このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。

方法論記事

紫外可視およびラマン分光法イムノアッセイプラットフォームを製作

9.3K 閲覧数

⸱

DOI：

10.3791/54795

⸱

2016年11月10日

 ,  ,  , 
1Biological Engineering Department, Utah State University

* These authors contributed equally

この記事について

サマリー

ナノ粒子ベースの光学プローブは、ラマン分光法とUV-Vis分光法を使用して抗原を検出するための手段として設計されています。ここでは、UV-Vis/ラマン分光法イムノアッセイ用のプローブを調製するためのプロトコルについて、将来のマルチプレックス機能を組み込むための方法について説明します。

要約

免疫アッセイは、関連する抗体の存在に基づいて、タンパク質を検出するために使用されます。そのため、研究と臨床現場での広範な使用の、免疫測定機器および材料の大規模なインフラを見つけることができます。例えば、96および384ウェルポリスチレンプレートは、市販されており、種々の製造業者からの紫外 - 可視（UV-Vis）で分光機を収容するために、標準的な設計を有します。また、このような酵素結合免疫吸着検定法（ELISA）などのカスタマイズされた免疫アッセイの設計のための免疫グロブリン、検出タグ、およびブロッキング剤の多種多様なご利用いただけます。

既存のインフラストラクチャにもかかわらず、標準的なELISAキットは、高価で時間がかかる可能性が個別のイムノアッセイの開発を必要とする、すべての研究の必要性を満たしていません。彼らは通常、蛍光またはCOLに依存するように例えば、ELISAキットは、低多重化（一度に複数の分析物の検出）機能を持っています検出のためのorimetric方法。比色や蛍光ベースの分析は、広いスペクトルのピークに起因する多重化機能が制限されています。対照的に、ラマン分光法に基づく方法は、狭い放射ピークのために多重化するためのはるかに高い能力を有します。ラマン分光法の別の利点は、ラマンレポーターは、蛍光タグ1よりも大幅に少ない光退色が発生することです。ラマンレポーターは、蛍光比色タグの上に持っていることを利点にもかかわらず、ラマンベースのイムノアッセイを製造するためのプロトコルは限られています。この論文の目的は、UV-Visの分析及びラマン分光法による分析物の直接検出のためのポリスチレンプレートと組み合わせて使用​​するために官能化プローブを調製するためのプロトコルを提供することです。このプロトコルは、事前に確立されたインフラストラクチャを活用しながら、研究者は、将来の多検体の検出のための日曜大工のアプローチを取ることができます。

概要

典型的なサンドイッチイムノアッセイは、間接的に二つの抗体を用いて抗原の存在を検出します。捕捉抗体は、固体表面に結合したときに適切な抗原に近接して抗体 - 抗原複合体を形成します。検出抗体は、次いで、導入された抗原に結合します。洗浄後、抗体/抗原/抗体複合体が残存し、 図1Aに示されたように標識した検出抗体によって検出されます。典型的な検出は、広いスペクトルのピーク2,3に起因する10の検体に多重化を制限し、蛍光または比色検出器によって行われます。これとは対照的に、ラマンベースのシステムには、最大100の検体2,3の同時検出を主張ソースで強化された多重化機能が得られはるかに狭い発光ピークを持っています。

このようなステップ・バイ・ステップとして6 -多くの文献情報源は、イムノアッセイ4に関連する重要な側面をカバーしているご利用いただけます詳細は、パーソナライズされたELISAキットを作成します。残念ながら、これらのプロトコルは、カスタマイズされた免疫アッセイの多重化能力を制限し、蛍光または比色検出のためのものです。この必要性に対処するために、我々は、 図1Bに示すように、直接イムノアッセイについて以前に公開され7 UV-可視/ラマンイムノアッセイを作製する詳細な手順を提示します。

このプロトコルは、図2に示した官能基化金ナノ粒子ベースのプローブの製造を含んでいる。ラマン/ UV-Visのプローブを作成する手順は、金ナノ粒子（AuNPs）の表面にラマンレポーターを結合することによって開始します。 AuNPsは、その後、ポリエチレングリコール（PEG）と関連している抗体を用いて官能化されます。 AuNPsの残りの結合部位は、分析の間の結合、その後の非特異を防止するAuNPsにメトキシポリエチレングリコールチオール（MPEG-SH）を結合することによってブロックされます。準備AuNPプローブは、抗原に結合することによってテストされます図1Bに示すように、ポリスチレンプレートのウェルに固定されています。関連ラマンレポーターは、ラマン分光法を用いて検出している間にプレートを洗浄すると、AuNPプローブは、紫外可視分光法を用いて検出されます。 UV-Visのラマンスペクトルデータを組み合わせることにより、この免疫アッセイの能力を強化、分析の2つのメソッドを提供します。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

