エナメル質の形成と変化を理解すると、エナメル芽細胞活性の検討が必要です。ここでは、さらに定量的および定性的な実験プロシージャで使用可能性があります分泌と成熟期エナメル芽細胞を含むエナメル器官のマイクロ分析する信頼性と一貫性のある手法について述べる。
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この記事について
サマリー
要約
環境条件や生活の方法から生じるエナメル質欠損、彼らの高い有病率のため公衆衛生の懸念されます。これらの欠陥はエナメル合成エナメル エナメル器官であるという責任がある細胞の活性変化に起因します。、エナメル質形成におけるエナメル芽細胞増殖、分化、死のイベントの具体的かつ正確なシーケンスに従ってください。ラットの切歯を継続的に成長、生理学的および病理学的条件でエナメル芽細胞活動と分化段階を研究する適切な実験的モデルです。ここでは、我々 はマイクロ分析環境有害物質に暴露したラットのエナメル器に信頼性の高い一貫した方法をについて説明します。ミクロ解剖歯科上皮には分泌と成熟期エナメル芽細胞in situハイブリダイゼーション、免疫組織化学的アッセイなどの定性的な実験のためだけでなくなどの定量に使用できるにはが含まれてRT qPCR、RNA シーケンスおよび西部にしみが付くこと。
概要
環境毒性や不適切な生活習慣1,2,3,4への暴露から多く発達エナメル質の欠損があります。中断イベント、現在記載されている手順を使用してエナメル質形成の分子の特性、いくつかの有害物質への暴露の早いマーカーとして結果エナメル質欠損の使用を推進しの健康の歴史の再構成のために役立つことがあります。エナメル質が synthetized1,2周産期の期間それぞれの患者。エナメル合成は、エナメル芽細胞活動5によって 4 つの段階に分けることができます。最初のステップでは、前駆体細胞および pre-エナメル芽細胞増殖を再びグループ化します。2 番目の段階では、差別化されたエナメル芽細胞はエナメル基質タンパク質 (体)、主にアメロゲニン、エナメリン、アメロブラスチン、最終的なエナメル質の厚さを決定するを分泌します。したがって、EMP 合成の中断は、エナメル質の定量的欠陥につながります。におけるエナメル質の厚さの堆積後成熟段階を開始します。この段階で、幅と厚さにおけるアパタイト結晶の成長により重量最大 96% の生体組織は、最高の鉱化....
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プロトコル
本研究で使用されるすべての動物は、ケアと農業 (A-75-06-12) フランスの省から実験動物の使用のためのガイドラインに従って維持されました。
1. 動物に対する毒性
- このプロトコルを実行する前に必要な制度上の承認を取得、すべての動物のケアのガイドラインを遵守することを確認します。
- エナメル芽細胞分泌期および成熟期エナメル芽細胞に調査せずの影響をテストするためにさまざまな実験的グループの憲法を許可する研究プロトコルの設計を適用します。ここでは、フッ素 (NaF) の組み合わせでまたはない BPA (図 1 a)2への露出によって雄 Wistar ラットの 4 つのグループが構成されました。すべての動物の観察・解剖日 65 (図 1 b)。
2. ラットから Hemi 下顎骨の解剖
- 必要に応じて別々 の頭に体の残りの部分から、斬首に続く、CO2窒息によるラットを安楽死させます。ラットは専用ボックス16で 5 分の CO2を公開します。
- #11 メスを使用して、下顎の前歯部に....
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結果
多くは欠陥をエナメル質など歯の弗素症12,13、フッ化物の過剰吸収による環境条件に起因またはエナメルの hypomineralization いくつかの内分泌かく乱化学物質の1、への露出により MIH のよう7,22。これらの発達のエナメル質の欠損は実験的ラット (図 1)1,2,7,23,24
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ディスカッション
エナメル質欠損の特性が、変化の理解を開発を助けるかもしれない変えられたエナメル芽細胞活性および/または混乱したエナメル芽細胞増殖・分化・成熟プロセス鉛不可逆的なエナメル質欠損し、順番、エナメル質形成におけるエナメル芽細胞の活動。したがって、孤立したエナメル器官の研究は、エナメルの欠陥がどのような環境や遺伝、その起源につながる病理のイベントを明らかにする決定要因です。
この手法は、もともとヒラーらが記載されています。17 ・ ロビンソンら18日、エナメル器官分化の各段階に特定の効果を発揮する使用されます。それは、EMP 抽出19,24,25適応されています。我々 は現在エナメル器官の主要な部分を分離し、Rna とタンパク質 (おそらく内極細胞蛋白質) 量的・質的分析をさ.......
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開示事項
著者はある利益相反を開示します。
謝辞
この仕事は、歯科医学の研究 (IFRO) の大学パリ ・ ディドロ、フランス国立衛生研究所と医学研究 (INSERM)、フランスの研究所によって賄われていた。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| ビスフェノール A | Sigma Aldrich, Saint Louis MO | 239658 | |
| ホルマリン 10% | Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO | HT5012 | |
| Tri-Reagent | Euromedex, France | TR118 | |
| RLT buffer | Qiagen, Les Ulis, France | 74126 | RNeasy Protect Mini Kit |
| Androgen receptor antibody | Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) | sc-816 | ウサギポリクローナル抗体 |
| PBS 10x | EUOMEDEX | ET330。フ | |
| ッ化ナトリウム(NaF) | Sigma-Aldrich、セントルイス、ミズーリ | 州S-1504 | |
| パラプラストレギュラー | ライカマイクロシステム、ナンテールセデックス、 フランス | 39601006 | |
| 組織OCT | VWR、Fontenay-sous-Bois、フランス | 411243 | |
| Extra Fine Bonn Scissors - Straight/8.5 cm | PHYMEP , Paris, France | 14084-08 | |
| Handle for Scalpel Blades - 12.5 cm | PHYMEP, Paris, France | 10035-12 | |
| Curved Scalpel Blade | PHYMEP , Paris, France | 10035-20 | |
| 解剖ナイフ - ファイン/ストレートチップ | PHYMEP、パリ、フランス | 10055-12 | |
| サークルナイフ | PHYMEP、パリ、フランス | 10059-15 | |
| の刃n°11 Swann-Morton | VWR, Fontenay-sous-Bois, France | 233-0024 | |
| 双眼レンズ | Leica biosystems, Nanterre cedex, フランス | MZFLIII |
参考文献
- Jedeon, K., et al. Enamel defects reflect perinatal exposure to bisphenol A. Am J Pathol. 183, 108-118 (2013).
- Jedeon, K., et al. Chronic Exposure to Bisphenol a Exacerbates Dental Fluorosis in Growing Rats. J Bone Miner Res. 31, 1955....
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再版と許可
