本稿で説明されたプロトコルは、神経筋接合部で自然を記録するマウス挙オーリス長(ラル) 筋とシナプス後電位の神経誘発 (電流クランプ) と電流 (電圧クランプ) を使用します。この手法の使用は、正常と病気の条件の下でのシナプス伝達のメカニズムに重要な洞察を提供できます。
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この記事について
サマリー
要約
このプロトコルは、電流クランプとクランプ電圧条件下で神経筋接合部からレコードのシナプス伝達に手法を説明します。オーリスの挙筋(ラル) の前のヴィヴォ準備は、薄い筋肉の運動神経終板に電極を串刺し神経筋接合部の簡単な可視化を提供するために使用されます。このメソッドは、運動終板の膜特性と同様に自発ミニチュア終板電位と電流 (mEPPs と mEPCs)、神経誘発神経終板電位と電流 (エップスおよび Epc) の録音できます。このメソッドから得られた結果を含める素量 (QC)、小胞リリース サイト (n) の数、小胞の放出 (prel)、シナプス促通、うつ病と筋膜時定数 (τ の確率m) 入力抵抗とします。このテクニックの人間の病気のマウス ・ モデルへの適用は、病気の状態でキーの病態を強調表示し、新規治療戦略の特定できます。完全に電圧遮断単一シナプス、によってこのメソッドは、シナプス伝達の現在利用可能な最も詳細な分析の 1 つを提供します。
概要
シナプス機能を検査するためのエクセレント モデルの動的神経や骨格筋のシステム関係に洞察力を提供するいますと、神経筋接合部のシナプス伝達を勉強します。オーリスの挙筋(ラル) は薄い筋肉、神経筋接合簡単に可視化することを可能にします。以前のレポートは、シナプスの薬物や毒素を調べるとラル1,2の骨格筋線維型の特性を特徴とした、ラルを使用しての利便性を説明しています。数多くの研究は、神経筋生理学3,4,5,6,7、8を調べる、ラルを使用しています。電気生理学、簡単にラルの神経筋接合部を観察する能力を運動終板に電極を正確に配置可能し、シナプス伝達を記録容量クランプの問題が大幅に減少します。電流クランプ記録膜時定数 (τm) 入力抵抗 (Rで) などの筋膜特性が容易に得られます。さらに、これらのプロパティは、同じの筋線維が筋膜特性にシナプス機能の直接比較を可能にする、神経筋伝....
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プロトコル
動物のケアおよび使用委員会のライト州立大学に従ってすべての動物の手続きを行った。
1. マウス安楽死
- 発煙のフード麻酔チャンバー気密ガラスにマウスを置きます。
- イソフルラン (飽和状態、または ~ 25%) の致死量吸入を介してマウスを公開します。呼吸することができますも見られなくなるまで、商工会議所にマウスを移動します。
- 商工会議所から、マウスを削除し、安楽死の副次的な方法として頚部転位を実行します。
2. 背中、首、頭の背側表面から髪の毛の除去
- 電気シェーバーを使用すると、マウスの前後、首、頭の背側表面の毛の大半を削除できます。また、周りと左耳上の髪を削除します。
注: 世話を耳の周りの皮膚を剃るとき、肌シェーバーの刃に巻き込まれることができます、基になる筋肉組織を損傷する恐れが。 - 残りの髪を削除する剃毛エリアに綿棒で脱毛クリームを適用されます。約 1 分待ってとスクイズ洗浄ボトルを使用して水で脱毛クリームを洗い流し、残っているクリームや綿棒を使用して髪を拭うし、乾燥肌をなでます。
3. 皮膚挙筋オーリス長筋を公開するには
- ステレオ解剖顕微鏡の下で肩甲骨のレベルでマウスの背面に小さな切開 (ちょう....
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結果
図 8は、12 週齢野生型 R6/2 マウスから電流パルス (図 8 a) と電流クランプの下の 1 つのラール繊維から電圧応答 (図 8 b) の例を示します。MEPPs の存在は、これらのレコードに運動終板から撮影されたことを示します。レコードは、通常の生理食塩液で得られました。これらの電流クランプのレコードは、その繊維16,19,20Rでτmを決定する分析できます。
EPC とクランプ電圧条件下で得られた 2 つの mEPCs の代表的な録音.......
