ショウジョウバエ幼虫の温度設定を決定する温度勾配試験

サマリー

ここでは、連続的な温度勾配を利用したショウジョウバエ幼虫の最寄りの環境温度を決定するプロトコルを提案する.

要約

ミバエショウジョウバエを含む多くの動物は、肥えた最寄り熱風景を模索することができます環境温度のわずかな違いが可能です。幼虫の温度の設定を定義すると、定義された線形範囲にわたって、温度勾配を使用してアッセイを開発しました。単一方向のグラデーションを確立するには、2 つのアルミ ブロックは個々 のブロックの温度を制御する独立した水のお風呂に接続されます。2 つのブロックは、グラデーションの上下限値を設定します。温度勾配は、プレート間の距離にまたがる 2 水制御ブロックをアガロース コーティング アルミ プレートを配置することによって確立されます。水ブロックの上に設定されているアルミ板の両端の最小値と最大温度を定義および中間の地域 2 つのブロックを形成する線形温度勾配。グラデーションのアッセイの幼虫に適用できるし、TRP チャネルと温度差別に必要なオプシン遺伝子に影響を与える突然変異などの表現型を示す変異体を識別するために使用することができます。

概要

モバイル動物によって温度走性を採用して、最も有利な条件^1,2,3環境を選択します。過度に熱いまたは冷たい気候になった場合、この動作は生存に不可欠です。さらに、多くの動物は快適な範囲の温度の非常に小さい相違に敏感であるし、理想的な温度環境を模索します。これは、環境と自分の体の温度を平衡ショウジョウバエなど poikilothermic 生物にとって特に重要なのです。幼虫の温度走性を監視するための試金は識別し、ショウジョウバエ一過性受容体電位 (TRP) チャネル^4,5,6など分子センサーの役割を明確に尽力しています。ロドプシン^7、8、およびイオン型受容体受容体 (IRs)⁹、異なった温度較差上の温度感度を持つこれらの動物のため。

双方向の選択のテストは、幼虫^6,7熱の好みを勉強する 1 つの方法を提供します。アッセイは、2 つの異なる温度ゾーンを確立することを伴なうし、動物他の上の 1 つの側面を選択することができます。双方向選択テストの結果は、堅牢な 2 つのオプションの間の温度差が大きい場合に特にすることができます。さらに、各分析には集計のみ 2 つのグループが含まれているので、データはシンプルな設定インデックスとして表現できます。使いやすさと双方向選択の試金のシンプルさは、遺伝子スクリーニングに適しています。しかし、主要な制限は、多くの実験動物の野生型や突然変異体の最寄りの温度を確立する必要は。

グラデーションのアッセイでは、単一のアッセイ⁸最寄りの温度を確立する機会を提供しています。さらに、双方向の選択テストとは異なり温度の連続的な範囲に直面したとき、動物の集団の分布の評価が可能です。1 つのグラデーション アッセイ ペトリ皿と単一動物を使用し、個々 の動物¹⁰の詳細な動作評価に適しています。ただし、ペトリ皿はラウンドなので温度ゾーンのサイズによって異なります、中心からの距離に応じて徐々 に小さい。したがって、このセットアップは、動物の集団の温度の選択のモニタリングに最適ではありません。

幼虫のグループの温度の設定を評価するために適しています連続熱勾配装置は、長方形のアリーナを採用し、ここに記載されています。装置は簡単に構築し、組み立てます。また、グラデーションは線形で、42 ° C まで 10 ° C から広い温度範囲で温度走性を評価するために使用することができますは、柔軟です、試金は迅速かつ簡単に実行を再現性のあるデータが得られます。幼虫の支持された温度のレポート作成に加えて、それは単一の実験で線形範囲全体に対する動物の人口の好みを明らかにします。これらの利点のための温度走性に関与する遺伝子を特定するための優れた選択肢です。

