マウスの遠位人工肛門は、人間転換大腸炎、糞便のストリームから除外コロン セグメントで主にリンパ球性大腸炎のマウスモデルを提供します。
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この記事について
サマリー
要約
転用性大腸炎 (DC) は、転用の生存の結果として糞便のストリームから除外腸セグメントを持つ患者で発生する頻繁に臨床状態です。この病気の病因は不明確なままですが、古典的な炎症性腸疾患クローン病と潰瘍性大腸炎などの違いが表示されます。この病気の開発につながる病態生理学的メカニズムを解読する研究は、深刻な適切なマウスモデルの欠如によって妨げられています。このプロトコルは、免疫システムの役割と DC の開発でマイクロバイとの相互作用の研究を容易にする DC のマウスモデルを生成します。このモデルは c57bl/6 動物を使用して、コロンの遠位部分は遠位人工肛門を作成する、除外された腸のセグメントで炎症を軽度から中等度の開発をトリガーし、人間の特徴病変を再現によって、糞便のストリームから除外します。中程度の全身性炎症反応と DC。ラット モデルと対照をなして C57BL/6 の背景に遺伝子組換えマウス モデルの多数があります。これらの動物モデルの組み合わせにより、個々 のサイトカイン、ケモカイン、または (例えばインターロイキン (IL)-17; 生理活性分子の受容体の潜在的な役割スフィンゴシン-1-リン酸受容体 4 CXCR5 と CCR7、ケモカイン受容体、ケモカイン CXCL13 IL-10) DC の病因に評価されます。C57BL/6 背景にコンジェニック マウス系統の可用性は主として DC の病因に関与する細胞の種類の役割を確立する転送実験を促進します。最後に、モデルは粘膜免疫の影響を受けると以外-影響を受ける腸セグメントにローカル介入 (例えば、ローカル マイクロバイまたは局所抗炎症療法の変更) の影響を評価する機会を提供していますとの全身免疫恒常性。
概要
近年では、非感染性大腸炎エンティティから古典的な炎症性腸疾患 (IBDs; 別の相当な数i.e。、Crohn 病や大腸炎潰瘍性) ヒトの病理組織学的および臨床的に特徴づけられています。これらの大腸炎のフォームの開発につながる病態生理学的メカニズム理解されていません完全に部分的に適切な動物モデルが不足しているため。転用性大腸炎は、これらの最近記述されているエンティティの 1 つです。用語は、Glotzer1によって 1980 年に鋳造されたが類似した表現型の最初の説明は、Morson2によって 1972 年に与えられました。病気が 50% から流用、腸瘻患者の 91% の開発し、その臨床強度変化3,4。アメリカ合衆国で約 120,000 の人工肛門患者の年間発生率を考えると、この病気の実体は、重要な健康問題を構成します。
このプロトコルの開発の全体的な目標は、人間 DC に見られるような大腸炎トリガーに依存していると、人間の病気の主な病理組織学的特徴を再現したマウスモデル DC を提供することでした。我々 のモデルの大腸炎誘発は遺伝子組み換え動物 (例えばIL-7 トランスジェニック マウス、N-カドヘリン支配的否定的なマウス、また....
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プロトコル
ここで説明したすべてのメソッドは、獣医当局 (Landesamt für Lebensmittelsicherheit und Fischerei メクレンブルク = フォアポンメルン州、Landwirtschaft (LALLF M-V)) によって承認されています。
1. 術前のケア、動物の準備
- 動物施設の到着, 動物 (C57Bl/6) を同じようなサイズのグループに分割、各グループを一緒に、ケージ、グループを実験を通じて一定に保ちます。
注: は、同じ性別の動物を使用します。結果は、雄マウスが得られました。
注: オスの動物を使用する階層を確立できるように、彼らは 7 週齢時に一緒に開始ケージ グループ場合を最小限に抑える積極的な行動のリスク実験中。 - 術前に少なくとも 1 週間は高エネルギーに切り替える (> 14 MJ/kg) と高蛋白質 (> 20%) すべての必須微量元素とビタミンを含むフィード (詳細については、資料の一覧を参照してください)。
注: 手術が実行されるすべてのマウスの重量を量る、少なくとも 25 g を保証します。 - 87 mg/kg (i. p.) ケタミンおよび塩酸キシラジン 13 mg/kg (i. p.) の腹腔内投与による麻酔と鎮痛を誘発します。マウスは、機械的刺激、例えばつま先ピッチ、モーターの応答なしを許容するまで待機します。
- 安定操作中の位置と体の熱の圧倒的な損失を回避する保....