プロトコル

バッファーの調製

  1. リン酸緩衝生理食塩水（PBS）
    1. 1×PBS濃度を行うには450点mLのHPLC等級の水で10×PBS 50 mlで希釈しました。滅菌フィルター0.22μmのフィルターを用いて溶液。
    2. 室温で保存液。
  2. トリス緩衝生理食塩水+トゥイーン20（TBST）の調製
    1. 1倍濃度を作製するには450点mLのHPLC等級の水で10倍トリス緩衝生理食塩水（TBS）を50mlを希釈。 Tween-20を0.05％（v / v）のためのTween-20の250μLを加えます。滅菌フィルター0.22μmのフィルターを用いて溶液。
    2. 室温で保管してください。
  3. ブロッキング溶液ヒト血清アルブミン（HSA）の調製
    1. HSA溶液w / vの3％を作るために滅菌濾過した1×PBSの15ミリリットルにHSAの0.45グラムを計量。 HSAまでボルテックス溶液が完全に溶解されます。
    2. 4℃で保存HSA溶液。
      注：ウシ血清アルブミン（BSA）は、ブロッキング溶液として使用することができます。
  4. PEG化抗体の作製（PEG-AB）ソリューション
    注：抗体溶液は、N-ヒドロキシスクシンイミド（NHS）の結合部位について競合することによって結合反応を妨害するBSA、などの担体または安定化タンパク質から自由でなければなりません。抗体は、トリスまたはグリシン緩衝液中に来る場合は、NHSコンジュゲーション反応と干渉アミンまたはアンモニウム塩を防止するために、緩衝液交換を受けなければなりません。抗体は凍結乾燥形態である場合、それは1〜10ミリグラム/ mlの濃度で製造業者の推奨に従って再懸濁することができます。
    1. トリスまたはグリシン緩衝液中の抗体を、脱塩カラムを使用して100mMの炭酸水素ナトリウムを緩衝液交換を行います。結合反応をスピードアップするために約8.5にpHを上げるために100mMのバッファを使用してください。
    2. 100 mMのsの水和物、オルトピリジルジスルフィド-PEG-NHS（OPSS-PEG-NHS）1mg / ml以上の濃度で1mlの容量に憎悪炭酸。
      注：OPSS-PEG-NHSは、新たに作製し、約20分以内に使用すべきです。 OPSS-PEG-NHSのNHS基は、pH 8.5の水溶液中で、約20分の半減期を有します。
    3. 1の比（PEG：抗体）2で抗体溶液にOPSS-PEG-NHSを加える結合比は、試験サンプルのために使用されます。制御のために使用される1結合比：別個のマイクロ遠心管中で、2の抗原溶液にOPSS-PEG-NHSを加えます。
      注2：1の比率は、50％の結合効率を仮定しています。目的は、1 PEG鎖で各抗体を標識することです。この工程では、過剰の標識の下の標識よりも良好です。 OPSS-PEG-NHSおよび抗体溶液の適切な量を決定するために、次の式を使用します。
      figure-protocol-1
      Vは体積であり、Cは濃度の分子内で発現されますか1mlあたりtibodies。添字PEGおよびAbがそれぞれ、OPSS-PEG-NHSおよび抗体です。最終容量は約250μlのでなければなりません。
    4. 8時間または一晩4℃でPEG-Abのソリューションをインキュベートします。凍結融解サイクルを制限し、低結合管を使用することを確認するために-20℃で約25マイクロリットルのアリコートを作業に保管ソリューション。

