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方法論記事

多光子顕微鏡によるライブセルイメージングのための大人のトランスジェニックゼブラフィッシュ網膜外植片の文化

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DOI:

10.3791/55335

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2017年2月24日

 ,  ,  , 
1Department of Biological Sciences, University of Notre Dame, 2Department of Neurosurgery, Mayo Clinic

この記事について

サマリー

ゼブラフィッシュ網膜再生は、主に固定した網膜を用いて研究されています。しかしながら、このようなinterkinetic核移行などの動的プロセスは、再生反応時に発生し、根底にあるメカニズムを調べるために生細胞イメージングを必要とします。ここでは、多光子顕微鏡を用いてリアルタイムにInterkinetic原子力移行（INM）を監視するために文化や撮影条件を説明します。

要約

内因性の再生プログラムは、神経損傷と死を、次の網膜大人のゼブラフィッシュ（ゼブラフィッシュ ）にミュラーグリアによって開始されます。ミュラーグリア細胞周期を再入力して、細胞分裂のその後のラウンドを受け、失われた神経細胞型に分化神経前駆細胞を産生します。両方のミュラーグリアと神経前駆細胞核は、それらのDNAを複製し、Interkineticとして記載された方法で、網膜、 すなわち、それらは、それぞれ、基礎内顆粒層（INL）及び（ONL）外顆粒層との間の移行の別個の位置で有糸分裂を受けます核移行（INM）。 INMは、主に発展途上の網膜に研究されてきました。詳細にゼブラフィッシュ網膜の再生成人にINMのダイナミクスを調べるために、蛍光標識されたミュラーグリア/神経前駆細胞の生細胞イメージングが必要です。ここでは、単離するための条件や文化の背側網膜を提供しますTgはから[GFAP：nGFP] 35時間一定の強い光にさらされたmi2004のゼブラフィッシュ。我々はまた、これらの網膜培養物を連続的にGFAPの遊走挙動を監視するために多光子顕微鏡を用いて、最大8時間の網膜外植片の厚さ全体にわたってzスタック画像を取得し、生細胞イメージング実験を行うために実行可能であることを示している。nGFP陽性細胞。また、我々は、頂端および基底INMの速度を決定するために、ポスト画像解析を実行するための詳細を説明します。要約すると、我々は、神経再生の成人モデルにINMのダイナミクスを研究するための条件を確立しました。これは、この重要な細胞プロセスの我々の理解を進め、私たちはINMを制御するメカニズムを決定することができます。

概要

ヒトとは異なり、ゼブラフィッシュ（ ゼブラフィッシュ）は、網膜神経細胞1、2、3、4の細胞死の際に強固な再生応答を示します。腫瘍壊死因子α、網膜神経細胞が死ぬから放出されるシグナル伝達分子が網膜の基底内顆粒層（INL）に存在するミュラーグリア細胞を誘導し、5を増殖し、神経細胞に分化する前に増殖し続ける神経前駆細胞を産生します2死亡したタイプ、3、4。再生応答の増殖期の間に、ミュラーグリアの核とその派生神経前駆細胞は、細胞周期（Interkinetic原子力移行、INM）6と同位相の繰り返しの移動パターンを受けます >、7。基礎INL内に配置核が生じる核がINLに基底に戻る前に、彼らは分裂外顆粒層（ONL）に移行する前にそれらのDNAを複製します。生細胞イメージング手法後ザウアー8、9、10、11、12により解釈を確認しながら、このプロセスは、最初に、組織学的方法を用いて、神経上皮開発中に記載されました。両方の組織化学的および生細胞イメージングアプローチはINMと網膜9、11、12、13を含むneuroepithelia開発におけるその機能の根底にあるメカニズムを決定するために使用されています。しかし、網膜を再生する大人にINMを支配するメカニズムはあまり詳細に研究されていません外部参照"> 6、7。ライブセルイメージングは、網膜を再生する大人にINMを制御するシグナル伝達経路の知識を進めるために貴重なアプローチとなります。

