マウス腸管で胆汁の回腸誘起蓄積

サマリー

小腸依存した胆汁酸再吸収と肝の胆汁酸合成のフィードバック阻害全身の恒常性と健康のために重要です。本研究では回腸誘起胆汁吸収不良、蓄積、およびマウス腸管における毒性評価する回腸切除マウス モデルをについて説明します。

要約

腸管切除は肥満などの疾患、炎症性腸疾患、クローン病、頻繁に下痢を含む胆汁酸, 重度の短腸症候群のような副作用で起因した大腸癌の一般的な治療法脱水、電解質異常、栄養素の吸収不良。回腸、組織コミュニケーションと全身の恒常性の維持を評価するためと呼ばれるマウス回腸切除モデルをご紹介します。回腸切除後循環血液は完全に回腸の内分泌ホルモンの線維芽細胞成長因子 15 (FGF15) その内分泌、肝臓での胆汁酸合成阻害を解放する欠けています。高められた生産と胆汁酸の回腸を削除した後の再廃止と組み合わせて、手術を受けたマウスは腸と関連する下痢、罹患率、死亡率で胆汁酸塩蓄積によって苦しみます。本研究で導入された手術モデルの新しい使用法は生理学および病気の全身の代謝調節の回腸のコントロールに機械論的で機能的な洞察力を提供するかもしれません。

概要

現代の生物医学研究における遺伝子操作動物モデルは人間の病気についての洞察を収集に幅広く活用できます。特に、分子として誘導の生物学的効果を研究する組織や遺伝子の細胞固有の利得と損失関数を使用されています。ターゲット遺伝子体内操作の進歩にもかかわらず残留制限があります。最初、多くのセルまたはティッシュ特定の削除は複数の臓器に影響を与えます。たとえば、上皮の遺伝子欠失は複数組織の上皮細胞における発現を排除します。さらに、削除が特定の組織に制限されている場合でも空間制御はほとんど可能です。たとえば、腸のような組織で異なるセグメントを体内の精密操作ことはできません非常に特定の機能を運ぶ。これらの場合、遺伝子を含む組織の切除は、組織コミュニケーションの機構と機能的意義を決定するより効率的な勉強方法と見なされます。

回腸はクローンのほとんどで使用される患者、回腸遠位部^1,2,3を含む炎症性疾患。回腸は通常生成いくつかのエネルギー貯蔵ホルモン様線維芽細胞成長因子 15/19 (19/FGF15)、ペプチド YY (PYY)、グルカゴン様ペプチド 1/2 (GLP1/2);これらのホルモンは、多くの生物学的機能^4,<....

プロトコル

動物のプロトコルに見直された制度動物のケアと使用ケース ウェスタン リザーブ大学医学委員会によって承認し、国立衛生研究所 (NIH) 要項に則って行われたもの、実験動物の管理と使用 (第 8 版、2011)。マウスは、アメリカ獣医医学連合 (AVMA) ガイドラインに準拠した方法で動物の安楽死のため安楽死された (2013 年版)。C57bl/6 j、男性、8-16 週齢マウスは、このプロトコルで使用されました。マウスに 12 h ダーク/ライト サイクル環境で収容された

。

1。 術前準備

1. 24 h 手順の前にきれいなケージに移動マウス。動物の水への無料アクセスを許可します。ソフト食 (ゲル栄養補助食品) の食事食品に置き換える手術のため小腸の内容を減らすために手術前に 4-6 h
。
2. はすべて手術器具を滅菌し、単回使用の滅菌手術材料を準備します。手術エリアと 70% のエタノールで麻酔の鼻の円錐形をきれいします
。
3. は、解剖顕微鏡、イソフルラン麻酔気化器、楽器、温度制御小動物外科テーブル温度維持を設定します。手術中に無料のアクセスのための場所に注射器、縫合糸、楽器を整理します
。
4. 外科領域に十分なライトを提供する光源を設定します
。
5. 腸管と腹壁のクリーニング用 5 mL 注射器で生理食塩水 0.9% を準備します
。