プロトコル

1. 装置製作・ グラデーション アッセイ用組立装置

1. 単一方向のグラデーションの試金のためのアルミニウム アッセイ プレートを作製します。
   1. トリムしバンド鋸を使用してアルミニウムの単一部分から各アルミ アッセイ プレート (図 1 a) を挽くし、シャープの次の次元を持つ垂直ミル: 外側のサイズは 140 × 100 × 9 mm、内側のサイズは 130 × 90 × 8 mm (図 1 b)。幼虫を視覚化し、錆を防止しやすく、黒の塗料で各アッセイ プレートの内側をアルマイトします。
      メモ: 単一方向のグラデーションのアルミニウム アッセイ プレートの作製は、マシン ショップによって行われます。商用ベンダーによって、陽極酸化処理が実行されます。
   2. 13 分界、永久的なマーカーを使用して 10 mm で区切られた各アッセイ プレートの上部と下部のリムをマークします。アッセイ プレート (図 1 a, B) の最初と最後の分界内側の端から 5 mm を配置します。
2. 双方向のグラデーションのアルミニウム アッセイ プレート作製、板金鋏を使用して次の次元を持つアルミ板をカット: 250 x 220 x 2 mm. アルマイト黒の塗料でアッセイ プレート。
   注: 双方向グラデーション アルミ アッセイ プレートの作製は、マシン ショップによって実行されます。陽極酸化処理は、商用ベンダーによって行われます。
3. アルミ ブロックを作製します。
   メモ: 2 つのブロックが単一方向のグラデーションを必要し、双方向のグラデーションには 3 つのブロックが必要があります。
   1. バンドソー (50 × 255 × 14 mm の寸法) を用いるアルミニウムの単一部分のアルミ ブロック (図 1) をカット (図 1d)。
   2. ドリル垂直ミルとねじ溝形状による 1 つの側面 (図 1) オープン エンド ブロック (7 mm の直径) 内水路。ボルトとねじシールテープ U 字水チャネル (図 1d) を形成する溝穴を閉じます。
      注: アルミニウム アッセイ ブロックの製作は、マシン ショップによって実行されます。
   3. ねじでアルミ ブロック (図 1) でコネクタを固定し、シール 1 つの端にテープをスレッド。シリコン チューブ (1/4"内径 3/8" 外径 1/16"の壁 x x) に複数の棘を持つもう一方の端をフィットします。
4. 2 冷蔵加熱循環バスを取得します。
5. グラデーションのアッセイ システムの温度制御ブロックを組み立てます。
   1. 単一方向のグラデーションには、独立した水を循環システム (図 2 a) によって各ブロックの温度を制御できるように別々 の湯のお風呂に 2 つのアルミ ブロックの各接続します。シリコーン チューブ (1/4"内径 3/8" 外径 1/16"の壁 x x) を使用すると、風呂の水の出口をアルミ ブロック (図 2 a) の内部側コネクタに接続します。また、水お風呂の入口にアルミ ブロックの外側にコネクタを接続するのにチューブを使用します。
   2. 双方向のグラデーション 2 左下 3 つのブロックとプレートの右側に配置し、チューブ (図 2 b) と同じ水のお風呂に接続します。2 番目の水浴とプレート (図 2 b) の中心部の下に配置する三のアルミ ブロックを接続します。
      注: この装置およびアッセイは、幼虫は 1 つの端または他の単一方向のグラデーションのゾーンに蓄積される場合のみ必要です。もしそうなら、エッジ効果があるかどうかを評価することが重要です。この可能性をテストするのには、単一方向のグラデーション (例えば 18 ° C) を使用しての幼虫によって優先エッジ ゾーン温度は双方向のグラデーション (図 3E のプレートの真ん中に温度双方向グラデーションを確立します。 , F)。

