環境硬質表面上のノロウイルスの検出と定量のために、マクロフォームベースのサンプリング方法が開発され、評価されました。
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この記事について
サマリー
要約
人間のノロウイルスは、世界的流行と散発的な胃腸炎の主要な原因です。ほとんどの感染はいずれかの環境表面や食品を介して間接的に個人対個人の経路を介して直接広がったりしているため、汚染された媒介物と無生物表面は、ノロウイルスの集団感染時のウイルスの拡散のための重要な媒体です。
私たちは、硬質表面からのヒトノロウイルスの検出およびタイピングのためのマクロフォームスワブを使用してプロトコルを開発し、評価しました。繊維が先端に付いた綿棒や帯電防止ワイプと比較すると、マクロフォームスワブは、最大700 cm 2の便座表面からのウイルス回収（範囲1.2から33.6パーセント）を許可します。プロトコルは、スピンカラムを用いてウイルスRNAのスワブからウイルスを抽出し、さらに濃縮するためのステップを含みます。ノロウイルス胃腸炎がされていたクルーズ船や介護施設での表面から収集された217スワブサンプルの合計で、127（58.5パーセント）RT-qPCRによりGIIのノロウイルス検査で陽性と報告しました。これらの29（22.8％）のうち、正常遺伝子型を決定することができました。結論として、私たちが開発したプロトコルを使用して、環境面でのノロウイルスの検出は、臨床試料が入手できないときに大流行中の環境汚染のレベルだけでなく、ウイルスの検出を判断する際に役立つかもしれ。それはまた、改善戦略の有効性の監視を容易にすることができます。
概要
人間のノロウイルスは、世界的流行と散発的な急性胃腸炎の主要な原因1、2、3です。ウイルスは非常に伝染性であり、送信は、人との対話にまたは間接的に汚染された食物、水や環境表面との接触を介して直接人を介して行われます。ノロウイルスは、長時間流すことができ、環境表面上のウイルスの生存期間の延長は1、2、3に記載されています。ピークの排出時には、ウイルス粒子の数十億は糞便1g当たり放出される、および嘔吐はまた、感染4を引き起こすウイルス粒子の十分な数が含まれている5、6、7、8、EF "> 9、10。また、無生物表面と人間の皮膚との間のウイルスの....
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プロトコル
フィールド1.スワブサンプリング
- 手袋のきれいなペアを着用してください。
- 測定テープや定規を用いて表面に触れることなくサンプリング領域のサイズを測定します。できるだけ正確に面積を推定し、報告書（補足表1）を記入してみてください。
- 可能な漏れやラベルサンプル輸送バッグや綿棒キット用綿棒キットを確認してください。
- 水平方向に1ストローク、垂直方向に1ストローク、および斜め方向の1ストロークを次のようにサンプリングエリア全体に綿棒を移動します。 700センチメートル2よりも大きな表面積を綿棒ないでください。
- チューブに各綿棒を置き、しっかりとキャップを締めます。
研究室への綿棒の2貯蔵および輸送
- 最大48時間、4℃で綿棒を保管してください。長期間保管が必要な場合は、-20℃でスワブを格納する（または-70°C）。
- すなわち、（0-4℃でチューブを保ちます。 、コレクションの24〜48時間以内に研究室や船への輸送の間に断熱容器に）コールドパックを使用します。
3.ウイルス濃度、ウイルスRNA抽出および精製
注：特に明記しない限り、すべての遠心分離工程は、室....
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結果
図1は、スワブサンプリングプロトコルを示すフローチャートです。このプロトコルは、4つの主要なステップで構成されています。 1）サンプル収集、2）サンプルの保管および輸送、3）ウイルスRNA精製および濃縮し、4）RT-qPCRのアッセイおよび遺伝子型決定。
図1：ノロウイルスの環境表面サンプリングのための最終的なプロトコルのフロー・チャート この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
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ディスカッション
ノロウイルスは18と10 3ウイルス粒子20との間に50％のヒト感染用量を持っています。したがって、表面のも低レベルの汚染は、公衆衛生上のリスクをもたらすことができます。 1）異なるスワブ材料、2）貯蔵条件スワブ輸送の間、3）ウイルスRNAの濃度、及び4）大腸菌ファージMS2内部抽出コントロールとして：スワブサンプリングプロトコルのいくつかの側面を含めて評価しました。
最近まで、綿、ポリエステル、ナイロンなど）ワイプ帯電防止から作られたスワブの唯一の性能が評価されたフィールドの使用13、14、15、21、22のために提案されています。これらのうち、綿棒は、ノロウイルスおよび肝炎食品調理面と媒.......
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開示事項
著者には相反する利益はありません。このレポートの調査結果と結論は著者のものであり、必ずしも米国疾病予防管理センターの公式見解を表すものではありません。
謝辞
著者には謝辞がありません。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| キットの一般名 | |||
| strong> | Premoistened EnviroMaxスワブキット | ピューリタン | 2588060PFUW |
| RNA 溶解バッファー | CDC UNEX buffer | Microbiologics | カタログ番号 MR0501 |
| RNA 抽出 スピンカラム | midi カラム | Omega Biotek | カタログ番号 R6664-02 |
| RNA 精製スピンカラム | Zymol RNA クリーン&コンセントレータキット | Zymo Research | カタログ番号 R1016 |
| リアルタイム RT-PCR キット | AgPath キット ワンステップ RT-PCR キット | ライフテクノロジー | カタログ番号 |
| 4387391従来の RT-PCR キット | Qiagen ワンステップ RT-PCR キット | Qiagen キット | Cat No |
| 210212Gel extraction kit | >Qiagen QIAquick gel extraction kit | CatNo 28704 or 28706 | |
| Coliphage MS2 | ATCC | Cat No 15597-B1 | |
| RNAランオフ転写産物 | |||
| リアルタイムPCRプラットフォーム | Applied Biosystems | Model ABI 7500 | |
| Optical 96-well reaction plate | Thermo Scientific | Cat No 4316813 | |
| MicroAmp透明粘着フィルム | Thermo Scientific | Cat No 4306311 |
参考文献
- Isakbaeva, E. T., et al. Norovirus transmission on cruise ship. Emerg. Infect. Dis. 11, 154-158 (2005).
- Lopman, B. A., Gastañaduy, P., Park, G. W., Hall, A. J., Parashar, U. D., Vinjé, P. Environmental transmission of norovirus gastroenteritis. Curr. Opin. Virol. 2 (1), 1-7 (2011).
- Malek, M., et al.
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再版と許可