2.準備紫外可視/ラマンプローブ

  1. 裸AuNP溶液を調製します
    1. ミリリットル当たり約1×10 11粒子の濃度でAuNPsの2ミリリットル溶液を調製します。
      1. AuNPsが集中する必要がある場合は、20分間または上清が透明になるまで5,000×gで2000株AuNPμlの遠心分離機で低結合遠心分離管を埋めます。 AuNPペレットを乱さないように注意しながら、ピペットで上清を取り除きます。
      2. 1チューブに残ったAuNPソリューションを組み合わせるとconcentraを推定UV-Visの測定値を取得し、これが線形関係であるとして知られている濃度に値を比較することによりる。
  2. 適切なラマンレポーター標識比を決定
    1. メタノールに溶解したラマンレポーターのワーキング溶液を調製します。この濃度は、使用されるレポーターに依存することになります。本研究では、200μMの作業溶液に3,3'- diethylthiatricarbocyanineヨウ化物（DTTC）を準備します。
    2. 各ウェル100μlの最終容量を仮定すると、ラマンレポーターは、0.2μM〜10μMの濃度の範囲でするような96ウェルプレートの最初の行の各ウェルに作業レポーターソリューションを十分に追加します。ボリュームが80μLであることを各ウェルなどに十分なHPLC等級の水を追加します。各ウェルごとに、100μlの最終容量をよく作ることにAuNPの20μLを加えます。例を表1に提供されます。
    3. UV-Visスペクトル400からのを測定しますプレート読み取り紫外可視分光光度計を用いて700nmで。適切な濃度は、UV-Visスペクトルのための明確なピークと最も高い濃度です。 AuNPsにラマンレポーターの最高濃度比まで濃度を増加で手順を繰り返し2.2.2が発見されました。
      注：染料及びAuNPの形状、サイズ、および製造者は、適切な濃度に影響を与えます。したがって、記載された手順が使用されているコンポーネントに応じて評価し、変更しなければなりません。このプロトコルは、正に荷電した色素の使用を含みます。このように、AuNPとレポーターとの間の結合は、負に帯電しAuNPsを使用することによって改善されました。これは、クエン酸塩キャッピングさAuNPsを用いて行きました。詳細については、議論のセクションを参照してください。
  3. AuNPにラマンレポーターおよびPEG-ABを結合
    1. ラマンレポーターは、室温で30分間AuNPsに結合することを可能にする、以前に決定された濃度でAuNPとラマンレポーターの2 1.5ミリリットルのバッチを準備します。
    2. 粒子への抗体の1の比率：200を作成するためのAuNPとラマンレポーターソリューションの1バッチにPEG化された抗体（PEG-AB）を追加します。この溶液は、試験サンプルについてです。対照として使用する粒子への抗体の1：1の比の別々のマイクロ遠心チューブでは、200でAuNPとラマンレポーターソリューションの他のバッチにPEG化抗原を追加します。室温で30分間溶液をインキュベートします。
      注：粒子に対する抗体の比率はAuNPsに固有となり、使用する色素や個々のケースのために最適化されるべきです。ここでの目的は、粒子の凝集を防止しつつに結合するAuNPプローブに対する抗体の最も高い割合を有することです。一緒に追加するには、適切な量を決定するために、次の式を使用します。
      figure-protocol-2
      Vは体積であり、Cは濃度1mlあたり粒子または抗体で発現されます。フィンアルの容量は約1.5ミリリットルでなければなりません。
  4. mPEG-SHとAuNP表面上の残りのサイトをブロックします。
    1. 水を使用して、200μMの濃度に固体メトキシポリエチレングリコールチオールを溶解させることによってのmPEG-SHを準備します。 mPEG-SHが完全に溶解するまで溶液をボルテックス。
    2. ステップ2.3で行われたAuNP-PEG-Abの溶液に1比：40,000でのmPEG-SHを追加します。金ナノ粒子上の残りのサイトがブロックされていることを確認するために10分間、室温で溶液をインキュベートします。一緒に追加するには、適切な量を決定するために、次の式を使用します。
      figure-protocol-3
      Vは体積であり、Cは濃度1mlあたり粒子または抗体で発現されます。最終容量は約1.5ミリリットルでなければなりません。
  5. 官能基化ラマンプローブを回復します。
    1. 低バインドCで20分間、5000×gで遠心分離した粒子entrifugeチューブ又は上清が透明になるまで。 AuNPsを乱さないように注意しながらピペットで上清を取り除きます。
    2. 以前に行われた1×PBS溶液1mlで粒子を再懸濁。少量の溶液（3μL）のUV-Visの測定を行うことにより、AuNP濃度を推定し、既知のAuNP濃度からの測定値に結果を比較します。最終溶液は、1mlあたり少なくとも1×10 11粒子であるように、音量を調整します。
    3. 4℃で保存ソリューションは、それが免疫アッセイプレートの官能化のために使用されるまで。 1週間以内のソリューションを使用してください。
各コンポーネントの追加するボリューム（ミリリットル）
DTTC最終濃度（mM）の DTTC作業溶液（200 mM）の AuNP 水
0.2 0.1 20 79.9
0.6 0.3 20 79.7
1 0.5 20 79.5
2 1.0 20 79
5 2.5 20 77.5
7 3.5 20 76.5
10 5.0 20 75

