小さい gtp アーゼ プレニル化および分子量 GTP 結合を使用して膜分画と gtp アーゼ抗体法の検出

Javad Alizadeh; Shahla Shojaei; Simone da Silva Rosa; Adel Rezaei Moghadam; Amir A. Zeki; Mohammad Hashemi; Marek J. Los; Joseph W. Gordon; Saeid Ghavami

doi:10.3791/57646

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方法論記事

小さい gtp アーゼプレニル化および分子量 GTP 結合を使用して膜分画と gtp アーゼ抗体法の検出

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DOI:

10.3791/57646

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2018年11月11日

Javad Alizadeh¹^,² , Shahla Shojaei¹^,²^,³ , Simone da Silva Rosa¹ , Adel Rezaei Moghadam¹^,² , Amir A. Zeki⁴ , Mohammad Hashemi⁵ , Marek J. Los⁶^,⁷^,⁸ , Joseph W. Gordon¹^,⁹ , Saeid Ghavami¹^,²^,¹⁰

¹Department of Human Anatomy and Cell Science, Rady Faculty of Health Sciences, Max Rady College of Medicine, University of Manitoba, ²Biology of Breathing Theme, Children Hospital Research Institute of Manitoba, University of Manitoba, ³Department of Biochemistry, School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, Isfahan University of Medical Sciences, ⁴Division of Pulmonary, Critical Care, and Sleep Medicine, Department of Internal Medicine, Center for Comparative Respiratory Biology and Medicine, ⁵Department of Clinical Biochemistry, School of Medicine, Zahedan University of Medical Sciences, ⁶Department of Molecular Biology, School of Pharmacy with the Division of Laboratory Medicine in Sosnowiec, Medical University of Silesia, ⁷Centre de biophysique moléculaire - UPR 4301, Centre national de la recherche scientifique (CNRS) CS80054, ⁸LinkoCare Life Sciences AB, ⁹College of Nursing and Children's Hospital Research Institute of Manitoba, Rady Faculty of Health Sciences, University of Manitoba, ¹⁰Health Policy Research Center, Institute of Health, Shiraz University of Medical Sciences

この記事について

サマリー

ここでプレニル化とグアノシン 5'-三リン酸 (GTP) を調査するためのプロトコルを説明-GTPase の読み込み。このプロトコルは、2 つの詳細なメソッドで構成されています、すなわち膜分画と gtp アーゼ抗体アッセイします。プレニル化と GTP を測定するプロトコルを使用することができます別の他の低分子量 g タンパク質の読み込み。

要約

Rho である家族は、Ras スーパーファミリーに属するし、人間でおよそ 20 人のメンバーが含まれています。低分子量 g 蛋白質 Rho、細胞骨格、細胞運動、細胞極性、軸索ガイダンス、小胞輸送、細胞周期制御を含む、多様な細胞機能の調節に重要です。Rho GTPase シグナリングの変化は、がん、中枢神経系疾患、免疫システム依存性疾患など、多くの病的状態における重要な規制役割を果たします。における Rho gtp アーゼ (すなわち、メバロン酸経路の中間体によるプレニル化) と GTP 結合の翻訳後修飾は、このタンパク質の活性化に影響を与える重要な要因です。本稿 Rho GTPase の広範な範囲のプレニル化と GTP 結合活性を検出する 2 つの重要なメソッドが提供されます。使用されている技術的な手順の詳細を説明したこの原稿で一歩一歩。

概要

低分子量 g 蛋白質 Rho Gtpase の Ras スーパーファミリーになりユニークな亜科、進化、よく保存されて小さい蛋白質 (21-25 kDa) のグループであります。このスーパーファミリー内各亜科、GTPase 活性とヌクレオチド交換¹関与している共有 G ドメインコアがあります。Rho ファミリーと他の Ras サブファミリーとの違いは、5^番目の β ストランドと小さい gtp アーゼドメイン²の 4^th α ヘリックス内「Rho 挿入ドメイン」の存在です。

最近の分類に基づいて、Rho Gtpase シグナリング分子 gtp アーゼ Ras スーパーファミリー³に収まるの家族と見なされます。哺乳類における Rho gtp アーゼは、一般的性質⁴ ρ、Rac1 と Cdc42 がこのグループのほとんどを学んだメンバーの間では、特定の機能に基づく 22 のメンバーを持ちます。Rho Gtpase は厳しく規制されたメカニズム蛋白質翻訳後修飾を介して分子スイッチ⁵に依存する細胞内シグナル伝達経路を介してにリンクされます。