慢性的ストレス マウスに Xiaoyaosan の抗うつ効果の評価

サマリー

ここでは、うつ病マウスモデルを確立し、慢性的な予期しない穏やかなストレス (CUMS) に関連付けられている動作の変更を観察 Xiaoyaosan の抗うつ効果の評価プロトコルを提案します。

要約

抗うつ薬と心理療法の標準化された使用、に加えて、伝統的な中国医学の使用法 (MDD) 大鬱病性障害患者の全体的な改善をリードしています。したがって、本研究の目的は、うつ病マウスモデルを確立し、慢性的な予期しない穏やかなストレス (CUMS) に関連付けられている動作の変化を観察し、Xiaoyaosan の抗うつ効果の評価だった。マウスが 4 つのグループにランダムに分け: 対照群、モデル グループ、処置群と Xiaoyaosan、およびフルオキセチン治療グループ。すべてのマウスに個別に檻に保たれ、うつ病は、21 日間 CUMS のいくつかの設計操作にそれらを公開することにより、マウスで誘導されたプロトコルで説明されているようです。コントロール グループおよびモデル グループのマウスは、治療群マウスがいずれかの Xiaoyaosan を受けながら 0.5 mL の蒸留水を受信 (0.25 g/kg/日)、フルオキセチン (2.6 mg/kg/日)。研究で使用される薬剤量を全体の 3 週間の間に毎日与えられました。うつ様行動を推定する一連のパラメーター コート状態、体重などオープン フィールド テストの得点とショ糖の好みテストの得点を記録しました。データ分析は、マウスは大幅変更モデルの挙動はに比べて Xiaoyaosan とフルオキセチンの治療によって改善された対照群マウスの挙動を示した。現在の調査結果は CUMS 誘発マウスの挙動に関する Xiaoyaosan の抗うつ効果を実証し、Xiaoyaosan 処方から化合物は上の有益な効果を考慮した、うつ病の治療の価値があるかもしれないことを明らかにしました。うつ病のような動作です。

概要

MDD は高い再発、慢性精神病が永続的な低気分、うつ病、自尊心、精神遅滞、興味の喪失とプレゼント睡眠障害、深く悲観的または自殺傾向;人間の健康と社会安定化¹に大きな損害をもたらしました。世界の障害の主な原因の一つとなっています、それは 2030 年に従って世界保健機構^2,3疾病の主な原因の一つかもしれません。現在、抗うつ薬と心理療法は、MDD を治療するために最初の選択であると見なされます。しかし、MDD と診断された患者の膨大な数が連続的な薬物や療法に応答しない、治療抵抗性うつ病⁴を持つものとして記載されています。

Xiaoyaosan は数千年中国⁶宋以来の心理的な病気の治療に広く使用されている古典的な中国複合⁵です。8 中国のハーブで構成される:基数柴胡、基数芍薬アルバ、基数ヒカゲノツルニンジン、茯、莪処理 Macrocephalae、基数抗莪和漢 Recens、および中ペパーミント。Xiaoyaosan 複数の成分が含まれている複数のターゲットを持つ、複数経路⁷を利用します。Xiaoyaosan は、様々 な疾患関連精神疾患を治療するための安全かつ効果的な数式によく示されているし、近代的な研究がまた化合物^{8,9、不況対策機構に焦点を当てて 10}。MDD の病因はまだ不明、モノアミン仮説、神経伝達物質受容体仮説、神経内分泌機能変更仮説、免疫異常仮説など、多種多様な仮説があるにもかかわらずなど。いくつかの研究は、Xiaoyaosan の抗うつ効果が抑うつのような改良型として上記仮説^11,12、およびその治療作用マニフェストの物質的基盤との接続を持っていることを示しています。行動¹³。

また、うつ病の有病率と現代社会は労働力、早期退職や高価な治療¹⁴の削減から苦しんでいます。高価な治療には、正確な望ましくない結果として副作用¹⁵の正確な期待医療費の範囲は、厳格な医師の診察が必要です。Xiaoyaosan の中国のハーブはアクセス コンポーネント、ユニークなエフェクトおよびわずかな副作用。そのアプリケーションは、現代医療の負担を軽減する役割を再生できます。したがって、Xiaoyaosan のアプリケーションのより理論的な基礎を提供する代替治療は年々、増加率、うつ病の治療のために提供される必要があります、同時に人間の健康を改善する必要があります。本稿では、マウスの憂鬱のモデルを確立することによりうつ病のような動作を防ぐために Xiaoyaosan の使用を含むプロトコルについて説明します。オープン フィールド試験およびショ糖の好みテストは、Xiaoyaosan の抗うつ薬の効果を確認する使用されました。