最近まで、網膜のINMの生細胞イメージングライブゼブラフィッシュ胚のいずれかに、またはニワトリ胚または出生後のマウスの網膜外植片9、10、11、12、14、15、16に限定されていました。マウス、ラット、およびゼブラフィッシュを含む様々な種の成体動物からの網膜外植片は、異なる細胞生物学的手法17、18、19、20、網膜外植片を、HAを用いて、生細胞イメージング実験のために利用されてきたがVEのは時間の期間を短時間に制限され、数時間21、22にわたって連続的に実行されていません。ここでは、多光子顕微鏡6を用いて、生細胞イメージング実験の監視INMを実行するために培養光損傷を受けた大人のゼブラフィッシュ網膜に詳細なプロトコルを記述します。 INMのダイナミクスとして、 例えば、速度はむしろ、潜在的に免疫細胞化学を用いて検出されない有糸分裂の場所、より影響を受ける可能性がある、INMを制御するメカニズムを調査する際ライブセルイメージングアプローチは免疫組織化学的方法よりも有利です。

将来的には、この方法はまた、ミュラーグリアまたはミクログリアの行動によって、このような瀕死の光受容体の食作用などの網膜再生中に他の動的プロセスを研究するように変更される可能性があります。

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プロトコル

注：ゼブラフィッシュが発生し、フライマンライフサイエンスセンターのノートルダムゼブラフィッシュ施設で維持しました。この原稿に記載されている方法は、ノートルダム動物実験委員会の大学によって承認され、ビジョンと眼科での研究のための協会ビジョン研究における動物の使用に関する声明に準拠しているされています。

1.ソリューション

  1. 組織培養フードに移し、組織培養フードおよび任意の機器/試薬を滅菌するために70％エタノールを準備します。
  2. （：500 2-フェノキシエタノール1）システム1Lの水に2-フェノキシエタノールの2 mLを加え。
  3. 0.1 mMの炭酸水素ナトリウム、pHが8.0を準備します。滅菌組織培養フード内の溶液を滅菌するために10 mLシリンジおよび0.2μmの細孔サイズのシリンジフィルターを使用してください。
    注：NaHCO 3を効率的にfluorodishesのカバーガラスの表面を横切る細胞および組織接着剤を拡散するために使用されている（参照ステップ3.2）。
  4. 1.0 MのCaCl 2および1.0 MのMgCl 2を準備します。 10 mLシリンジ、滅菌組織培養フードで0.2μmの細孔サイズのシリンジフィルターで滅菌します。
  5. Hank'sバランスのとれた塩溶液（HBSS）を調製するために、1 mMの各の最終濃度で、フェノールレッドを含まない、2+ / MgのCa 2+をすることなく、1×HBSSに無菌のCaCl 2および滅菌のMgCl 2を追加します。無菌環境で動作します。
  6. 50％フェノールレッドなしの1×最小必須培地（MEM）、25％のCaCl 2およびMgCl 2を含有する HBSSは（セクション1.4を参照）、25％ウマ血清（HS）、10単位/ mLペニシリン、および10を混ぜ、培養液を調製するために、 / mlのストレプトマイシン。無菌環境で動作します。
    注：これにより、信号対雑音比に影響を与え、それはautofluorescesとしてフェノールレッドを含む培地を避けてください。 23
  7. フェノールレッドを含まない1×MEM中の1％低融点アガロースの10ミリリットルを準備します。マイクロWを用いてアガロース/ 1×MEMを溶かしますAVE。流体蒸発によるイオン濃度を変更します繰り返し再加熱としてアガロース（ 例えば、10 mL）での小さなボリュームを準備します。
  8. 培養に先立ち、オートクレーブで1.5 mLのマイクロ遠心チューブを滅菌します。

2.ライト損傷パラダイム

  1. 暗順応
    1. 14日間光を欠く環境中に年齢の14ヶ月- 6でmi2004のゼブラフィッシュ（または関心のある他のトランスジェニックゼブラフィッシュ）：3のTg [nGFP GFAP] - 2を配置します。さらに詳細については、参照2、6、24、25を参照してください。
  2. 2800ルクス2、6、24、25の光を発する2の蛍光ランプ間のシステム水中の3暗順応トランスジェニックゼブラフィッシュ- 2を収容するタンクを配置します。
  3. 35時間、一定の強い光にゼブラフィッシュを公開します。 33℃ - 露光時に、水温が31との間に維持されることを保証します。