2. 幼虫の同期

1. ハエが産卵のために栄養を与えます。
   1. ミックス酵母顆粒と酵母を貼り付けるように杵の蒸留水。徹底的に挽くし、貼り付けの一貫性がピーナッツ バターのようになるまで混ぜます。新鮮なバイアルにハエを転送するときオフにフレーク可能性がありますまたはハエをトラップできるペーストを濡れている過度に乾燥の貼り付けは避けてください。
   2. 乳棒を使用して、標準的なショウジョウバエのバイアルは、食品の表面のすぐ上の内側の壁に近い酵母貼り付けを追加します。
   3. カウント 12-35 女性 CO₂パッド (10 以上) が半分として多くの男性までし、各酵母のペーストを含んでいるガラスびんに雌と雄を追加。
   4. その場を保つために酵母ペースト、湿った食品は、ハエはフィード中、までを含む 20 のオープン瓶 100 バイアル蒸留水のみを保持しているトレイにこれらのバイアルを組み合わせます。透明なプラスチックの袋にトレイを置き、シールします。
   5. 女性栄養適切に産む卵の数が多いし、48 h の 25 ° C の定温器でトレイを孵化させなさい。
2. 産卵用管瓶を設定します。
   1. タップすることで卵を収集するための新しい食品バイアルに栄養のハエを転送します。CO_2、可能性があります次の短い時間帯にわたって少なく卵を産むハエを使用しないでください。
      注: 標準ショウジョウバエ食品バイアルは、採卵のため酵母貼り付けることがなく使用されます。
   2. すべての卵は比較的狭い時間帯にわたって収集された、25 ° C で 3 時間卵を産むハエを許可します。
      注: これは同じ発達段階で同期する幼虫になります。
   3. 水の瓶を含むトレイに卵を含むバイアルを置き、袋を締めます。12 h ライト: 12 25 ° C の孵化時間の明暗周期。
   4. 指定した時間後に産卵 (AEL) 幼虫の段階に応じて必要な数の幼虫を年齢します。
      注:表 1は時間 AEL とフライの在庫によって異なりますが、幼生の段階との関係の推定食品使用、飼育温度などAEL と発達段階の正確な関係をする必要があります口フックと気門¹¹の形態などの物理的な条件を使用して調査員によって検証されます。