表1 DTTC希釈例。DTTCの様々な希釈液と株式DTTC、金ナノ粒子溶液、および水の関連するボリューム。

3.免疫アッセイプレートの準備

  1. イムノアッセイプレートに所望の抗原に結合します。
    1. ポリスチレン井戸を満たすのに十分な希釈抗原（50μg/ ml）を準備します。 、解決策をVORTEXそして、すぐにプレートウェルにソリューションを追加します。抗原は、室温で1時間、プレートに結合することを可能にします。
  2. 結合していない抗原を洗い流します。
    1. 廃棄容器にソリューションをダンプし、紙タオルで覆われた卓上に対してプレートを押すことで、過剰な抗原溶液を除去します。
    2. 前述と同様に洗浄した後、表面を洗浄除去するために、ウェルにTBSTを追加します。このステップをさらに2回繰り返します。
  3. ブロックは、非特異的結合を防ぐために、プレート上の結合部位を残り。
    1. プレートの各ウェルにHSAブロッキング溶液70μLを加え、室温で30分間インキュベートします。
    2. 削除し、ステップ3.2で指定されたものと同じ手順を用いてプレートをすすぎます。さらに使用するまで4℃でプレートや店舗の乾燥をカバー。
  4. 免疫アッセイプレートを官能。
    1. トンの70μLを追加彼は、96ウェルプレートの最初の列に2節で作製したナノ粒子をプローブと1使用して、後続のカラムを希釈：2連続希釈を。プレートは、少なくとも1時間インキュベートすることができます。免疫アッセイプレートを準備する方法の例を図3に示されています。
    2. 適切AuNPsを処分することを確認して、ステップ3.2で説明するようにTBSTで5回プレートを洗浄します。最終洗浄の後、各ウェルに1×PBSの70μlを添加し、プレートシールでカバーしています。
      注：コントロールサンプルは、明確にする必要があります。非特異的結合が発生した場合、対照試料は試験試料と同様の色を有することになります。
  5. 紫外可視およびラマン分光法による試験アッセイ感度。
    1. 各ウェルについて、UV-Visスペクトルプレート読み取り紫外可視分光光度計を用いて400〜700nmの範囲で測定。
    2. 倒立ラマン顕微鏡を用いて、AuNPプローブを有するウェルの表面上に目的の焦点を合わせます。オビ井戸のラマンスペクトルをTainの。 1800センチメートルから-1 400センチメートルまでの範囲のスペクトルを収集-1。すべてのウェルに、この手順を繰り返します。
    3. 適切なスペクトルソフトウェアを使用して、UV-Visスペクトルのためのラマンスペクトルのための第 11次多項式ベースライン補正、3次多項式を行います。
    4. 適切なスペクトルのソフトウェアを使用して、ラマン及びUV-Visスペクトルを正規化します。 1に最大値を設定し、それに応じて他のすべての値をスケール。ラマンスペクトルを標準化するために、ユニークなポリスチレンピークを選択し、等しく1に設定し、それに応じて他のすべての値をスケール。
    5. 適切なスペクトルソフトウェアを使用して、各スペクトルのピーク積分を実行。ラマンスペクトルについて、ラマンレポーターを示すピークは、ポリスチレンピークの領域不在でなければなりません。ピーク積分を実行するには、所望のピークの積分の境界を指定し、コントロールを含むすべてのサンプルについて所望のピーク面積を記録します。
    6. PLそれに関連する標準偏差を示す各点についてエラーバー付きAuNP濃度の対数の関数としての関心の平均ピーク面積をotの。 4パラメータロジスティック曲線にこれらのキャリブレーションポイントを取り付けます。
    7. ブランク試料のための目的のピークの面積を平均化することにより、ブランクの平均値を決定します。これらの領域の標準偏差を決定します。これは、ブランクの標準偏差です。
    8. 前のステップで分析同じピークについては、最低濃度のためにそのピーク面積の標準偏差を見つけます。
    9. 代表的な結果セクションに指定された検出のブランクと下限の限界を計算します。 AuNP濃度の点でLLODを決定するために、4PLの検量線で、これらの値を使用してください。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