培養のため3.準備（網膜分離の日に）

  1. 70％エタノールを用いて、組織培養フード及び組織培養フード中に移すコンポーネント/ツール滅菌（ 例えば、MEMおよびHBSSを含有するフラスコを、ピペット、滅菌ピペットチップ、 等 。）。
  2. fluorodishesの調製
    1. 細胞および組織接着剤で各網膜のためのコート1 fluorodish（ 材料の表を参照してください）。
    2. 、70μgの/ mLの最終濃度0.1 mMの炭酸水素ナトリウムで細胞や組織接着剤を希釈し、各fluorodishに50μLを追加し、200μLのピペットチップでfluorodishのセンター全体のソリューションを広げる（約1〜1.2センチメートル直径）。
    3. 室温で3時間 - 1のためにコーティングされたfluorodishesをインキュベート;（あるいは、4℃でO / Nインキュベート）。
    4. 溶液を除去し、それぞれの洗浄のための1×MEMの500μLで3回すすいでください。網膜の外植片がマウントされるまで乾燥からコーティングされたfluorodishesを回避するために、MEMでそれらを維持します。
  3. ステップ1.6で説明したように、培養培地を準備します。培地は4℃​​で1週間まで保存することができます。

網膜外植片の4単離および培養

注：以下に概説するプロトコルは、主に説明し、光損傷のパラダイムによって病変れる網膜領域である背側網膜の単離のためです。したがって、損傷誘導性増殖およびinterkinetic核移行の関連イベントは、背側網膜に発生します。しかし、単離手順は、研究/調査質問の特定の要件に応じて、網膜の領域を生じるように調節することができます。

  1. 1つの光損傷を受けたトランスジェニックゼブラフィッシュaを安楽死させます500 2-フェノキシエタノール：1で時間ta。
  2. 流体遺跡の薄膜のみように千μLピペットで1 fluorodishからMEMを削除します。
  3. 乾いたペーパータオルの上にゼブラフィッシュを転送し、デュモン鉗子の湾曲した一対の目を削除する（鉗子＃5、45°の角度）とfluorodishにそれを転送します。
  4. 視神経と目の奥が見えるように実体顕微鏡を用いて、（ 図1D）fluorodishのカバースリップ上に瞳と目を向けます。
  5. マクファーソン・Vannasはさみのペアで、目の奥に近い切断、視神経を削除します。また、目の外側を裏打ちする結合組織を除去します。
  6. 篩板を通して1はさみの刃で突き刺しと鼻と目の一時的な両側に沿って切断することにより、眼茎で切開をしながら＃5ピンセットでその鼻と時間的側面との間に目を保持する（ 図1Eを参照してください。 、セグメント化された李ね）。
  7. ＃5鉗子、組織を引っ張って、背側網膜から腹側を分離するために、網膜および他のペアの背側を保持するための1の2ペアを使用。
    注：それは強膜を上向きにしている間にレンズと神経節細胞層は、カバースリップを向くように背側網膜を配向することをお勧めします。
  8. ＃5鉗子（ 図1H、I）の第二の対と網膜に接続されているレンズを保持しながら、＃5鉗子の一組と背側網膜から強膜を削除します。
  9. レンズを削除するには、マクファーソン・Vannasはさみを使用して、網膜（ 図1I、J）を損傷することなく、レンズの後ろにカット。時には、レンズは、ステップ4.7で分離します。この場合、＃5鉗子の第二の対でカットエッジで網膜を保持することによって、ピンセットで慎重に強膜を削除します。
  10. 網膜に損傷を与えることなく、レンズを除去しながら硝子体を除去します。カバースリップが直面している神経節細胞層で網膜を平らfluorodishの（ 図1L、M）。
  11. 1％低融点アガロースの10μLで網膜を囲むアガロースを固化させます。
  12. わずかな上昇は組織に深く集中する能力に影響を与える可能性があるように、液体アガロースが網膜を持ち上げていないことを見ます。リフティングが観察される場合には、アガロースを除去するために、ピペットを使用しています。さらに追加しようとする前に、残留アガロースセットをしてみましょう。
  13. 全体fluorodishをカバーするために、1％低融点アガロースを添加する前に数回繰り返しステップ4.12。アガロースが固化した後、1.5 mLの培地を加えます。
  14. 網膜が単離手順により被ったストレスから回復できるようにするために約12時間32℃に設定し、5％CO 2 /空気環境における網膜移植片培養を維持します。 （ステップ2.3参照）、光処理されたゼブラフィッシュと同じ温度で網膜を維持するために、32℃に温度を設定します。