3. 温度勾配設定

1. 単一方向のグラデーションを準備します。
   1. 法中に湿気のある環境を作成するために湿紙タオル、10 cm (図 2 a) で区切られた 2 つの水浴に接続されている 2 つのアルミ ブロックを配置します。
   2. 2 つの水浴場 〜 2 h 平衡にアルミ ブロックの温度に十分な時間を許可するように測定を開始する前にオンにします。
      注: 目的の線形温度勾配を達成するために必要なそれぞれの水浴の温度を決定する模擬実験を実行することをお勧めします。水浴場を設定するいくつかの典型的な温度のペアの表 2のとおりです。ただし、表面の温度は周囲温度によって影響を受けます。影響を管の長さが温度管の冷却中です。我々 のセットアップでチューブの長さは 1.5 m です。
   3. 100 mL で 500 mL の広口ボトル丸高出力の設定で 1% の agarose を電子レンジ、25 mL を注ぐ/レベルまたは卓上プレートします。同時に (図 2 a) アルミ ブロックに配置できる 2 つのアッセイ プレートを準備します。
   4. 標準的なキッチン スポンジやアガロース表面を少し粗にメラミン スポンジで各 agarose の表面をこすり、agarose のゲルに水を噴霧、滑らかな薄い水膜が作成されます、agarose が (10-20 分) 凝固させる為後、水滴が形成されます。
   5. アッセイ プレートの乾燥を得ることを防ぐために実行する準備が整うまで蒸留水が付いている容器でプレートを完全に水没します。
2. (省略可能) 双方向グラデーションを準備します。
   1. 法の中に、湿気のある環境を作成するには、湿紙タオルの 3 つのアルミニウム ブロック 8 cm (図 2 b) を配置します。
   2. 2 つの水浴場 〜 2 h 平衡にアルミ ブロックの温度に十分な時間を許可するように測定を開始する前にオンにします。
      注: 双方向グラデーション各槽の温度を決定する模擬実験を実行することをお勧めします。水お風呂を設定するいくつかの典型的な温度のペアの表 3のとおりです。ただし、表面の温度は周囲温度によって影響を受けます。影響を管の長さが温度管の冷却中です。我々 のセットアップでチューブの長さは 1.5 m です。
   3. Agarose が皿からこぼれるを防ぐために、10 mm 高壁 (図 2 b) を形成するテープにラベル付け、アルミ板のエッジをラップします。
   4. 高出力設定、電子レンジ 200 mL、500 mL の 1% の agarose を使用してラウンド広口ボトルとアッセイ プレートに 120 mL を注ぐ。
   5. 標準的なキッチン スポンジや agarose のゲルに水を噴霧、滑らかな薄い水膜が作成されますので、若干粗 agarose 表面にメラミン スポンジで各 agarose の表面とをこすり agarose (30 分程度) を固めたが後、水滴形。
   6. アッセイが完全に乾くことを防ぐために実行する準備ができているまで完全に蒸留水が付いている容器でアッセイ プレートが水没します。
3. 単一方向のグラデーションを設定します。
   1. 試薬およびグラデーション アッセイ装置 (材料の表を参照) の横にあるベンチ上のアイテムを準備します。
   2. 効率的な温度の伝達を促進するため、ブロックとプレート間のインターフェイスで水を噴霧することによりアルミ ブロックとアッセイ プレート間のギャップを埋めます。
   3. 手袋を使用して、水容器からアッセイ プレートを取り外します。水は agarose のゲルとプレートの間に侵入して表面にフォームにバンプが発生する場合、は、P1000 マイクロ ピペットで水分を除去します。
   4. 正確にいずれかの端から 2 cm の分界はアルミ ブロック (図 2 aC) のエッジを一致するようにアルミ ブロックにアッセイ プレートを配置します。
   5. (アガロースの表面を覆っている薄い水膜で十分です) プレートの表面に水をスプレー agarose のゲルが乾くを防ぐために。水膜は継続的に水滴の無料ので幼虫は水滴で引っ掛けられて得ることを確認します。
   6. 水の蒸発を減らすために段ボール箱でグラデーション システムをカバーし、ゲルの表面の温度を安定させます。温度平衡するまで 5-10 分待ちます。
   7. プレート (図 2) を 12 ポイントで表面の温度を確認してください。ゾーン内で変動があるかどうかを確立する各ゾーン内の 2 つの測定を取る。両方のスポット温 ± 0.2 の ° C の所望の温度内であることを確認します。
      注: ゾーン内の変動は、通常、アルミニウム ブロックの端に 2 つのスポットの正確な距離が同一でないために発生します。アルミ ブロックのエッジをいずれかの端から 2 cm は、正確な分界に合わせるようにアルミ ブロックにプレートの位置を調整します。
   8. 測定温度勾配目的のグラデーションから逸脱している場合、増減水お風呂温度設定し水 bath(s) の温度 stabilize(s) 後表面温度を再確認します。
   9. 測定を開始するまで段ボール箱とグラデーション システムをカバーしてください。
4. 双方向のグラデーションを設定 (オプション)
   1. 試薬およびグラデーション アッセイ装置 (材料の表を参照) の横にあるベンチ上のアイテムを準備します。
   2. サーフェス間のギャップを埋めることでアッセイ プレートにアルミ ブロックから効率的な温度の伝達を促進する 3 つのアルミニウムのブロックの表面にスプレー水。
   3. 水容器から慎重にアッセイ プレートを取り外し、アルミ ブロックを置きます。Agarose のゲルと表面上のフォームにバンプを引き起こす可能性があります、プレートの間に水が侵入する場合は、P1000 マイクロ ピペットで水分を除去します。
   4. いずれかの端からの最初と最後のゾーンの中線 2 つの側面のアルミ ブロック (図 2 b, D) のエッジと一致のアッセイ プレートをアルミ ブロックに配置します。
   5. (アガロースの表面を覆っている薄い水膜で十分です) プレートの表面に水をスプレー agarose のゲルが乾くを防ぐために。水膜は継続的に無料水滴、幼虫は水滴で引っ掛けられて得るのでであることを確認します。
   6. 水の蒸発を減らすために段ボール箱でグラデーション システムをカバーし、ゲルの表面の温度を安定させます。温度平衡するまで 5-10 分を待ちます。
   7. 各 10 ゾーン (図 2 D) の正中線に沿って 2 つのポイントで温度を確認してください。ゾーン内で変動があるかどうかを確立する各ゾーン内の 2 つの測定を取る。両方のスポット温 ± 0.2 の ° C の所望の温度内であることを確認します。
      注: ゾーン内の変動は、通常、アルミニウム ブロックの端に 2 つのスポットの正確な距離が同一でないために発生します。各エッジに最も近い最初と最後のゾーンの中線が 2 つの側面のアルミ ブロックのエッジを一致させるアルミ ブロックにプレートの位置を調整します。
   8. 測定温度勾配目的のグラデーションから逸脱している、水のお風呂の温度設定を調整、水 bath(s) の温度 stabilize(s) 後表面温度を再確認します。
   9. アッセイの開始まで段ボール箱を持つブロックをカバーしてください。

