クリーニング ステンレス鋼表面の不潔による医薬品業界における検証の失敗

非専用装置の清浄度は、中間体の製造に使用するための後続のリリース前に検証すべき、クロス汚染を防ぐために製品に医薬原体 (Api) を変えます。再現性のある、効果的な方法で機器の種類ごとをきれいにするオペレーターを有効にするのに十分な詳細を含める必要がありますクリーニング手順と、これらの手順は、米国食品医薬品局 (FDA) の要件¹によると検証されるべき。不十分なため多数の警告手紙^2,3,4、洗浄の検証方法の検証に失敗したおよびクリーニングの手順⁵は、FDA によって発行されている障害のクリーニング。21 CFR §211.67 は、成功したクリーニングの確認のために必要な要件をについて説明します。

製造装置として同じ表面/仕上げステンレス鋼クーポンに対する検証を洗浄するための分析法の検証は実行こと業界のスタンダードです。ステンレス鋼のクーポン (例えば、50 cm²) を使用して、研究室での検証実験を洗浄するための装置の表面を表します。開発とこれらの分析法の検証は、目的 (すなわち装置の表面から回復させるべき残基) の標本が最大許容繰越 (マコ) 制限によって決まりますステンレス クーポンにターゲット残渣でスパイクです。このレベルは、健康への有害影響 (なし-観察-副作用-効果-レベル NOAEL) を患者が公開を取得制限として定義される許容暴露限界に基づいて決定されます。

アナリストや、拭き取りを行う製造者は、リカバリの誰が、拭き取りを行うに関係なく再現性を確実にする構造化された手順に従う必要があります。プロシージャする必要があります明示的に綿棒タイプの詳細、綿棒の数使用する希釈剤、溶剤の使用量、正確な抜本的なパターン、サンプル、検出 (紫外、蛍光、質量分析装置、全有機炭素、等) の方法、綿棒の頭から素材の抽出技術のかみ/抽出時間の量、サンプリング表面に適用されているストローク数、など。

サンプル回復、クーポンの表面およびこうして、機器の表面に影響を与えるすべての要因以外にも役割を果たします。表面上の材料の薄膜の蒸着又はステンレス鋼 (例えばFe、Cr、Ni) 内の要素の 1 つ以上の酸化状態の変化により、クーポンの表面を変更可能性があります^6,7,8。元の状態に戻るステンレス クーポンの表面の再生は、定量的なスワップ ・ プロセスの成功に不可欠です。ステンレス鋼クーポンが正しく処理されなかった場合、研究は、アナリストにもう一つ、別の薬や様々 なスパイク レベル^9,10,11を含む回復の変動を示した。1 枚のクーポンで 10 複製の回復で標準偏差はできます最大 14%、5 クーポン⁹26% です。複製の数を増加または増加するクーポン使用時 (すなわち、同じクーポンでスパイクの 5 回ではなく 5 クーポン)¹¹の数に相対標準偏差 (S_rel) 値が増加したことに注意することが重要です。このような場合、ランダムなゆらぎとして変動を解釈できません。それにもかかわらず、その結果が私達の見つけることによって説明できるクーポンの表面の清浄度回復に影響すること。このペーパーで説明した結果回復結果の大幅な増加を示すし、正しくステンレス クーポンの表面を洗浄した後の変動の減少します。

きれい場所 (CIP) は、最小を含む装置の表面またはない装置の分解洗浄を自動化する手段です。CIP 洗浄プロセス、中に有機・無機の残基を削除する酸の順で連続洗浄の定義されているプロシージャが実行されます。界面活性剤、キレート化合物、又は錯化剤は通常機器の表面からすべての製品の洗浄の効率を高めるため CIP ソリューションに追加されます。洗浄の効率は、洗浄時間、温度 (通常 60-80 ° C)、汚染型、およびパーツ¹²をきれいにハードの存在、選択と (すなわち型、ベース、酸と界面活性剤の組成)、CIP 液の濃度を含むいくつかのパラメーターとは異なります。医薬品の種類に基づき、100 や 200 の CIP ソリューションは、製造装置の洗浄に使用される CIP プロセスをシミュレートするので、検証を洗浄に使用されるステンレス鋼クーポンをクリーニングに使用する選択されています。

