ラットの両側膝蓋腱損傷モデルの幹細胞療法の評価

サマリー

準備とラットの両側膝蓋腱欠損モデル臍帯マトリックス由来間葉系幹細胞スフェロイドの評価について述べる。このモデルは、未処理と処理の腱との間の違いを検出する発見だったし、2 処置間テスト許容罹患率に関連付けられていた。

要約

再生医療は、伝統的な治療法に挑戦する条件に新しい選択肢を提供します。有病率と罹患率、生物種間の寛解のこの組織の限られた癒しのプロパティと組み合わせて細胞療法に関する検索を求め、その有効性を検討するための実験モデルの開発を推進します。臍帯マトリックス由来間葉系幹細胞 (UCM MSC) は、豊富な簡単に収集、倫理的な問題と奇形腫形成の危険性回避まだ原始胚性幹細胞をもっと密接に類似している魅力的な候補者よりも大人の組織由来の MSCs。 重要な関心は、スフェロイドの形成を通じて MSCs のプロパティを強化する戦略としてキトサンを重視しています。UCM-MSCs を分離するこの紙詳細テクニックはキトサン フィルムの回転楕円体を準備し、表面マーカー式回転楕円体形成の効果を分析します。その結果、キトサン膜上に形成した UCM MSC 回転楕円体の体内注入のラットの両側膝蓋腱損傷モデルの作成を説明します。合併症を認めなかった罹患率に関して研究、ストレス上昇の効果、または組織感染症。7 日手術群の合計機能スコアは正常ラットよりも低かったが、手術後 28 日以内に正常に返されます。組織の治癒の組織学的スコアは、異物反応と 28 日で治癒の進行がないこと 7 日間に評価処理の欠陥で血栓の存在を確認しました。この両側膝蓋腱欠損モデルが許容可能な罹患率に関連付けられているは、未処理の腱とトリートメントの違いの検出を許可各ラットにおける内部統制の作成による個体間変動を制御します。

概要

腱損傷は、種¹にわたって大幅に痛みや筋肉萎縮の最も一般的な原因の 1 つです。獣医学で腱と靱帯損傷は、馬に特別な関心の競走馬のすべての傷害の 82% を含む筋骨格系とそれらの 46% の腱や靭帯の^2,3に影響を与えます。瘢痕形成が癒される腱の力学的特性に影響を与えるし、屈筋腱の傷害後運動の使用へのリターンに守られた予後を説明します再傷害は最大で 2 年以内発生パワードップラーを馬の 67^%4。再生医療は、伝統的な治療法に挑戦する条件に新しい選択肢を提供します。自家幹細胞療法はいくつかの励みになる結果^5,6を生産しているが、組織の採取、細胞の処理/リプログラミングによる遅延管理の影響に関連する罹患率によって制限されます、幹の特性に (年齢) などの患者さんの健康状態は、^{7、8 を}細胞します。これらの制限は、既製の代替として同種幹細胞を調査するための理論的根拠を提供します。胎児の付属器由来の細胞は、倫理的な問題および胚性幹細胞に関連する奇形腫形成の危険性を回避するために魅力的な候補です。胎児の....

プロトコル

ここで説明したすべてのメソッドは、機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) ウエスタン大学の保健学科によって承認されています。

1. 分離とウマ臍帯行列から MSCs の拡大

1. 観察 foaling 後大人の牝馬 (妊娠している) から胎盤を入手して無菌胎盤から臍帯を分離します。おいて臍帯リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) 1% ペニシリン-ストレプトマイシン (P/S) の 4 ° C での転送中に処理まで。
2. 1% と室温 PBS で 2 回臍帯を洗う P/S 50 mL のチューブに。セクション 2 インチ長さ 150 mm の板と P/S 50 mL のチューブの 2 つのまたは 3 回まで血液のほとんどをすすいだ 1% 室温 PBS で洗浄断章に臍帯。
3. 船を公開する縦へその緒を切る。2 動脈、静脈、鉗子、はさみを使用してコードから尿の茎などの血管を削除します。メスで削って 150 mm の板の上にゼリーのようなマトリックスの周囲血管臍帯マトリックス (Wharton のゼリー) を収集し、細かい部分にゼリーをみじん切り。
4. 場所ワルトン 15 ml の PBS の 0.1% (w/v) コラゲナーゼ タイプ IA ソリューションの 50 mL チューブに 2-3 臍帯断片 (約 12-15 g) から。3-4 時間溶解するまで穏やかな揺れで 37 ° C で孵化させなさい。