5.多光子顕微鏡

注：この原稿に行われた実験では、赤外レーザ（ 材料の表を参照）、40Xアポ長距離水浸対物レンズ（1.15 NA）を装備した多光子顕微鏡、ガルバノスキャナとのために最適化されました4 35ミリメートルペトリ皿のためのインサートを含んで環境室。画像は、非デスキャン検出器（R-NDD）で取得しました。

  1. 画像化の前に、5％CO 2 /空気の雰囲気を達成するために、環境チャンバを平衡化します。空のペトリ皿が部屋にガスの漏れを回避するために、ホルダーに挿入されていることを確認します。
  2. 顕微鏡システムの電源をオンにします。
  3. 環境室が平衡化されると、40Xアポ長距離水浸対物レンズ（NA 1.15）上に屈折率液体を追加します。
    注：水と同様の光学特性を有する屈折率液体は、長期の撮像中の水の蒸発を回避するために使用されます。
  4. 場所インフルエンザ室内への網膜の外植片とorodishes。明視野光を用いて、光路内に試料を配置し、焦点面に背側網膜の中間領域をもたらします。
  5. GFAPに集中するGFP落射蛍光灯を使用します。nGFP陽性ミュラーグリア核（ 図2A、C）。
    注：外植片がフラットマウントまたはアガロース植片の下に蓄積されていない場合、GFAPに集中することが困難になる。nGFP陽性核またはそれらがぼんやりと蛍光を発します。
    1. 同じ網膜外植内の異なる領域に移動すると、フォーカスの問題を克服するかどうかを確認してください。そうでない場合は別の網膜外植片に移動します。
  6. 画像取得ソフトウェアでは、「A1 MP GUI '、' TiPad '、' A1コンパクトGUI」と「ND取得」ウィンドウを開きます。多光子イメージングのために、「IR NDD 'オプションが "A1コンパクトGUI」で選択されていることを確認してください。
  7. 「設でグラム'フィールドは、1 番目のダイクロイックミラーのためのIR-DMを選択し、GFP蛍光を取得するために50分の525バンドパスフィルタを選択します。
  8. 「A1MP GUI」というウィンドウのIRレーザーのスイッチをオンにします。レーザーは準備ができているのは数分かかります。 GFPの蛍光を励起し、「A1 MP GUI」ウィンドウで「自動整列」ボタンをクリックすることで、レーザーを整列させるために910 nmの波長を設定します。
  9. 部屋や設備のライトが光電子増倍管の露出オーバーを避けるために、「A1 MP GUI」でシャッターを開く前に、オフにするか又は覆われていることを確認してください。ノイズレベルを低減するために、暗くした環境で顕微鏡を収容します。
  10. 2のズーム、4.8マイクロ秒/ピクセルの時間を住居ピクセルで、300×300ピクセルの視野の画像を取得します。大体「A1MP GUI」の「取得領域」と「A1コンパクトGUI」ウィンドウでゲインを変更することにより、レーザパワーを設定します。
  11. zスタックの設定
    1. ND取得]ウィンドウ」内のZ 'サブウィンドウ」にzスタックの最上位焦点面を設定するには、神経節細胞層に焦点を当てています。いくつかのGFAP：nGFP陽性細胞は、典型的には、網膜（ 図2A、D）の基底限界を識別するのに役立ちます神経節細胞層、内に配置されています。
    2. ぼんやりとラベルされたGFAPが存在することを特徴とするONL（ 図2A、B）、のレベルを通って焦点面を移動：INL（ 図2A、C）における対応へのラウンドと拡大相対的なものでnGFP陽性細胞。
    3. zスタックの底として、この平面を設定します。全体のONLを撮影されていることを確認した （ 図2A、B）。
    4. 撮像期間中に再調整を必要とするフォーカルプレーンシフトを経験すると、「ホーム」ポジションとしてそれを割り当てるために「Z」サブウィンドウの中間位置をダブルクリックします。 「定義された対称モード」に変更そして、「相対」をクリックします。
    5. 0.7〜1ミクロンの間のzステップサイズを設定します。
  12. Z-強度補正：
    1. 組織の深い層に撮像する場合による光散乱にピクセル強度の損失を補償するためには、z-強度補正を適用します。
    2. 補正を設定するには、「Z-強度補正」ウィンドウを開きます。 「zスタックの範囲 'を設定するには、「NDから」を選択します。
    3. 「Z-強度補正」ウィンドウ（この場合には、神経節細胞層に相当）の一番下の焦点面をクリックして、レーザー強度（ 'A1MP GUI」の「取得領域'）とゲインを設定する（A1コンパクトGUI ）。
    4. その後、選択された焦点面のための「Z-強度補正」ウィンドウで「デバイスの設定」の下に表示され、設定を確認するために、「Z-強度補正」ウィンドウの「Z値」の横にある矢印をクリックします。
    5. 中央のAのプロセスを繰り返しND上部面、レーザパワーと利得を増加させます。必要に応じて追加の焦点面を追加することができます。 4 -図2における実験のための具体的なレーザーとゲイン設定については表1を参照してください。
    6. 「A1 MP GUI」ウィンドウの「取得領域」を設定します。 15より大きい取得領域と光退色と増加したノイズレベルを回避するための撮像開始時の126よりも高い利得を選択することは避けてください。
      注：レーザーと光電子増倍管は、光退色を回避しながら、設定顕微鏡のための最適な撮影条件を得るために、顕微鏡システム、テストレーザーおよびゲイン設定間で異なるように。
    7. 「Z-強度補正」ウィンドウの「相対強度補正]を選択します。
  13. 「ND買収」ウィンドウの「時系列」サブウィンドウでは、8時間の期間と「遅延なし」に間隔を設定します。その後、トンで「ファイル名を指定して実行のz補正」をクリックしてください「ND取得]ウィンドウボタンで彼は 'zスタック」サブ・ウィンドウは3-Dの時系列を取得します。
  14. 画像取得の期間を通じて29°C - 27の温度で網膜外植片を維持します。
  15. 画像取得期間中、必要に応じて、後の画像解析のための画像品質を維持するために電力レベルとゲインを再調整します。 5.11.4 - 調整のための手順5.11.2を実行します。
  16. フォーカルプレーンシフトした場合、一時停止、または実行を停止し、再びステップ5.11を実行してください。
    注：「相対的なz軸補正は「ステップ5.12.7に選ばれたとステップ5.11.4が実行された場合、それは大規模な光退色が発生しない限り、電力およびゲインレベルを再調整する必要はありません。

