ここで、分離、拡張、および犬の卵巣組織から間葉系幹細胞の分化の手法について述べる。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
この記事について
サマリー
要約
間葉系幹細胞 (MSCs) の金利は、分離、拡張、および文化の容易にするため過去 10 年間増加しています。最近、研究はこれらの細胞を持っている広い分化能力を実証しています。卵巣は、MSCs が豊富です、それは頻繁、生物系廃棄物として卵巣摘出手術後破棄されるため細胞ベースの治療のための有望な候補を表します。隔離、拡張のための手順を説明し、細胞選別の必要なし、犬の卵巣由来の分化技術。このプロトコルは、臨床試験のこれらの高い微分可能セルの幅広い適用性のため再生医療のための重要なツールを表し、治療を使用します。
概要
幹細胞に焦点を当てるを過去 10 年間強力な再生医療の治療法の発見の集団の目標によって支えられている研究努力で大幅に増加している発表された研究の数です。幹細胞がある 2 つの主要な定義のマーカー: 自己改修と分化。間葉系幹細胞は正規の組織の売り上げ高し、分化1胚性幹細胞と比較した場合の制限のより強い能力を持っています。最近では、多くの研究は、MSCs の分化の広い範囲を示しているし、の議論の下でトピックがすべて2胎児および成体幹細胞の違いが存在するかどうか。
卵巣表面上皮は、コミットされていない細胞の層、比較的少ない差別化、表現両方上皮と間葉系マーカー3、さまざまな種類の細胞に分化する能力を保持します。環境シグナル4。卵巣の幹細胞の正確な位置はよく知られている; ないです。しかし、逃げずに bipotential 前駆細胞が生殖細胞5に上昇を与えることが提案されている.これらの細胞が間質起源6を持っているまたはまたは卵巣表面7に近位に存在する、免疫学的研究、仮説を立てた。迅速な接着と細胞の人口の選択セルの人口を明確に特定するという仮説を検証する実....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
プロトコル
この実験は、犬の滅菌プログラムで手術後寄贈 4 雑種メス犬の卵巣を行った。この実験は UNESP-FCAV (プロトコル番号 026991/13) の動物の使用の倫理委員会で承認されました。
1. 実験準備
- 準備またはダルベッコ滅菌リン酸緩衝生理食塩水 (DPBS) カルシウムやマグネシウムなしの 500 mL を購入します。
- 準備、コラゲナーゼの DPBS 1 mL に酵素 40 μ g を混合することによってソリューションをストックします。0.2 μ m のシリンジ フィルターを使用してフィルターを適用し、-20 ° C で 2 mL 因数を格納
- ダルベッコ変法イーグル培地 (DMEM) 低グルコース 10% 胎児血清と抗生物質の 1% から培地を準備します。
- 滅菌材料を集める: ハサミ、鉗子、培養フラスコ料理・ チューブ ・ 10 mL と 5 mL のピペットです。
- 標準的な細胞培養実験装置を使用して: 生物学的安全キャビネット (BSC)、5% CO2と 38 ° C、および遠心分離機に設定セル文化インキュベーター。
- きれいに BSC: 70% に滅菌手袋をはめた手で UV ライトを使用して、エタノール。
2. 卵巣から幹細胞の分離
- 手術後....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
結果
犬の卵巣から幹細胞の分離:
卵巣の MSC 分離手順は、図 1のとおりです。手術、組織のミンチ、コラゲナーゼの消化力、メディア変更文化の初めの後の 3 時間後、急速なプラスチック接着特性と推定される MSC 人口が犬の卵巣組織から正常に分離された.収穫された細胞は培養皿のプラスチック表面に付着かつ典型的な MSC のような形状 (図 3) と形態学的に均質な単一層文化へと成長しました。
卵巣の MSC のキャラクタリゼーション In Vitr.......
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
ディスカッション
ここ MSCs が卵巣摘出後生物系廃棄物をある犬の卵巣組織から分離でき、証拠を提供します。卵巣に多くの細胞のタイプを見つけることができます、という事実のために、プラスチックは、線維芽細胞のような形態の単分子膜の成長細胞を正常に選択への急速な遵守に基づいて MSCs を選択するプロトコルを提案しました。
MSCs の骨髄からの派生の最初レポートは文化11; の最初の 48 時間の間に、MSCs のプラスチック付着能に基づいていたただし、それ報告されている、このメソッドを分離する異種集団表現型と機能的には、少なくとも骨髄12の可能性。本培養法はまたプラスチック接着能力によってセルを選択し、望ましいセルを並べ替えを必要としない、多くの細胞型が組織から間葉系細胞を分離します。仮説のより同質な人口になる迅速な接着と細胞の人口を選択した場合、間葉系幹細胞は、細胞接着8で重要な役割を果たす多くの受容体を表現、という事実のために、信頼性の高い MSC プロ.......
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
開示事項
著者が明らかに何もありません。
謝辞
著者は、卵巣を提供する親切 UNESP-FCAV で犬の滅菌プログラムを認めます。この作品は、FAPESP (プロセス号 2013/14293-0) と岬からの補助金によって支えられました。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| DPBS | サーモフィッシャー | 14190144 | |
| コラゲナーゼ I | サーモフィッシャー | 17100017 | |
| 組織フラスコ | コーニング | CLS3056 | |
| DMEM 低グルコース | サーモフィッシャー | 11054020 | |
| FBS | サーモフィッシャー | 12484-010 | |
| TrypLE express | サーモフィッシャー | 12604021 | |
| StemPro脂肪形成分化キット | サーモフィッシャー | A1007001 | |
| StemPro 軟骨形成分化キット | サーモフィッシャー | A1007101 | |
| StemPro 骨形成分化キット | サーモフィッシャー | A1007201 | |
| STEMdiff 決定的内胚葉キット | StemCell | 5110 | |
| ペニシリン-ストレプトマイシン | サーモフィッシャー | 15070063 | |
| CD45 | AbD セロテック | MCA 2035S | |
| CD34 | AbD セロテック | MCA 2411GA | |
| CD90 | AbD セロテック | MCA 1036G | |
| CD44 | AbD セロテック | MCA 1041 | |
| ネスティン | ミリポア | MAB353 | |
| β-チューブリン | ミリポア | MAB1637 | |
| DDX4 | Invitrogen | PA5 -23378 | |
| IgG- FITC | AbD セロテック | STAR80F | |
| IgG- FITC | AbD セロテック | STAR120F |
参考文献
- Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D. Mesenchymal stem cells. Handbook of Stem Cells (2nd Edition). Atala, A., Lanza, R. , Academic Press. 513-527 (2013).
- Zipori, D. The nature of stem cells: state rather than entity. Nature Reviews Genetics. 5 (11), 873-878 (2004).
- Auersperg, N., Wong....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
再版と許可