4. 幼虫コレクションと洗濯

1. きれいな幼虫 (オプション 1) を分離します。
   1. 50 mL 試験管に 〜 40 mL 18% ショ糖液を追加します。18% のショ糖液を薬さじと転送食品バイアルからすべての幼虫をスクープします。
   2. 優しく、薬さじを使用して食品の破片から幼虫を分離するが、徹底的に混ぜます。チューブの最上位のレイヤーに幼虫フロートまで 30-60 秒待ちます。幼虫 (~ 10 mL) を含む最上位のレイヤーを別の 50 mL チューブに注ぐ新鮮な 18% ショ糖溶液にチューブを記入してください。再び最上位のレイヤーに幼虫フロートまでの 30-60 秒を待ちます。
      注: 大規模な食品の粒子は、時々 幼虫と共に転送や、彼らが削除されない場合に幼虫の温度走性に影響を与える可能性があります。最上位のレイヤーに大きな食べかすが残っている場合手順 4.1.1-4.1.2 を繰り返したり、薬さじを使用してそれらを手動で削除します。
   3. 他の 2 つの 50 mL チューブに幼虫 (~ 10 mL) の最上位のレイヤーを転送し、幼虫は、すぐに水に沈むので、ショ糖濃度を低減する蒸留水で 2 つの管を埋めます。幼虫は底に沈むまで 30-60 秒を待ちます。幼虫が溺死するを防ぐためにできるだけ早く、この手順と次の手順を実行します。
   4. 軽くチューブを傾けることによって、多くの可能な限りの水として破棄します。残りの水と幼虫を注ぐことによって 1 つの管に幼虫を結合し、蒸留水でチューブを入力します。
   5. すべての幼虫は沈み、軽くチューブを傾けることによって可能ように同様に多くの水を削除するまでは、30-60 秒を待ちます。2-4 回に完全削除ショ糖とすべて表示食品洗浄を繰り返します。
   6. 多くの可能な限りの水として破棄し、デカントで幼虫を空の 35 mm のペトリ皿に転送します。チューブを水でスプレーし、幼虫転送を支援する小さなペイント ブラシを使用します。
   7. P1000 マイクロ ピペットを使用してシャーレから余分な水を削除します。~0.5 mL の幼虫の脱水を防ぐために水を残します。
   8. 幼虫が脱出することを防ぐために皿の上ふたを配置します。蓋と皿の間の小さな隙間を通って脱出する幼虫の能力を減らすために上下逆さま蓋をオンにします。10 ~ 20 分回復する幼虫を許可します。
2. きれいな幼虫 (オプション 2) を分離します。
   注: 幼虫を洗浄するためこの方法は洗浄手順の中に幼虫を窒息の可能性を軽減します。この方法を使用するには、上記の手順 4.1.1-4.1.2 を実行した後次の手順に進みます。
   1. セル ストレーナーを配置 (300 μ m、72 h AEL の幼虫を保持またはより古い) 50 mL のチューブの上に。
   2. 確認がない大人の体や食べ物のかすのショ糖液の表面に浮かんで後、メッシュ画面上すべての幼虫をトラップするこし器を通して、幼虫を含む最上位のレイヤーを注ぐ。50 mL のチューブが塗りつぶされるまで蒸留水で十分に幼虫を洗います。
   3. チューブから幼虫に使用される水の処分とセル ストレーナーを取り外します。空のチューブの上に幼虫を含むストレーナーを置き、50 mL のチューブが塗りつぶされるまで蒸留水で再び幼虫を洗浄します。
   4. 空 35 mm シャーレ、こし器を逆さま裏返し、ペトリ皿に幼虫を転送するセル ストレーナーの上から水をスプレーします。小さなペイント ブラシを使用して残りの幼虫を転送します。
   5. 手順 5 に進む前に上記 4.1.7 を手順に進みます。