本研究は、ステンレス鋼クーポンの表面から残留する医薬品の回収に影響を与えるさまざまな要因の影響を報告し、抗体・治療用タンパク質は、小分子分析の洗浄法開発のベスト プラクティスをお勧めします。クーポン表面きれいに一貫して明確に定義されたプロシージャの欠如は、低と変数の回復に大きく貢献として同定されました。クーポンの表面はきれいに正しく¹³時高で再現可能な回復が得られました。

1. サンプル ソリューション

1. 最大許容繰越 (マコ) 治療上の線量基準に基づく薬剤の洗浄の限界 (CL) を計算します。
   注: ここでは、薬物 A の洗浄の限界 (CL) が計算された最大許容繰越 (マコ) 治療上の線量基準に基づいて 50 cm²あたり 2.4 μ g にします。50%、100%、150% の制限をクリーニングでクリーニングの検証が実行されます。2 製剤 (2.5%、60%/w 薬物負荷) のクリーニングの確認が評価されました。

2. クーポンの洗浄手順

1. 最初のアプローチ
   1. きれいに洗浄し、水で二回と二度あらゆる残留の沈殿物を除去するためにメタノール 10-15 s の表面を拭くクーポン。メタノールは有毒で揮発性の高いフードでこのプロセスを実行します。
2. 高度なアプローチ
   1. きれい場所ソリューションを使用してください。
      1. 室温で、超音波発生装置を設定します。超音波発生装置は電源設定の調整、したがって時間の十分な洗浄効果を与えるに設定されます。
      2. 高速液体クロマトグラフィー (HPLC) グレード水でクーポンの 2 分間超音波。
      3. HPLC グレードの水でアルカリ洗剤溶液を 0.1% のクーポンをつけるし、2 分間超音波。
      4. 高速液体クロマトグラフィー水でクーポンの 2 分間超音波。
      5. HPLC 水の酸洗剤溶液を 0.1% クーポンの 2 分間超音波。
      6. 高速液体クロマトグラフィー水でクーポンの 2 分間超音波。
   2. 酸基過酸化水素を使用してください。
      注: これは酸、基盤、およびアルカリ性と酸性洗剤ではなく過酸化水素を使用して含まれている別の方法です。
      1. 室温で、超音波発生装置を設定します。超音波発生装置は電源設定の調整、したがって時間の十分な洗浄効果を与えるに設定されます。
      2. 水でクーポンの 2 分間超音波。
      3. 0.1 M 水酸化ナトリウムでクーポンの 2 分間超音波。
      4. 水でクーポンの 2 分間超音波。
      5. 0.1 M 塩酸でクーポンの 2 分間超音波。
      6. 水でクーポンの 2 分間超音波。
      7. 0.1 mg/mL NaNo2 のクーポンの 2 分間超音波。
      8. 水でクーポンの 2 分間超音波。