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ディスカッション
準備および神経筋伝達電流または電圧クランプ条件下での測定のためマウス ラル筋肉の使用は、ここで説明。ラルを解剖するために考慮すべきいくつかの重要なポイントがあります。電極と電極串刺しの刑で筋肉エイズから過剰な結合組織のクリーニングは結合組織串刺しの刑にそれらを配置する場合ことができます暗礁。しかし、離れて撮影することができます結合組織を削除簡単に筋肉の損傷の可能性を制限します。神経の分離を実行して、それは非常にデリケートなので注意してください。神経の損傷を避けるためには、皿に神経を確保するため、ピンを配置できる神経の端に接続されている周囲の組織の一部を残すことをお勧めします。また、神経刺激装置を配置するときに、神経を粉砕しないように注意してください。最後に、電極が光ファイバーに刺し、順序は重要です。鈍電極は、自由に動けなく容易ではないと、まず刺しする必要があります。鋭い電極が最初に留められていた場合、鈍の電極は、ファイバーから出てくる鋭い電極をおそれ、膜を貫くそれ前に筋線維を押し下げる可能性が。これは繊維に不要な膜の損傷を原因となる鋭い電極と 2 回目を突き刺す必要なります。また、こと使用されているアンプを同時に計測電流と電圧電流通過電.......
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開示事項
著者が明らかに何もありません。
謝辞
ありがとう博士マーク ・ m ・ リッチとダニエル ・ ミランダ編集コメント、アフマド ・ Khedraki (A.A.V. にスタートアップ資金) の金融支援この手法、およびライト州立大学の確立を助けるため。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| オリンパスの複合顕微鏡 | オリンパス | BX51WI | |
| 10倍対物レンズ | オリンパス | UMPLFLN10XW | |
| 40倍対物レンズ | オリンパス | LUMPLFLN40XW | |
| ホウケイ酸ガラス | シャッター機器 | BF150-86-7.5 | |
| CCDカメラ | サンタバーバラインスツルメンツグループ | ST-7XMEI | |
| Mater-9パルス発電機 | AMPI | ||
| アイソフレックス 刺激アイソレーター | AMPI | ||
| pCLAMP 10 データ収集・解析ソフトウェア | 分子デバイス | 1-2500-0180 | |
| 同心円バイポーラ電極 | FHC | CBDSH75 | |
| ボールジョイントマニピュレーター | 成茂 | ||
| 非金属シリンジ 34ゲージ | ワールド精密機器 | MF34G-5 | |
| ニコン実体顕微鏡 | ニコン | SMZ800N | |
| 5号鉗子 | ファインサイエンスツール | ||
| スプリングハサミ | ファインサイエンスツール | 15006-09 | |
| 2号機 鉗子 | ロボズ | RS-5Q41 | |
| マイクロダイセクションはさみ | Roboz | RS-5912SC | |
| Sylgard 184 シリコーンエラストマーキット | ダウ コーニング | 2404019862 | |
| 脱毛クリーム | Nair | ||
| Grass SD9 刺激装置 | グラスメディカル | ||
| モデル P-1000 マイクロピペット プーラー | サッター機器 | P-1000 | |
| Axon Digidata 1550 低ノイズデータ分析システム | 分子デバイス | ||
| ローパスベッセルフィルター | ワーナーインストゥルメントコーポレーション | LPF-8 | |
| 左利き用マイクロマニピュレーター | シスキユー | MX1641/45DL | |
| 右利き用マイクロマニピュレーター | Siskiyou Corp. | MX1641/45DR | |
| シングルモーション | コントローラーSiskiyou株式会社 | MC100e | |
| クロスローラーマイクロマニピュレーター | Siskiyou Corp. | MX1641R | これは、左利き用と右利き用のマイクロマニピュレータのZ軸に追加され、z軸を電動化できるようになりました。このカスタムセットアップは、4軸電動マイクロマニピュレーターを購入するよりも安価でかさばりません。また、1つのコントローラーで両方のマイクロマニピュレーターを制御することができます |
| すべての化学物質はフィッシャーから注文されましたが、 | |||
| CTX | Alomone Labs | C-270 | |
| 4-Di-2-Asp | Molecular Probes Molecular Probes | もはや会社ではありません。現在、フィッシャーを通じて注文 |
参考文献
- Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins. Neurosci Lett. 82 (1), 83-88 (1987).
- Erzen, I., Cvetko, E., Obreza, S., Angaut-Petit, D.
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再版と許可
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