5. 測定と計算

1. 段ボール箱を外し、すぐに幼虫をプレートに転送する前にゲルの表面温度をチェックします。段ボール箱、温度平衡を中断することを防ぐために開いている時間を最小限に抑えます。表面が乾燥している場合は、表面に少量の水をスプレーします。
2. 単一方向のグラデーション (リリース ゾーン (ゾーン 3 および 4 6 ゾーンから出る) の間各プレートの中心に近い 150 ± 50 幼虫を配布します。図 2)。
   注: 双方向グラデーションの各半分の中間地帯に沿って 200 400 幼虫を配布 (図 2 D)。
3. 各アッセイ プレートをクロールから幼虫を防ぐためにマイクロ プレート蓋を置きます。Agarose のゲルの幼虫の選択肢に影響を与える可能性があります光の露出を防ぐために段ボール箱を使用してセットアップをカバーします。
   注: 双方向のグラデーションがない必要になるプレートが大きいので幼虫の最寄りの温度は中間地帯で、蓋付きプレートをカバーします。その結果、いくつか幼虫は端を蓄積し、クロールする機会を持っています。、
4. 単一方向のグラデーション、15-35 分 (表 4) 幼虫の年齢に応じて、双方向グラデーションの 10-30 分のため続行するアッセイを許可します。
5. 段ボール箱とマイクロ プレート蓋を取り外します。デジタル カメラを使用して上からプレートを撮影します。調査官より良いコントラストと明るさ解析のための 1 つを選択できるように、各アッセイ プレートの 2 枚の写真を取る。
6. 幼虫のすべてを削除吸引によりアッセイ プレートから、どこでもプレート外。
7. アッセイ プレート、チューブ、および蒸留水で十分にセル ストレーナーを掃除します。Agarose の表面が破損している場合を除き、その日に準備アッセイ プレートを再利用します。
8. 各ゾーンにおける幼虫の割合を計算します。
   1. マーキングをイメージに追加することができます任意のソフトウェアを使用してアッセイ結果の写真のイメージを開きます。アッセイのゾーンを示すときに、アッセイ プレート上の分界に基づいてすべての 2 cm の垂直線を描画します。
   2. 各ゾーンで幼虫の数をカウントし、番号を記録します。壁のいずれかから 0.5 cm の地域で幼虫はカウントされません。ゲルは壁に近い厚いと表面温度は、これらの地域ではリニアではありません。
   3. 単一方向のグラデーションでは、次のように各ゾーンの割合を計算します。
      (特定の 2 cm ゾーンで幼虫の数)/(6 ゾーンにおける幼虫の合計数) x 100。
   4. 双方向のグラデーションでは、次のように各ゾーンの割合を計算します。
      (特定の 2 cm ゾーンで幼虫の数)/(グラデーションの各側面の 5 つのゾーンで幼虫の合計数) x 100。

結果

18 ° C から 28 ° C の単一方向を確立するには、グラデーション、2 つの水のお風呂の温度を 16.8 ° C と設定 31 ° C我々 はすべての 6 ゾーン、ゾーン間の境界線の上部と下部の部分内の 26 の位置に agarose のゲルの表面 (図 2, 2 e) の極端な両端の温度を測定することによって 13 点の温度を取得します。グラデーションの温度分布はほぼ線形 (Y = 0.9672 * X + 16.19、R² = 0.9961) (図 2 e)。

我々 は様々 な年齢での制御 (w¹¹¹⁸) の幼虫の温度の設定を試金。1^st (24 ± 1.5 h AEL)、2^nd (4...