結果

この研究では、60nmの金粒子は、紫外可視分光法のために使用しました。 UV-Visのオープンソースのスペクトル分析ソフトウェア8を用いて決定した各AuNP濃度400 700に収集されたnmおよびピーク面積から吸収スペクトル。統合をピークに先立ち、収集されたスペクトルは、3点多項式フィットを使用して、ベースライン補正を行いました。ピーク面積は、 図4に示されているように、対数較正曲線を生成するために使用された。 図4及び図 5は、対数較正曲線を組み入れていることに留意すべきです。非線形検量線の使用が大幅にアッセイのダイナミックレンジを拡大することができ、低域検出機能9,10を必要とする様々なイムノアッセイのために受け入れられるの練習となっています。

定量的アッセイの感度、ブランク（LOB）の限界を評価するために、と次のよう...

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

ディスカッション

詳細なプロトコルでは、対処するためのいくつかの重要なポイントがあります。 1つの問題は、ラマンレポーターと金ナノ粒子の選択です。プロトコルは、個々の使用に適合するように書かれたが、ラマンレポーターDTTCを例として使用しました。 DTTCは、正に帯電したレポーターであり、負のクエン酸キャップ化AuNPsなどの表面に帯電するために特異的に結合します。このプロトコルは、正の表面電荷を有する金ナノ粒子を使用して、負に帯電したレポーターに適合させることができます。例えば、ポリエチレンイミン（PEI）キャップされたAuNPsは正の表面電荷を提供し、より良好な負に帯電したレポーターと結合します。

タンパク質とナノ粒子の間のバランスを維持することは、このプロトコルの重要なステップです。このバランスは200の金ナノ粒子の比に最適化された抗体にPEG化抗体を添加することによって達成される：1。 PEG化された抗体は、Th1よりも有意に高い比率で金ナノ粒子溶液に添加された場合S、イオン誘発性粒子の凝集が発生する可能性があります。また、比、タンパク質凝集および不溶性の小さすぎる時に起こるであろう。この比...

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

開示事項

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

謝辞

この作業は、ユタ州立大学からのResearch Catalyst Awardによって支援されました。著者は、Annelise Dykes、Cameron Zabriskie、Donald Wooley の貢献に感謝します。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
60 nm 金ナノ粒子Ted Pella, Inc.15708-6これらはクエン酸塩をキャップした金ナノ粒子です。ラマンレポーターとAuNP表面電荷の関係と、AuNPおよび/またはラマンレポーターの適切な選択への影響については、ディスカッションを参照してください。
ナトリウムの重炭酸塩のフィッシャー科学的なS233-500
のメタノールPharmco-Aaper339000000
トリス緩衝生理食塩水(10x) pH 7.5Scy TekTBD999の
びんの上ろ過単位VWR97066-202
Tween 20 (ポリソルベート20)Scy TekTWN500洗浄ステップのための乳化剤として使用される。
リン酸緩衝生理食塩水10倍濃縮液、pH 7.4Scy TekPBD999
LoBindチューブ2.0 mlEppendorf22431102LoBindチューブは、タンパク質とAuNPがチューブの表面に結合するのを防ぎます。
タンパク質LoBindチューブ0.5 mlEppendorf22431064LoBindチューブは、タンパク質とAuNPがチューブの表面に結合するのを防ぎます。
マイクロプレートデバイス UniSealGE Healthcare7704-0001機能性プレートのシールと保管に使用されます。
アッセイプレート、低蒸発蓋付き、96ウェル平底Costar3370
HPLCグレードの水Sigma Aldrich270733-4L
3,3′-ジエチルチアトリカルボシアニンヨウ化物(DTTC)Sigma Aldrich381306-250MGラマンレポーター
mPEG-チオール、MW 5,000 - 1グラムLaysan Bio, Inc.MPEG-SH-5000-1g
OPSS-PEG-SVA, 5,000 - 1 グラム・レイサン・バイオ(株)OPSS-PEG-SVA-5000-1GOPSS-PEG-SVA には NHS エンドがあります。
マウスIgG、全分子制御サーモフィッシャーサイエンティフィック31903抗原
ヤギ抗マウスIgG(H + L)交差吸着二次抗体サーモフィッシャーサイエンティフィック31164
ヒト血清アルブミンブロッキング溶液シグマアルドリッチA1887-1Gウシ血清アルブミンを代わりに使用することができます。
小型遠心分離機Fisher Schientific12-006-900
UV-Vis 分光光度計Thermo ScientificNanodrop 2000c
UV-Vis 分光光度計BioTekSynergy 2
脱塩カラムThermor Scientific87766
社内造 785 nm倒立ラマン顕微鏡ユニットN/AN/A倒立ラマン顕微鏡は、ウェルプレートの表面に適切に焦点を合わせるのに最適です。それ以外の場合は、96ウェルプレートの高さのために非常に低い倍率が使用されます。ベンダーから購入するよりも安価であるため、自社で構築したシステムを使用しました。ただし、市販の倒立ラマン顕微鏡システムであれば、いずれでも使用することができます。
タンパク質チューブチューブ抗体