速度の6.分析

  1. 画像上に「関心領域」を設定し、時間を抽出します。 「時間測定」ツールを使用して、スプレッドシートに時間値をエクスポートします。
  2. ディを含む領域をトリミングvidingのGFAP：nGFP陽性核。
  3. それは、その後分割核は基底INLに関連して、移行距離を測定するための基準点を設定するためにINMを受けない少なくとも一つの核を含むように切り出された領域であることを選択してください。注：基礎INLに残る核を選択するには、それは時系列の3次元再構成を準備するのに役立ちます。
  4. GFAP場合は別の方法として、：nGFP陽性細胞は、取得期間を通じてONLで観察され、基準点を識別するために、基礎INLとONL核から及ぶ固定長の垂直線を使用しています。
  5. 「ショースライスビュー」機能を使用して、直交投影を生成します。続いて、「最大値投影 'から'スライス」からモードを変更します。
  6. 直交最大投影の「XY」ビューをオフにします。遊走/除核は、最高の見えるれる向きに応じて、LSO 'xz'-または' yz'-ビューのいずれかをオフにします。
  7. マウスの右ボタンで残りの画像をクリックして、このビューから新しいドキュメントを作成 '関数' XZ 'または'とyz'画像シリーズ」を抽出します。必要に応じて、画像を回転させます。
  8. 「手動測定」機能を使用して、基底INLのままで、INM受けない核の一番下のレベルで、画像の水平線を引く（=基準点を、 図4（a） - E、赤い水平線）。
  9. （ - E図4Aを参照）基準線と解析ソフトウェア'線測定」ツールを使用して、時系列のための移行核の基底点間の距離を測定します。
  10. 核膜が故障したら、それは全体の細胞内へのGFPの拡散、次の識別可能である場合、ソーマの基礎位置を測定します。
  11. 表計算ソフトを使用して、距離にNUをプロットcleusは時間経過した （ 図4F）に対して移動しました。
    1. 発生（V a）は 、グラフ距離が核膜崩壊までの期間のために旅し、頂端移動速度（ 図4G）を決定すること。
    2. グラフ内のデータ系列を選択し、マウスを右クリックして、該当する機能は「y = MX + C 'を含む線形回帰曲線を挿入します。関数内の傾き「m 'は速度を表し、V（ 図4G）。
    3. 繰り返しは、基礎移行速度を決定するための迅速な基礎移行の第一段階のための6.11.1と6.11.2ステップ、V Bは（ 図4H）。

