マウスにおけるブレオマイシン誘発肺線維症の縦断的評価マイクロ CT と蛍光分子トモグラフィーに基づくマルチ モーダル イメージング手法

サマリー

非侵襲的なマルチ モーダル イメージング ブレオマイシンの二重気管内投与によるマウス肺線維症モデルの縦断的評価のマイクロ CT と蛍光分子トモグラフィを用いた手法について述べる.

要約

特発性肺線維症 (IPF)、肺機能、呼吸不全からのそれに続く死の大幅な悪化を引き起こす肺建築の進行性で不可逆的な破壊によって特徴付けられる致命的な肺疾患です。

ブレオマイシン投与による実験動物モデルで IPF の病態を誘導されています。本研究では、二重気管ブレオマイシン投与により誘導されるマウスの IPF のようなモデルを調査します。肺線維症を研究するために使用される標準的な組織学的評価は、ターミナルの侵襲です。この作品の目的は蛍光分子トモグラフィ (FMT) とマイクロ CT などの非侵襲的イメージングによる肺の線維化を監視、します。これら 2 つのテクノロジ組織学所見と検証は、IPF 疾患重症度と進行の実時間非侵襲的モニタリングのための革命的な機能アプローチを表すことができます。さまざまなアプローチの融合を表す IPF 病、どこ FMT と病的な状態で発生する分子のイベントを観察し、マイクロ CT でその後の解剖学的変化を監視できるを理解するための一歩

概要

特発性肺線維症 (IPF) は慢性肺疾患肺機能を診断¹の 4 年以内でしばしば致命的な残念ながら徐々 に減少。IPF の主な機能は細胞外マトリックスの沈着および線維芽細胞増殖が、発症機序はまだよくわかっていません。最もサポートされている仮説は間葉系細胞周期の増殖の変化、線維芽細胞の芽、誇張された蓄積につながる肺胞上皮細胞の破壊、肺傷害の複数のサイクルを引き起こすと増加マトリックス生産。マトリックスメタロプロテアーゼ (Mmp) は、線維化開発人間 IPF、ブレオマイシン誘導動物モデルで調節不全を発見されている、これらのプロセスに関与するメディエーター。制御不能の MMP 生産は模倣した異常な傷修理^1,2肺間質および肺胞腔内アンバランス コラーゲン沈着に します。

薬剤の発見および開発の主要な障害の 1 つは、人間の病態や病気の表現型を模倣するアクセス可能なマウス モデルの可用性です。異なるエージェントは、動物モデルにおける肺の線維化を誘導するために使用されている: 照射損傷、アスベスト、シリカ、fibrinogenic サイトカインやブレオマイシン^3,4の管理の管理しかし、ブレオマイシンは最も使用....

プロトコル

記載すべての動物実験は、学内 Chiesi Farmaceutici とエラスムス MC プロトコル番号の下の動物実験動物福祉委員会が承認した: ヨーロッパの指令 2010年/63 UE の遵守 EMC 3349 (138-14-07)イタリア D.Lgs 26/2014 年と改訂」ガイドのケアと使用の実験動物」²³。

注意: 使用前にローカル ビバリウムの条件に、少なくとも 7 日間順応された女性の近交系 c57bl/6 (7-8 週古い) マウス (部屋の温度: 20-24 ° C; 相対湿度: 40 ~ 70%; 12 時間の明暗サイクル)、標準的な齧歯動物の食事への無料アクセスを持っていることと軟化の水道水。

1. 気管内治療ブレオマイシンをマウスの

1. イントラ気管内投与^12,13,14のための機器を準備します。
2. 酸素と混合 2.5% で設定イソフルラン気化器に接続されている麻酔室にマウスを置きます。つま先ピンチ応答の欠如によって麻酔の深さを確認します。3-5 分後に麻酔の効果が発生しました。
3. 挿管プラットフォーム上麻酔下の....

結果

肺線維化病変の自然消退は、3 週間後に単一ブレオマイシン投与と適度な構造変化はこのモデルの限界を強調表示を観察しました。臨床実習¹⁷を表さない狭い治療ウィンドウによる予防治療のみを実行でした。

ここでは、ダブル ブレオマイシン気管内投与の私達のプロトコルがマウス¹⁸長期的な肺線維症を開発することができることを示します。図 1^19,20,21は、実験的なデザインを示しています。本研究の目的は、非侵襲的イメージング技術を持つマウスの肺線維化の進行を見てすることです。ブレオマイシンは気管内投与を 2 回 (0、4 日で都.......

ディスカッション

現時点では多くの研究グループ新しい薬の開発に焦点を当てて IPF を治療するために、にもかかわらずに、2 つだけは患者に使用できるが。より効果的な療法⁷を見つけることの緊急医療の必要性があるだけ肺 transplantationis 4-5 年の²⁶の生存を延長することができます。トランスレーショナル医学と新しい薬の開発のための必須の前提条件は、IPF のどの介入研究がクリニックでの成功の予測の機能を模倣する動物モデルの可用性です。ただし、既存の肺線維症の動物モデルの有用性はまだ物議を醸す²⁷です。ブレオマイシン¹⁸図 1で説明したようの二重注入を必要とする肺線維症の新しいマウス ・ モデルを開発します。イメージング技術は、病気の進行と治療への薬理学的反応を可視化する強力なツールです。この動物モデルよりよく締めくくっている IPF の人間の機能と非侵襲的技術は臨床設定と臨床

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
FMT 2500 蛍光断層撮影システム	パーキン・エルマー社	エクスペリメンタルビルダー
MMPsense 680	Perkin Elmer Inc.	NEV10126	光から保護し、プローブを4°Cで保管します。C
TrueQuantソフトウェア	Perkin Elmer Inc.
雌近交系 C57BL/6	San Pietro NatisoneHorst, オランダ (UD),		使用前に、動物は少なくとも5日間、局所的なビバリウム条件に順応させました
イソフルラン	ESTEVE spa	571329.8	しないでください
自動セルカウンター	Dasit XT 1800J	Experimental Builder
生理食塩水、0.9% 塩化ナトリウム (NaCl)	Eurospital	15A2807
Quantum FX Micro-CT スキャナー	パーキン・エルマー株式会社
Streptomyces verticillus由来のブレオマイシン硫酸塩	シグマ	B2434
自動ティッシュプロセッサー	ATP700 Histo-Line Laboratories	ATP700
埋め込みシステム	EG 1160 ライカバイオシステムズ	EG 1160
ロータリーミクロトーム	Slee Cut 6062
デジタルスライドスキャナー	NanoZoomer S60、浜松ホトニクス
NIS-AR画像解析ソフトウェア	ニコン
マッソンs Trichrome Staining	Histo-Line Laboratories
10% 中性緩衝ホルマリン	Sigma	HT5012-1CS
ペンセンチュリーモデル DP-4M ドライパワーインファフレーター	ペンセンチュリー	DPM-EXT
PE190 マイクロメディカルチューブ	2biological instruments snc	BB31695-PE/8
注射器 針なし 5mL	テルモ	SS*05SE1	はさみでピストンのボードをカット
ハミルトン 0.10 mL (モデル 1710)	ガスタイト	81022
ディスコフィックス 3 ウェイ ストップコック	ブラウン	4095111
針付きシリンジ 1 mL	Pic solution	3,071,260,300,320	針なしで使用
プラスチック供給チューブ 18 ga x 50 mm	2biological instruments snc	FTP-18-50	先端を斜めにカット

吸入