本稿では、全身ピロカルピン注射によるてんかん重積状態を誘導して無線テレメトリー ビデオと脳波システムを使用して生きている動物の自発的再発性発作を監視する方法について説明します。このプロトコルは、急性発作、てんかん、慢性てんかんの病態生理学的メカニズムを研究するために利用できます。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
この記事について
サマリー
要約
側頭葉てんかん (TLE) は、成人の一般的な神経疾患です。慢性てんかんのトランスレーショナル研究ピロカルピンによるてんかん重積 (SE) が頻繁に自発的再発性発作 (SRS) を要約する選択します。ここでピロカルピンの投与した腹腔内 (群) の無線遠隔測定ビデオと脳波 (EEG) システムを使用して生きている動物の定期的な発作を慢性の監視と SE 誘導のプロトコルを提案する.ピロカルピン注射後 7 日間で 6 週間後ピロカルピン海馬の神経細胞の減少との関係の注意を必要とする顕著な行動の変化を示しました。またビデオと脳波記録用電極注入の実験の手順や頻度の解析、慢性再発性発作の期間について述べる。最後に、我々 はなぜ期待どおりの結果は、それぞれのケースで達成されていない原因をについて説明します。これはマウスのトラブルシューティングのためのガイドライン慢性てんかんのモデリングの基本的な概要を説明します。このプロトコルが慢性てんかんとてんかんの適切なモデルのためのベースラインとして使用できると考えています。
概要
TLE は、最も一般的な取得てんかん1のいずれかです。てんかんを持つ人々 の脳2,3の異常な神経活動の結果として再発発作を経験します。TLE はしばしば難治性ではない、ことを考える、てんかんの開発の基礎となる基本的なメカニズムを理解することが重要です。
人間 TLE の主な特徴を要約することができます動物のモデルは TLE の病態、容易に監視し、てんかんの重要な要因を操作することのより良い理解を提供できます。その中でも、chemoconvulsants 誘起 SE は広く使われている4,5をされています。海馬硬化と堅牢な SRS6,7、8を示しています電気刺激などの他のてんかんモデルとは異なり、chemoconvulsants の全身投与が人間 TLE の臨床病態をまねることができます。すなわち、初期の脳損傷、潜伏期間、慢性てんかんはステージけんしょう SRS....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
プロトコル
すべての実験プロシージャ韓国カトリック大学の倫理委員会で承認され、ケアおよび実験動物の使用 (NIH 出版物第 80-23) 国立の機関健康ガイドに従って行われました。
1. SE 誘導
- 8 週齢雄 C57BL/6NHsd マウスを購入し、それぞれのマウスの重量を量る。その後、マーカーのペンを使用して、SE 誘導中に、簡単に識別できるすべてのマウスの尾をマークします。
- マウスの重量に基づいてスコポラミン臭化メチル (スコポラミン; 2 mg/kg)、テルブタリン hemisulfate (テルブタリン; 2 mg/kg)、塩酸ピロカルピン (ピロカルピン; 280 mg/kg) の量を計算し、生理食塩水 0.9% 食塩水 (10 mL/kg) ソリューションを作成するを追加します。
注:たとえば、マウスの重量が 25 g の場合次に掲げる金額が適用されます: スコポラミンとテルブタリン: 2 mg/kg * 25 g (1,000 g) = 0.05 mg、生理食塩水: 10 mL/kg * (1,000 g) 25 = 0.25 mL、ピロカルピン: 280 mg/kg * 25 g (1,000 g) = 7 mg、生理食塩水: 10 mL/kg * 25 g (1,000 g) = 0.25 mL。 - 30 G の針を用いて 1 mL の注射器にスコポラミンとテルブタリンの....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
結果
成功した SE は、海馬の細胞死および SRS (図 1および図 2) を引き起こすことができます。私たちは SE 発症後 3 h でジアゼパム注入による行動の急性発作を終了し、7 日または 6 週間後マウスを犠牲にしました。
ビデオ脳波モニタリング、SE 後、4 週間でインプラント手術を受けたマウスおよび SRS の場合は SE 発症後 5-7 週間から 2 週間行った。
クレシル バイオレット染色による海馬の細胞死を図 1に示します。SE 後 7 日で異型細胞が検出された海馬歯状回と海馬 (図 1
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
ディスカッション
この仕事は、SE の誘導および慢性発作の評価に関する実験の手順を説明します。