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結果
手術は忍容実験 (人工肛門) と偽 (colotomy) グループの両方。手術および周術期管理が正しく実行されると、周術期死亡率は 10% を超えてはなりません。最初の術後 1 週間実験と偽の両方のグループで有意な体重減少が見られます。偽のグループの動物達成術後四日の方の通常の重量のどん底が実験群で後 1 日が発生します。体重減少は初期体重の 21.7% に達し, 実験群でより顕著で。対照的に、偽動物は彼らの初期のボディ重量 (図 2)6の 10.8% を失います。体重は最初の術後 1 週間の体重のどん底後は、両方の実験グループですが実験群で遅い斜面、絶えず します。徴候と (すなわち、血性分泌または実験も偽グループ6に発生する液体腸の動き) 重篤な腸炎の症状です。最初の 60 日間の総死亡率術後です約 40% 人工肛門グループと colotomy グループの約 10%ほとんどの死は (実験群で 61.......
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ディスカッション
確実にこのプロトコルで発表した DC のマウスモデルを再現 (例えば、炎症を起こして腸セグメント、ショートニング、クリプト、削減の粘膜下組織にリンパ濾胞のde novo開発人間の DC の病理組織学的特徴炎のゴブレット細胞数)。この利点は別として、このモデルは非常に類似したトリガー因子によって誘導される、という場合に最も影響を受ける人間の中等度軽度からの臨床経過を提示します。
再現性のある結果と許容周術期致死性を得るためには、顕微鏡技術でいくつかの練習が必要です。ただし、人工肛門と偽の両方の操作 (colotomy) は非常に低周術期死亡率と実行できます (< 10%)。いくつかの操作は、非常に重要な: 1) コロンそしてターミナル回腸を識別します。回盲部の解剖学が不明の場合は、コロンで形成された便の存在感と回腸パイエル板の存在によって識別できます。2) 人工肛門ループを exteriorizing するときは、腸間膜はゆがんでない機械的腸閉塞と腸間膜虚血を回避を保証します。3) フレキシブル チューブで腸間膜の穴をあけるときは、容器無料部門を選.......
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開示事項
すべての著者は、彼らは競争の興味があることを宣言します。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 操作材料 | |||
| 熱下敷き、6ワット | ThermoLux、Witte + Sutor GmbH | 461265 | |
| エタノール70%(メチルエチルケトン付き) | グライフスヴァルト | ||
| アプリケーター、片面小さな綿の頭、木製の棒、長さ150 mmCentramed | GmbH、ドイツ | 8308370 | 手術現場の消毒 |
| 用 はさみ | Aesculap(BRAUN) | BC064R | |
| 非外傷性DeBakey鉗子 | Aesculap(BRAUN) | OC021R | |
| ニードル | ホルダーAesculap(BRAUN) | BM012R | |
| Vasofix Safety i.v.カニューレ22G | Braun Melsungen AG、ドイツ | 4268091S-01 | |
| VICRYL Plus 4-0バイオレット編組;V-5 17 m 1/2c;70 cm | エチコン株式会社 | ||
| PDS II 6-0モノフィル;V-18 13 mm 3/8c;70 cm | エチコン株式会社 | Z991H | |
| BD Plastipak 1 mL (滅菌内部針付きシリンジ) | BD Medical | 305501 | |
| Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin) | ANTISEPTICA, Germany | 18824-01 | 超音波浴 |
| Medications | |||
| ketamine 10%, 100 mg/mL (ケタミン塩酸塩) | Selectavet, Dr.Otto Fischer GmbH | 9089.01.00 | 87 mg/kg i.p. |
| キシラセル、20 mg/mL (塩酸キシラジン) | selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH | 400300.00.00 | 13 mg/kg i.p. |
| >NaCl 0.9% | Braun Melsungen AG, Germany | 6697366.00.00 | |
| Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorphine) | Bayer, Germany | PZN: 01498870 | 0.1 mg/kg s.c. |
| トラマルドロップ、100 mg / mL(塩酸トラマドール) | Grünenthal GmbH、ドイツ | 10116838 | 1 mg/mL 飲料水 |
| Ceftriaxon-saar 2 g (セフトリアキソン) | Cephasaar GmbH, Germany | PZN: 08844252 | 25 mg/kg 体重 i.p. |
| metronidazole 5 mg/mL | Braun Melsungen AG, Germany | PZN: 05543515 | 12.5 mg/kg 体重 i.p. |
| >Food | |||
| ssniff M-Z Ereich | ssniff, Germany | V1184-3 | |
| 固形飲料Dehyprev Vit BIO、ポーチ | TripleATrading、オランダ | SDSHPV-75 | |
| 機器 | |||
| Nikon Eclipse Ci-L | Nikon Instruments Europe BV、ドイツ | 光学顕微鏡 | |
| VetScan HM 5 | Abaxis、米国 | 770-9000 | 医血液学分析装置50 µl 静脈EDTA-血 |
| バンデリン SONOREX (超音波浴) | バンデリンエレクトロニクス、ドイツ | RK 100 H | 手術器具の消毒 |
| Software | |||
| NIS-Element BR4 software | Nikon Instruments Europe BV, Germany | ||
| GraphPad Prism Version 6 | GraphPad Software, Inc. |
参考文献
- Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream. Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).
- Morson, B., Dawson, I. Gastrointestinal Pathology. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).
- Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F.
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再版と許可
