このプロトコルは pentylenetetrazole と化学的キンドリングの方法を記述しててんかんのマウス モデルを提供します。このプロトコルはマウスのてんかん発作後発作誘導と病態への脆弱性を調査するも使用できます。
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この記事について
サマリー
要約
Pentylenetetrazole (PTZ) は、GABA 受容体の拮抗薬です。Subconvulsive 線量の連続注射化学たき、てんかんモデルの開発に使用されているに対し、動物に PTZ の腹腔内投与は高用量で急性、重症発作を誘発します。PTZ の低用量注射なし痙攣発作を誘発します。ただし、PTZ の繰り返し低用量注射はけいれん発作を引き起こす閾値を低下します。最後に、PTZ の連続の低用量投与は重度の強直間代発作を誘発します。このメソッドは、単純なてんかんのけいれん発作を反復を含む慢性疾患として定義される病態の調査に広く適用できます。プロトコルをたきこの化学物質は、動物の反復的な発作を引き起こします。この方法では、ptz カメラを介した発作やてんかん発作の悪化の程度への脆弱性が推定されました。これらの利点は、抗てんかん薬、てんかん関連遺伝子をスクリーニングするためのこのメソッドの使用につながっています。さらに、このメソッドは、てんかん患者の脳の組織学的変化は、化学焚かれ動物の脳にも表示されますので、てんかん発作後神経損傷を調査する使用されています。したがって、このプロトコルは、便利なてんかんモデル動物の作成に便利です。
概要
てんかんは、慢性神経疾患再発発作によって特徴付けられる、人々 の約 1% に影響を与えます。てんかん患者におけるてんかんと発作の生成の基になるメカニズムは、臨床試験で完全に明らかにできません。したがって、適切な動物モデルがてんかん1の調査のために必要です。
さまざまなてんかん動物モデルは、てんかんの生理学を調査し、抗てんかん薬2,3を識別するために使用されています。これらのモデルの間では、薬理学的発作誘導、てんかん4の病理学の調査のための動物モデルを生成するために使用する一般的な方法です。このメソッドは、安価で簡単です。電極を介したたきは、一般的に使用される方法が、この手順のコストが高いとメソッド反復発作5を誘導する手術や電気のスキルが必要です。
薬理学的誘導は、タイミングと発作の数をコントロールしやすいためにも便利です。自発的な発作を示す遺伝的マウスモデルもてんかんの研究に使用されます。しかし、これらの遺伝的モデルで発作が発生するタイミングと頻度を予測不可能6可能性があります。監視システムは遺伝子改変マウス
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プロトコル
すべての実験手順は、動物のケアおよび使用委員会の東京都医科学研究所によって承認されました。生後 8 - 16 週齢のマウスはお勧めします。任意の交は、実験のため許容されます。C57bl/6 マウス BALB/c とスイスのアルビノ マウス、ptz カメラより敏感に対し ptz カメラより耐性があります。C57BL/6 は、この研究で使用されました。Ptz カメラの脆弱性は、マウスの年齢によっても異なります。若いマウスと比較して、古いマウスは、PTZ35より耐火物。このメソッドに使用される動物の数が異なることが、少なくとも 6-10 動物が条件ごとに必要です。
1. PTZ の準備
- 2 mg/mL PTZ 滅菌 0.9% (w/v) 塩化ナトリウムを溶解します。当日使用の ptz カメラを準備します。
2. PTZ の注入
- 9:00 と 12:00 (正午) の間のすべての実験を実行します。
- 動物の体重を測定します。
- 慣れのため観察室に動物を配置します。
- (3 分) の馴化期間中 PTZ 動物や、以前に決定された投与の体重に基づく注射剤の量を計算します。
注: たとえば、35 mg/kg ptz カメラを使用すると、PTZ の 0.875 mg は 25 グラ....