3. 拭き取り手順

1. 両面テープを使用して 250 mL (500 mL) プラスチック ビーカーの底にステンレス鋼クーポンをマウントします。
2. スパイクとプロセスを簡単に拭き取りにビーカーにホールドします。これはまた角を拭き取りときオーバー シュートなどいくつかの望ましくない事故を最小限に抑えます。
3. 肯定的な変位のピペットを使用してクーポンの表面に whirly パターンで特定濃度と定式化 (例えば2.5%/w 薬物 A の負荷で 12 μ g/mL の 200 μ L) で定義済みのボリュームを吹き込みます。
4. クーポンの表面が乾燥するまで待ちます (〜 サンプルの変動に応じて 3 ~ 10 分)。
5. 希釈の 2 ml バイアルに乾いた綿棒を浸し (メタノール: ギ酸 100:0.2/ボリューム)。
6. バイアルの中に綿棒を押すことによって過剰の溶媒を削除します。
7. しっかりとウェット綿棒の片側で合計 50 cm²のテスト領域を一掃するまでも、オーバー ラップのサイド ・ ツー ・ サイド ストロークでクーポンの表面を拭いてください。
8. (ステップ 3.7) 拭くを繰り返して綿棒の同じ側を使用します。
9. クーポンの 4 つの端を 2 回綿棒します。
10. 反対側に綿棒を反転し、クーポン、時計回りまたは反時計回りに 90 ° 回転したがって、90 ° で拭き取りの方向を回転させます。
11. 3.7 3.9 の手順に示すとおり拭き取り動作を繰り返します。表面のサンプリング後溶剤のバイアルにはさみを使用して綿棒の頭をカットします。
12. クーポンの前に選択した同じ方向へ 90 ° を回転させながら第 2 綿棒で拭き取り処理を繰り返します。
13. 5 分の 2 つの綿棒の頭、10 の渦のバイアルを超音波 s。
14. 高速液体クロマトグラフィー バイアルにソリューションを転送し、実用的なソリューションとしてラベルを付けます。

4. 回復の計算

1. サンプル回復
   1. 200 μ L 各 1,800 μ L の希釈液を使用してソリューションをスパイク クーポンを混ぜて制御ソリューションを準備します。
   2. 表 1に示す条件に従って、クロマトグラフィー システムを実行します。
   3. 作業ソリューションのピークの下で相対的な面積に基づいて綿棒作業ソリューションの回復を計算 (A_W) と制御ソリューション (_C)。
   4. 3 つのクーポンで手順を繰り返し、相対標準偏差 (S_rel) と共に平均回収率を計算します。
      注: ここで使用されるすべての分析法は、ICH Q2(R1) ガイドラインに従って検証されました。クロマトグラフィー条件は、材料のセクションに表示されます。

代表的な起因薬物に対する検証を洗浄するための初期の試みは表 2にまとめて。実験セクションで詳細な手順に従ってクーポンを洗浄した前に API/賦形剤、別のアナリストの様々 な比率と同じのアナリストは別の日、別のスパイク レベルで一貫性のない結果が得られました。検証の要件を失敗の結果の一部として、回収率で観測された変動は、対処する必要 (60% < 回復 < 150%) 60% 薬回復の負荷すべてのクリーニングの限界などのように。

表 2にみられる変動の最初のタイプは精度の変動回復結果 (番号を括弧内に記載) の大半に関連付けられている高いSrelから見ることができます。その上アナリストのアナリストの予想される変動 (参照13に示すデータ)、日常が認められ、また変更されていないその他のすべての条件の 1 つのアナリストの (2.5% 薬物負荷時)表 2の最初の 2 つの実験に見られるように。50%、100%、および洗浄の限界の 150% の別のスパイク レベルで一貫性のない回復を認めた (Srelを 150% 制限をクリーニングで負荷が 60% の医薬品 16%)、薬物負荷や実験を行うアナリストに関係なく。In addition、異なる API/賦形剤比でも、2.5%、60% の薬剤負荷 (表 2) および参照13報告 50% 薬物負荷変動があった)。低形成与えた平均、最高の回復で、賦形剤がクーポンからの薬剤の回収が強化されたことを示唆します。恐らく 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC)、界面活性剤、有機薬品の複合金属キレートの相互作用からのシールドし、医薬品・賦形剤の比率が低かったときにクーポン表面からの薬物の除去を強化します。