ディスカッション

このプロトコルの成功を確保するため、幼虫の実験を行うための十分な番号を取得する手順を取ることが重要です。あらかじめ産卵を改善するために 2-3 d 酵母貼り付け含むバイアル中のハエを餌が含まれます。バイアルは水の瓶を含むトレイに置かれ、食品の水分を保持し、通常の光サイクルへの露出を確保しながらの幼虫によって効果的な摂食を促進する透明なプラスチック袋に封入する必要があります。ただし、ハエが引っかかるので、ソフトに酵母ペーストしないでください。バイアルあたりの女性の数は遺伝子型に依存します。W¹¹¹⁸、場合通常 12 〜 女性と 〜 6 男性 3 h の卵を産むために十分なです。通常 2 バイアルは単一方向の試金のため十分な幼虫 (幼虫 100-200) 皿の上に配置するを提供します。フライのストックが野生型よりも少なく卵を産むか、孵化幼虫の割合が減少 (30-35/バイアル) まで追加女性と男性を追加します。

これらのアッセイを実行するとき、予期せぬ変動の多くの原因があります。発達段階、幼虫の温度選好に影響を与えます。したがって、定義された段階...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
グラジエントアッセイ装置
PolyScience 9106, 冷蔵・加熱 6L 循環バス	Thomas Scientific	9106	このモデルは販売を終了しています。更新された交換モデルには、120 V、60 Hz用の1186R00および1197U04、または240 V、50Hz用の1184L08および1197U04が含まれます。
アルミニウムアッセイプレート(単一方向グラジエント用)			外寸:14 x 10.1 x 0.9 cm、内寸:12.9 x 8.7 x 0.8 cm、黒色アルマイト。
アルミプレート(双方向グラデーション用)			25 x 22 x 0.2 cm、ブラックアルマイト。
アルミブロック			の外形寸法:25.5 x 5 x 1.4 cm、内部チャネルのパラメータを図1Dに示します。
アルミブロックとチューブ用コネクタ	McMaster-Carr	91355K82
Tygon サニタリーシリコンチューブ	Tygon	57296	1/4" ID x 3/8" OD x 1/16" wall
Name	Company	カタログ番号	<>strong>コメント
>Itemsアッセイ用試薬
Pestle	USA Scientific	17361	1.5 mL 微量遠心チューブ用乳棒
温度計	Fluke	51II
熱電対		Fluke K タイプ
ユニバーサルマイクロプレート蓋	Corning	6980A77
35 mm ディッシュ	Corning	9380D40
ラベリングテープ(双方向グラジエント用)	フィッシャーサイエンティフィック	15-951	フィッシャーブランドラベリングテープ 2 in x 14 yds
アガロース	インビトゲン	16500500	1%溶液を調製
ショ糖	シグマ	S0389-5KG	アッセイ開始直前に18%溶液を調製
ペイントブラシ	フィッシャーサイエンティフィック	11860
50 mL 遠心分離チューブ	デンビル	C1062-P
スクープラ	フィッシャー サイエンティフィ	14-357Q
500 mL 丸型広口ボトル	パイレックス	1395-500
セルストレーナー (300 mm 細孔)	PluriSelect	43-50300	幼虫洗浄用オプション
段ボール箱 (バイアルトレイ)	ジェネシー サイエンティフィック	FS32-124
Name	会社	strongカタログ番号	コメント
ショウジョウバエ food
蒸留水			22,400 mL
コーンミール、イエロー(極細メッシュ、植毛) 20 kg	LabScientific Inc.	NC0535320	1,609 g
ブリューワーズ酵母 100 ポンド	MP バイオメディカル	ICN90331280	379 g
NutriSoy®大豆粉 (10 kg/unit)	Genesee Scientific	62-115	221 g
Drosophila 寒天、Type II (5 kg)	Genesee Scientific	66-103	190 g
Karo light corn syrup	Karo		1,700 mL
Methyl 4-hydroxybenzoate (200プルーフエタノールに懸濁	Sigma Aldrich	H5501-5KG	72 g/240 mL
Propionic acid puriss. p.a.,>99.5% (GC)	Sigma Aldrich	81910-1 L	108 mL
リン酸 ACS試薬、≥H2O Sigma	Aldrich	438081-500 mL	8.5 mL 中 85 wt