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結果
PTZ の反復注射は、発作の重症度の増加を誘導します。6 c57bl/6 マウスを施した PTZ と別の 6 マウスは対照群として生理食塩水で扱われました。PTZ 投与量は 35 mg/kg と 10 注射を投与します。発作のスコアは、発作や異常行動を生理食塩水注射 (図 2) でない誘発したに対し、PTZ 注射で徐々 に増加。ボンフェローニ テスト続く分散分析は、PTZ 投与群と生理食塩水投与群間に有意差を示した。
反復発作は異常な軸索分岐形成 (苔状線維芽) と海馬顆粒細胞の異常な移行を促進します。マウスは、(投与量は 24 mg/kg と重度の発作による死亡を引き起こすことがなくマウスで重度の発作を維持するために 35 mg/kg の間調整された) 25 注射用 PTZ と扱われました。マウスの脳は、最後の注射後 3 週間を修正しました。制御脳は、PTZ 注射前に修正されました。脳スライ.......
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ディスカッション
ここでは、てんかんの薬理学的動物モデルの確立のため広くアクセス プロトコルを提案します。Ptz カメラを介した化学たきは長い歴史を持つ、てんかん41の病理組織学的および細胞の病理学の調査のための一般に受け入れられたモデルです。てんかんの化学的キンドリング モデルは Suzdak とヤンセン、1995年42以前見直されました。薬理学的発作誘導、PTZ、とくに、重症発作を誘発簡単でシンプルな方法です。注入量の変化は、発作の重症度と相関します。したがって、PTZ 用量を変更して、結果の動作を調べることによっていくつかの試験に適切な投与量を識別することは非常に簡単です。
多くの研究者がノックアウトまたはノックイン マウスてんかんモデルとして作成し、自発性発作43,44を示すマウスの生産に成功しているしようとしました。ただし、薬理学的発作誘導はまだてんかんの良いモデルを考慮します。.......
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開示事項
著者は利益相反を宣言しません。
謝辞
この作品は、日本学術振興会科研費助成番号 24700349、24659093、25293239、JP18H02536、17 K 07086、文部科学省科研費助成番号 25110737、23110525、アメッド許可番号 JP18ek0109311、洗心医療研究財団と日本によって支えられた部分的てんかん研究の基礎。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| ペンチレンテトラゾール | Sigma-Aldrich | P6500 | |
| 塩化ナトリウム | MANAC | 7647-14-5 | |
| マウス | CLEA Japan | C57Bl/6NJcl, 産後 8 週 オス | |
| シリンジ (1mL) | テルモ | SS-01T | |
| 針(27G x 3/4") (0.40 x 19 mm) | テルモ | NN-2719S | |
| 体重計 | メト | ラーPE2000 | この商品は販売終了製品です。FX-2000iとほぼ同等で、A&のFXi-12-JAを搭載D会社。 |
| パラホルムアルデヒド | Sigma-Aldrich | P6148 | |
| 水酸化ナトリウム | ナカライ テスク | 31511-05 | |
| ペリスタティックポンプ | ATTO | SJ1211 | |
| ショ糖 | ナカライ テスク | 30404-45 | |
| ミクロトーム | マト | REM-700 | この商品は生産終了品です。REM-710とほぼ同等 |
| ミクロトームブレード | フェザー | S35 | |
| トリトン X-100 | シグマ・アルドリッチ | X-100 | |
| 抗シナプ | スポリン抗体 シナプスシステム | 102 002 | |
| 抗ZnT3抗体 | シナプスシステム | 197 002 | |
| アンチダブルコルチン | サンタクルス | sc-8066 | こちらの商品は生産終了商品です。同等品(sc-271390)の試験は行っておりません。 |
| 文脈的恐怖判別試験装置 | オハラ | ||
| 三室試験装置 | 室町 |
参考文献
- Löscher, W., Brandt, C. Prevention or Modification of Epileptogenesis after Brain Insults: Experimental Approaches and Translational Research. Pharmacological Reviews. 62 (4), 668-700 (2010).
- Loscher, W.
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再版と許可