結果

現在の研究では、平均 ± SD (標準偏差) に結果が表示されます。セルは 6 馬のへその緒から隔離され標準またはキトサンのエアコンの下で各細胞の表面マーカーを表現する分離細胞の割合を比較したフリードマン検定との非パラメトリック解析の分散として繰り返し対策。腱欠損モデル作成用 7 日術後評価 8 ラットを用い、12 ラット 28 日間評価のため使用されました。機能結果の結果は ± SEM (平均値の標準誤差) を意味するように表示されます、t 検定を用いて比較しました。UCM は、その豊富なコレクション、およびその他胎児ソルーション ソース⁴⁰を基準にして優れた拡散性により細胞ソースとして選ばれました。UCM 標準プレート上で培養した細胞には、拡大中の線維芽細胞のような形が維持されます。セルは、キトサン プレート (図 8) で培養したときの回転楕円体を形成しました。

ディスカッション

馬のセルは、最終的に馬の自然な伸張の管理の候補者のアプローチをテストしていきますのでこのプロジェクトに選ばれました。確かに、馬の腱損傷は浅指屈筋と人間⁴¹アキレス腱の生物学的類似性のため男で寛解の自然なモデルとして訴えています。細胞表面マーカー CD44、CD90, CD105、CD34 と MHC II は、細胞、細胞療法⁴²国際社会によって推薦の基準に従って診療に選ばれました。最近の調査で eqUCM MSCs され、CD44 のために肯定的な培養条件に関係なく CD34 と MHC II の負。CD90 の CD105、表面マーカーの発現の点で MSCs の基準を満たすことにより標準的な条件下で培養した細胞も陽性。さらに、本研究は、eqUCM MSCs は、ヒト MSCs^19,20の以前のレポートを確認するキトサン フィルム上培養スフェロイドの形成の最初のレポートです。3 D 細胞培養の技術は何十年も生理学的ニッチに似た.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
PBS 10x	Hyclone	SH30258.01	消耗品
コラゲナーゼ IA型	Worthington	LS004197	消耗品
DMEM 低グルコース	Hyclone	SH30021.FS	消耗品
ウシ胎児血清	ハイクロン	SH30910.03	消耗品
ペニシリン/ストレプトマイシン 100x	ハイクロン	SV30010	消耗品
トリプシン 0.25%	ハイクロン	SH30042.01	消耗品
アキュターゼ	革新的な細胞技術	AT104	消耗品
トリパンブルー	ハイクロン	SV30084.01	消耗品
ジメチルスルホキシド		Σ D2650	消耗品
キトサン	Σ	C3646	消耗品
水酸化ナトリウム	Σ	S8045	消耗品
ウシ血清 アルブミン	ハイクロン	SH30574.01	消耗品
丸底ポリスチレンチューブ	コーニング	149591A	消耗品
マウス抗ウマ CD44 (FITC)	AbD セロテック	MCA1082F	消耗品
マウス 抗ラット CD90 (FITC)	AbD セロテック	MCA47FT	消耗品
マウス 抗ウマ MHC-II (FITC)	AbD セロテック	MCA1085F	消耗品
マウス IgG1 (FITC) - アイソタイプコントロール	AbD セロテック	MCA928F	消耗品
マウスモノクローナル [SN6] から CD105 (FITC)	abcam	ab11415	消耗品
マウス IgG1 (FITC) - アイソタイプ制御	abcam	ab91356	消耗品
マウス 抗ヒト CD34 (FITC)	BD	BDB560942	消耗品
マウス IdG1 κ (FITC)	BD	BDB555748	消耗品
7-AAD	BD	BDB559925	消耗品
BD Accuri C6 Flow Cytometer	BD		機器
Vacutainer 5 mL	Med Vet International	RED5.0	消耗品
酸-クエン酸-デキストロース	Σ	C3821	消耗品
塩化カルシウム		Σ C5670	消耗品
セボフルラン	JD Medical	60307-320-25	消耗品
ラット	チャールズ川	ひずみコード:400	実験動物
ラット手術キット	ハーバード	728942	装置
外科用ブレード #15	MEDLINE	MDS15115	消耗品
ラット MD のバイトリル (2 mg/錠剤)、 リマジル (2 mg/錠剤)	バイオサーブ	F06801	消耗品
ポリグラクチン 910、5-0	エチコン	J436G	消耗品
エオシン アルコール シャンドン	サーモ科学	6766007	消耗品
Harris Hematoxylin	Thermo scientific	143907	消耗品