参考文献

  1. Israelsen, N. D., Hanson, C., Vargis, E. Nanoparticle properties and synthesis effects on surface-enhanced Raman scattering enhancement factor: an introduction. Sci. World J. , e124582(2015).
  2. Wang, Y., Schlücker, S. Rational design and synthesis of SERS labels. Analyst. 138 (8), 2224-2238 (2013).
  3. Wang, Y., Yan, B., Chen, L. SERS tags: novel optical nanoprobes for bioanalysis. Chem. Rev. 113 (3), 1391-1428 (2013).
  4. The Immunoassay Handbook: Theory and applications of ligand binding, ELISA and related techniques. , Elsevier Science: Oxford. Waltham, MA. (2013).
  5. Cox, K. L., Devanarayan, V., Kriauciunas, A., Manetta, J., Montrose, C., Sittampalam, S. Immunoassay Methods. Assay Guid. Man. , [Accessed: 28-Mar-2016] http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92434/ (2004).
  6. ELISA development guide. , [Accessed: 28-Mar-2016] https://resources.rndsystems.com/pdfs/datasheets/edbapril02.pdf (2016).
  7. Israelsen, N. D., Wooley, D., Hanson, C., Vargis, E. Rational design of Raman-labeled nanoparticles for a dual-modality, light scattering immunoassay on a polystyrene substrate. J. Biol. Eng. 10, (2016).
  8. Menges, F. Spekwin32 - optical spectroscopy software. Version 1.72.1. , [Accessed: 28-Mar-2016] http://www.effemm2.de/spekwin/ (2016).
  9. Findlay, J. W. A., Dillard, R. F. Appropriate calibration curve fitting in ligand binding assays. AAPS J. 9 (2), E260-E267 (2007).
  10. Yu, X. Quantifying the Antibody Binding on Protein Microarrays using Microarray Nonlinear Calibration. BioTechniques. 54, 257-264 (2013).
  11. Armbruster, D. A., Pry, T. Limit of blank, limit of detection and limit of quantitation. Clin. Biochem. Rev. 29 (Suppl 1), S49-S52 (2008).
  12. EP17-A2: Evaluation of Detection Capability for Clinical Laboratory Measurement Procedures; Approved Guideline. 32. No 8, Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA, 19087, USA. http://shop.clsi.org/method-evaluation-documents/EP17.html (2012).
  13. Leigh, S. Y., Som, M., Liu, J. T. C. Method for assessing the reliability of molecular diagnostics based on multiplexed SERS-coded nanoparticles. Plos One. 8 (4), e62084(2013).
  14. Sinha, L. Quantification of the binding potential of cell-surface receptors in fresh excised specimens via dual-probe modeling of SERS nanoparticles. Sci. Rep. 5, 8582(2015).
  15. Shi, W., Paproski, R. J., Moore, R., Zemp, R. Detection of circulating tumor cells using targeted surface-enhanced Raman scattering nanoparticles and magnetic enrichment. J. Biomed. Opt. 19, 056014(2014).
  16. Xia, X., Li, W., Zhang, Y., Xia, Y. Silica-coated dimers of silver nanospheres as surface-enhanced Raman scattering tags for imaging cancer cells. Interface Focus. 3 (3), 20120092(2013).
  17. McLintock, A., Cunha-Matos, C. A., Zagnoni, M., Millington, O. R., Wark, A. W. Universal surface-enhanced Raman tags: individual nanorods for measurements from the visible to the infrared (514-1064 nm). Acs Nano. 8 (8), 8600-8609 (2014).

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

再版と許可

タグ

UV Vis TBST HSA
紫外可視およびラマン分光法イムノアッセイプラットフォームを製作
お問い合わせ
図書館への推薦

プライバシー

利用規約

ポリシー

著作権 © 2026 MyJoVE Corporation. 無断転載を禁じます。