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結果

図1に概略的に概説した手順に従って、網膜の単離は、光損傷を受けた大人のTgから平らに背側網膜の培養を可能にする[GFAP：nGFP] 5％のCOで少なくとも24時間にわたってmi2004ゼブラフィッシュ2 /空気環境。これらのフラットマウントされた網膜外植片を深部組織レベルでの画像の焦点面に使用することができます。例は、ミュラーグリア/光損傷した網膜における有糸分裂の間ONLに位置しているミュラーグリア特異的プロモーターのGFAP（グリア線維性酸性タンパク質）からのGFPで標識された神経前駆細胞核（ 図2A - D、3）。下の桿体にEGFPを表現NT19ゼブラフィッシュの目：さらに、このアプローチは、様々な網膜細胞層の画像にも適用可能であることを確認するには、急性孤立した網膜の外植片が損傷を受けていないのTg [Eco.Nf...

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ディスカッション

損傷した成体ゼブラフィッシュ網膜主に使用される免疫細胞化学的方法5、25、26、27、28、29、30の再生を支配するメカニズムを調べる研究。文化網膜外植片に条件を確立し、そのようなINM等の現象、上のライブセルイメージングを行うために、私たちの深さで空間的、時間的な情報を得るための技術を提供します。この技術は、移動速度を決定する核エンベロープの有糸分裂の前期の間の破壊および細胞分裂の長さと位置のタイミングと位置を可能にします。また、それらの後続の位置に関して分割面と生じる娘細胞の運命を確立することが可能です。最終的に、この強力なアプローチがMかどうかを決定します2;充填剤のグ...

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開示事項

著者らは、開示することは何もありません。

謝辞

我々は、ウィリアム・アーチャーとノートルダム統合イメージング施設によって提供されるサポートに感謝しています。特別な感謝は彼らの継続的な支援とそのケアやゼブラフィッシュの飼育のためにフライマンライフサイエンス技術者を対象としています。この研究は、DRHにNIHの国立眼研究所（R01-EY018417、R01-EY024519）とゼブラフィッシュ研究センター、ノートルダム大学、ノートルダム、INからの助成金によってサポートされていました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
デュモン鉗子#5精密機器14098
デュモン鉗子#5、45°C、角度世界の精密機器14101
マクファーソン・バンナスはさみ世界の精密機器501233
フッ素皿世界の精密機器FD35-100
実体顕微鏡ニコン SMZ-1B同様のタイプの解剖実体顕微鏡は機能します
生物学的安全キャビネットクラスタイプA2Labconco相当タイプは組織
培養インキュベーターさせます ThermoscientificHEPAクラス100相当タイプはシル
バニア蛍光灯OSFP5835HOECOBulbtronics31850
0.2 & micro;m 細孔サイズ Acrodisc シリンジ フィルターVWR4192
10 mL ルアーロック シリンジVWRBD309604
60 mL ルアーロック シリンジVWRBD309653
NaHCO3FischerScientificS233-500
CaCl2ThermoScientificC79-500
MgCl2EMD Millipore5980
HBSS w/o Ca2+/Mg2+, w/o フェノールレッド, GibcoThermoScientific14175-095
MEM w/o フェノールレッド, GibcoThermoScientific5100-038
馬血清, 熱不活化ThermoScientific26050-070
ペニシリン/ストレプトマイシンVWR16777-164
超高純度低融点アガローThermoScientific16520-100
エタノール、絶対ThermoScientificBP2818-4
2-フェノキシエタノールSigma77699
Corning Cell-Tak 細胞および組織接着剤 VWR354240
屈折率液 Cargille Lab1803Y
Nikon A1多光子顕微鏡、MaiTai赤外線レーザーニコン相当システムが搭載、
40X Apo長距離水浸対物レンズ(N.A. 1.15)
環境チャンバー、35mmペトリディッシュ用インサートを装備、Okolab相当システムがNIS
分析ソフトウェアを動作させますニコン
世界のを作動ス

参考文献

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