マウス脂肪組織の採取と RNA 解析のための処理

Paul Tan; Émilie Pepin; Julie L. Lavoie

doi:10.3791/57026

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方法論記事

マウス脂肪組織の採取と RNA 解析のための処理

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DOI：

10.3791/57026

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2018年1月31日

Paul Tan¹^,² , Émilie Pepin¹^,⁴ , Julie L. Lavoie¹^,³^,⁴

¹Centre de Recherche du Centre Hospitalier, Université de Montréal, ²Department of Biochemistry and Molecular Medicine, Université de Montréal, ³Department of Kinesiology, Université de Montréal, ⁴Montreal Diabetes Research Center

この記事について

サマリー

本稿の目的は、マウスから異なる白色脂肪組織を収集、脂肪質のサンプルを処理および RNA を抽出する手順を提示することです。

要約

他の組織と比較して、白色脂肪組織は、脂質がほとんど含まれているのでは、下流用リアルタイム PCR および西部のしみなどかなり少ない RNA および蛋白質内容です。これらの脂質を避けるために余分な手順が必要と脂肪組織サンプルからの RNA の隔離も挑戦します。これらのサンプルを処理し、RNA の隔離を実行するマウスから 3 つの異なる解剖学的白色脂肪組織を集めるための手順を紹介します。さらにリアルタイム PCR を用いた cDNA や遺伝子発現実験の合成について述べる。ここに記載されているプロトコルには、動物の毛や組織コレクション中に別の脂肪パッド間の交差汚染と同様、脂肪パッド上の血からの汚染の削減ができます。また、抽出した RNA の十分な量と質を確保するため最適化されています。このプロトコル脂肪組織サンプル、リアルタイム PCR など日常の実験に必要な任意のマウスのモデルに広く応用することができますが、主な脂肪細胞培養からの分離のためのものではありません。

概要

肥満はタイプ 2 の糖尿病¹などの合併症につながることが世界的に流行です。食餌誘導性肥満と遺伝子組み換え動物モデルは、肥満とその関連する合併症で研究に頻繁に使用されます。通常、白色脂肪組織は余分なエネルギーのための収納スペースとして知られている、脂質の構成は主にエネルギーに変える褐色脂肪組織熱²^,³間。脂肪組織は動的と拡大し、食品の摂取量、身体活動など多くの要因によって縮小します。したがって、これらの変更に貢献の要因を決定する適切な脂肪組織の採取と処理が必要な^{4 です}。

白色脂肪組織の間で、皮下脂肪および内臓脂肪質のターミナルを解剖学的局在など異なるプロパティを持つ機能²^、⁵それを一般に認められます。その結果、矛盾する結果や大規模な変動を避けるためには、注意を脂肪パッドを収集するときこれらの異なる脂肪質のターミナル間の交差汚染を避けるために取られる必要があります。

また、白いマウス脂肪組織からタンパク質や RNA を隔離するときの 3 つの主要な課題があります。まず、肥満マウスの脂肪パッドを収集....