いくつかの要因は、SE 導入に影響を与えます。ラシーンの規模に応じて正確な行動監視は、SRS の開発にとって重要です。頭うなずいて、前肢クローヌス、飼育と落ちるは、開発 SE フェーズ4,16に急性発作の行動特徴。最初の運動発作が検出された後の痙攣の間隔の長さが減少に入る前に SE。また、行動の発作は、ジアゼパム5によって終了しない限り、SE を少なくとも 6 時間持続する必要があります。それは研究者がジアゼパム注射で沈静化に見える行動の発作も、活動は、electrocorticograms、を介して検出することができます発作の持続可能性に注意する必要があることは注目に値するです。SE 誘導が SE と動物の数を大幅に改善できるまでピロカルピン注射後周囲温度を増加しています。また、十分な水分補給、栄養サポート、および重量平均
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
開示事項
著者が明らかに何もありません。
謝辞
この作品は、韓国政府 (NRF 2014R1A1A3049456) によって資金を供給された国立研究財団の韓国 (NRF) 付与と韓国健康技術 R & D プロジェクトを通じて、韓国保健産業開発研究所 (KHIDI) からの助成金によって支持されました。韓国 (HI15C2854) 福祉厚生省によって資金を供給しました。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| C57BL/6 | Envigo | C57BL/6NHsd | |
| ポラミンメチル硝酸塩 | シグマ | S2250 | 10Xストック |
| テルブタリン半硫酸塩 | シグマ | T2528 | 10Xストックピ |
| ロカルピン塩 | グマ | P6503 | |
| ケタミン塩酸塩 | Yuhan | ||
| キシラジン塩酸塩 | バイエル 韓国 | ||
| ジアゼパム | サムジン | ||
| ヒマシ油 (コリファー EL) | シグマ | C5135 | ポリオキシル 35 水添ヒマシ油 |
| 生理食塩水 | ダイハン ファーマ | ||
| 5% デキストロース | Daihan pharm. Co. | ||
| ヨウ素溶液(ポビジン) | ファーソン | ||
| 獣医軟膏(テラマイシン) | ファイザー | ||
| ブルーナイロン | アイリー | NB617 | |
| ムピロシン(ベアロバン) | 大雲製薬(株 | ||
| ケトプロフェン | 三春堂薬学(株 | 5mg/kg | |
| ゲンタマイシン | ヒューオン(株) | 5mg/kg | |
| 1mLシリンジ | 宋新医学株式会社 | ||
| 26ゲージ針 | 宋新医学株式会社 | 26 G * 13 mm (1/2") | |
| 30ゲージ針 | Sung shim medial Co., Ltd. | 30 G * 13 mm (1/2") | |
| カミソリ刃 | Dorco | ||
| Drill | Saeshin precision Co., Ltd. | 207A, 35K (speed) | |
| テレメトリービデオ/脳波システム | Data sciences International. Inc. | バージョン5.20-SP6 | |
| 型送信機 | sciences International. Inc. | ETA-F10 | |
| ネジ | ソンホ鋼 | M1.4 長さ2mmステンレス | |
| Vertex 歯科材料 | Dentimex | ||
| Aceton | Duksan 純薬品有限公司 | CAS 67-64-1 | |
| パラホルムアルデヒド(PFA) | ミリポア | 1.04005.1000 | 4 % |
| ショ糖 | Sigma | S9378 | 0.01 M PBS |
| クレシルバイオレットアセテート | Sigma | C5042 | |
| タノール | EMDミリポア株式会社 | UN1170 | |
| キシレン | Duksan 純薬品有限公司 | UN1307 | |
| 酢酸氷河 | 純生化学 | 品 31010-0350 | |
| FSC33 クリア | ライカバイオシステムズ | 組織凍結用OCTコンパウンド | |
| DPX 組織学用マウント | シグマ | 6522 | |
| 鉗子 | ファインサイエンスツール | 11002-12 | |
| はさみ | ソルコバイオメディカル | 02-2445 | |
| 脳定位固定装置フレーム | デビッド・コップフ インスツルメンツ | E51070012 |
参考文献
- Chang, B. S., Lowenstein, D. H. Epilepsy. N Engl J Med. 349 (13), 1257-1266 (2003).
- Scharfman, H. E. The neurobiology of epilepsy. Curr Neurol Neurosci Rep. 7 (4), 348-354 (2007).
- Rakhade, S. N., Jensen, F. E.
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
再版と許可