回復を改善するために最初のアプローチ上述の可変性の種類に基づき、抽出方法と一貫性のある、高回収率を得るための実験条件を再開発するためだった。調整パラメーターを含まれている: 技術、希釈剤 (異なる溶剤、様々 な有機/水比があり、異なる酸、酸濃度)、スパイキング溶剤、スパイクと希釈、スパイク技術と綿棒から薬の抽出技術の pH を拭き取りします。相対標準偏差と一緒に 4 つの異なるクーポンの平均回収率はいくつかの実験のため図 1のとおりです。主な結論は、前述の変更のどれもが表 2で以前観察された変動を排除だった。変更された実験的要因に関係なく 1 つのクーポンから別の (Srel) 回復の変動は明らかになったし、いくつかのケースではだった > 20%。実験誤差範囲内でほぼすべてのこれらの実験は統計的に異なる考慮されませんでした。各クーポンの表面に個々 のリカバリと平均の回復 (ΔRecovery) の違いは、図 2のとおりです。平均の回復は別に 1 つのクーポンの表面とは異なることは明らかです。そのため、クーポンの表面は、観測された変動への主要コントリビューターをされる予定です。

回復で以前観察された変動がクーポン-クーポン変動に起因した高確率があった。60% 薬物負荷のクリーニングの実証実験は、同一材料の 4 つのクーポンにスパイク各製剤で 6 回を繰り返され、表面仕上げ、同じベンダーからのすべて。60% 製剤の修復の実験が進むにつれて低回復に向かって一般的な傾向と、別に一つの試験から非常に再現性のある図 3に示す結果から明らかになった。また、この定式化 (図 2) でクーポン間いくつかの違いが認められました。観測された変動が示唆様々 なクーポンの表面ない同一と相互作用別様に行列。

クーポンの違いを最小限に抑えるための最初のアプローチは、クーポンの表面を徹底的にきれいにするだった。図 3の回復を得るために使用するクーポンは、実験のセクションで示した手順に従ってクリーニングされました。クーポンを洗浄後復旧結果は、図 3に掲載されています。回復は別に一つの試験からほぼ再現とクーポンの回復の違いを最小化することは明らかです。

前に、と同じ実験条件下でクーポンを洗浄後の回復の結果の比較を表 2に示します。次の結論を描画することができます: 1) すべての回収率が高い (90-100%); 2) スパイクの各レベルでSrelの値が受け入れられ、以前に報告された結果汚れたクーポン、3) 別に 1 つのスパイク レベルから回復のばらつきが最小化された、4) 製剤の違いでは、回復は影響しなかったよりはるかに小さい。

クーポンは、CIP で洗浄ソリューションが異なる製剤およびスパイク レベルで化合物 B (別の小分子) C と D (大きい分子、すなわち、生物学的製剤) の検証を洗浄するために使用されました。薬物 A の実験から同じ結論は薬剤 B、C、および D (参照13に示す詳細な結果) ために適当だった。高回収率をクーポンの体系的なクリーニングのアプローチを適用することによって分子の大きさと物理化学的特性の間で得た。

図 1.平均 4 つのクーポンから得られた回復。誤差範囲は、4 つのクーポンの 4 つの試験から相対標準偏差を表しています。数を実験: 1)通常スパイク2) 10% ギ酸3)ないギ酸4)スパイク溶液中湯5)高プラセボ割合 (97%)、 6)ないプラセボ7) 、ヘラで綿棒を圧迫8)遠心ステップを追加して9) 0.1 %hcl。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。

図 2.4 つのクーポンから得られた回復 (ΔRecovery) の違い。ΔRecovery は、クーポンでの回復と 4 つのクーポンの回収率の違いです。数を実験: 1)通常スパイク2) 10% ギ酸3)ないギ酸4)スパイク溶液中湯5)高プラセボ割合 (97%)、 6)ないプラセボ7) 、ヘラで綿棒を圧迫8)遠心ステップを追加して9) 0.1 %hcl。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。

図 3.医薬品・賦形剤率 2.5% で薬物 A の回復前に、と洗浄後の変動します。固体の三角形が開かれている間、クーポンをクリーニングする前に回復値に対応してクーポンを洗浄後の回復値に対応するシンボル。誤差範囲は、4 つのクーポンの 4 つの試験から相対標準偏差を表しています。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。

表 1: クロマトグラフィー条件。

表 2.前に、と実験のセクションでの手順に従ってクーポンを洗浄後、別の薬剤負荷のためリカバリをスパイクします。

金銭的な利益や利害の衝突が存在しません。