所脳虚血の齧歯類モデルを採用しています。実際には、一時的または恒久的にMCAoを誘導するモデルは、患者⁴における局所脳虚血の最も一般的なタイプのいずれかを模倣します。 MCAの近位閉塞のほかに、遠位にMCAoの外科的閉塞のためのフィラメントモデルは実験的ストローク研究^5,19の中で最も頻繁に使用されるモデルは、おそらくです。ここでは、永久遠位にMCAoの基本的な技術は、マウスの縦生体顕微鏡検査のための機会を提供し、横方向のCWと組み合わせて説明します。病変体積の高い再現性、ならびに非常に低い死亡率、長期的な成果を研究に関して、特に、ARこのマウスモデルの主な利点を電子。この皮質の脳卒中モデルにおいて、脳卒中の領域及び梗塞周囲領域における血管は、慢性CWを介して可視化することができます。マルチ蛍光落射蛍光videomicroscopicシステム.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
双眼手術顕微鏡	Zeiss	Stemi 2000 C
顕微鏡用光源	Zeiss	CL 6000 LED
直腸プローブ付き加熱パッド	FST	21061-10
定位フレーム	Kopf	Model 930
イソフルラン用麻酔システム	ドレーガー
イソフルラン	アボット
デュモン鉗子#5	FST	11251-10
モン鉗子#7	FST	11271-30
バイポーラ鉗子	Erbe	20195-501
バイポーラ鉗子	エルベ                             20195-022
マイクロドリル	FST                             18000-17
ニードル	ホルダーFST	12010-14
5-0シルク縫合糸	イヤースタイン、スープラマ
7-0シルク縫合糸	イヤースタイン、スープラ
8-0シルク縫合糸	フォイヤースタイン、スープラ
獣医回復室	ペコサービス	V1200

デュフォフォママ