結果

回腸の手順は図 1のとおりです。最初のステップでは、マウスの腹部の皮膚を準備して、腹部の切開・ リトラクターを使用して (図 1A ~ C) 腸を完全に公開するも含まれています。次に、マウスの盲腸に位置していた (図 1D)。考えるとそのサイズと形状は、わかりやすいランドマークです。盲腸、回腸遠位空腸の一部が露出、腹部キャビティ (図 1D) から削除します。回腸切除範囲が決定され、セグメントに血液を供給上腸間膜動脈を結紮し、回腸のセグメントの色が急速に腸の残り中濃い紫色 (図 1E ~ F) に変更通常ピンク色を維持します。全体の虚血性回腸は.......

ディスカッション

成功した回腸を実行するために、切除範囲のセグメントへの血液供給をブロックする前もっての上腸間膜動脈を結紮する必要があります。虚血性回腸結紮後濃い紫色になります。回腸のセグメントを完全に切除しする必要があります。正常な血液供給は、保持の目的のために確保されなければなりません。これは、簡単に縫合後虚血性壊死のための原因手術失敗できる出血と不適切な除去を避けるために不可欠です。吻合中の自然な解剖学的位置で回腸末端を一緒に参加することが重要です。腸間膜は、ツイスト終了の潜在的な発生を回避する最初の縫合に最も信頼性の高いランドマークと見なされます。回腸端の側の 2 番目の縫合後 2 つの端は彼らの自然な解剖学的構造に従って配置されます。腸吻合術後後吻合部の領域の色をチェックする必要があります。地域は通常、通常ピンク色を示します。手術後紫エリアなら、縫合帯に虚血が苦しんで可能性があります。これは虚血性セグメントの不完全な切除または縫合しながら 2 つの端のねじれが原因かもしれません。これらの条件の下で手術をしてすぐに解決します。

回腸手術の合併症は胆汁酸吸収不良による毒性、術後イレウスや縫合で.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
解剖顕微鏡	オリンパス	SZ61	手術用
動物温度調節器	Physitemp Instruments, Inc.	TCAT-2LV	体温調節用
イソフルラン麻酔気化器	VetEquip	911104	麻酔用
解剖鉗子	ファインサイエンスツールズ株式会社	11274-20	手術用
ハサミ	ファインサイエンスツールズ株式会社	14084-08	手術用
ニードルホルダー	ロボズ手術器具株式会社	RS-7882	手術用
マイクロナイフ-針刃	フィッシャーサイエンティフィック	10318-14	手術用
6-0 モノフィラメント縫合糸	Ethicon	1698G	腹部の皮膚閉鎖用
7-0 シルク縫合	Ethicon	766G	結紮用
8-0 モノフィラメント縫合	Ethicon	1714G	吻合用
サージカルスポンジ	Dynarex Corp.	3333	手術用
小さな綿の先端のアプリケーター	フィッシャーサイエンティフィック	23-400-118	手術用
イソフルラン	Piramal Healthcare Limited	66794-013-25	麻酔薬
ブプレノルフィン塩酸塩	Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals	12496-0757-1	鎮痛剤
用 0.9% 塩化ナトリウム 注射	B. Braun Medical Inc.	0264-7800-10	洗浄・注射用
ポビドンヨウ素調製液	ダイナレックス(株)	1413	皮膚の準備
Puralube獣医軟膏	Dechra獣医製品	17033-211-38	目のふりのために
脱毛ローション	教会&ドワイト株式会社		皮膚の準備
用 集中治療室	ThermoCare	FW-1	術後の回復用
DietGel recovery	ClearH2O	72-06-5022	手術後の回復用
Aurum total RNA fatty and fibrous tissue kit	Bio-Rad	7326830	For RNA isolation
iScript reverse transcription supermix for RT-qPCR	Bio-Rad	1708841	For逆転写アッセイ
TaqMan fast advanced master mix	Applied Biosystems/Life Technologies	4444965	QPCR解析用
総胆汁酸アッセイキット	ジェンザイム診断	DZ042A-K01	胆汁酸アッセイ用
C57BL/6J	ジャクソン研究所

糸