プロトコル

このプロトコルは、北京中医薬大学の動物倫理委員会によって承認され、ケアと中国の実験動物の使用のためのすべてのガイドラインに従った。実験中に、不慮の死の状況はなかったし、本研究で安楽死される動物は不要します。

1. 実験のため薬の準備

注: 中国のハーブに購入されリュー * 北京中国医薬大学によって認証されます。Xiaoyaosan には、6:6:6:6:3:6:2:2 の比率で次の 8 伝統的な中国薬が含まれています: 基数ヒカゲノツルニンジン、基数芍薬アルバ、茯、基数柴胡、基数抗、莪処理 Macrocephalae、中ペパーミント、大黄和漢 Recens。

1. 前述の¹⁶Xiaoyaosan を準備します。
   注意: 我々 は日中友好病院の漢方準備室でこれらの化合物を抽出、抽出率 18.8% であった。
2. 高性能液体クロマトグラフィー質量分析 (MS/LCMS)¹⁷Xiaoyaosan の品質を確認します。

2 実験手順のマウスを準備

注: 実験プロシージャの 12 週間を高齢者、健康の 60 男性 c57bl/6 j マウス、選ばれた 18 と 22 g の間の重量を量る各マウスで。

1. 典型的な特定病原体無料 (SPF) 動物室におけるケージ内マウスを個別に保持 (22 ± 1 ° C、12/12 h ダーク/ライト サイクル、相対湿度: 30 ~ 40%) CUMS 手順の前に 1 週間。
2. ランダムに制御グループ、モデル グループ、Xiaoyaosan の治療グループ、または自分の体重によるとフルオキセチン治療グループにすべてのマウスを分割します。各グループは、15 匹のマウスを持ちます。
3. 実験の開始前にマウス マーキング ペンを使用して彼らの尾の各グループ内の番号します。
4. 5 日サッカロースの好みテストを使用してすべてのマウスをテスト (手順 5 参照) とオープン フィールド テスト (手順 6 を参照)。

3. マウスの抑うつ状態の誘導

注: うつ病を誘発するには、モデル グループおよび 2 つの治療群のマウスを施行した CUMS 21 日¹⁸.実用的な状況に応じて計画を変更できますが、同じストレッサーを継続的に使用できないという原則に従う必要があります。

1. 21 日連続¹⁹次 7 ストレスの任意の 2 つのために毎日マウスを公開します。モデリング計画は、次のとおりです。
   1. 月曜日に、絶食 (24 h、8:00、8:00 の各ケージのフィードは空) と水剥奪 (24 h、8:00、8:00 の各ケージの飲料ボトルを削除) にマウスを公開します。
   2. 火曜日に、拘束応力 (3 h、8:00、11:00 の小さなプラスチック製の浴槽で抑制マウス) と空ケージ (8:00 ~ 19:00 午後 11 h の各ケージのスペース削除) にマウスを公開します。
   3. 水曜日に、ウェットと汚されたケージ (各ケージと 24 時間、8:00、8:00 湿らせておきますに水を注ぐ) にマウスを公開 (24 時間、8:00 ~ 8:00:00 1 つのケージに 5 匹を置いて) ケージを混雑しています。
   4. 木曜日に、拘束応力と冷たい水泳^20,21 (力のそれぞれが 5 分の氷を水で明確なガラスの水槽で泳ぐマウス) にマウスを公開します。
   5. 金曜日に、ウェットと汚されたケージおよび絶食のマウスを公開します。
   6. 土曜日に、拘束応力と混雑したケージにマウスを公開します。
   7. 日曜日に、空のケージと冷たいスイミング マウスを公開します。
2. モデリング (21 日) の終わりまで毎週コート状態と体重を記録します。7 つの異なるボディ部分からスコアの合計としてコート状態の合計スコアを計算: 頭、首、背コート、腹側のコート、前足、尾、後足は前足。1 つのスコアは手入れコートを表し、0 のスコアはボサボサ コート²²を。
3. 5 日サッカロースの好みテストを実行 (手順 5 参照) とオープン フィールド テスト (手順 6 を参照) 実験の終わりに。

4. Xiaoyaosan の管理

注: Xiaoyaosan の線量 (0.25 g/kg/日) 上記⁹として満足のいく効果に基づいて選ばれました。

1. 実験では、Xiaoyaosan とフルオキセチンのサスペンションを準備し、すぐに使用することを確認する蒸留水を使用します。
2. コントロール グループおよびモデル グループのマウスに 0.5 mL の蒸留水を胃内投与モデリングの前に毎日与えます。一方、Xiaoyaosan を与える (0.25 g/kg/日) またはフルオキセチン (2.6 mg/kg/日) を 2 つの治療群のマウス。

5. ショ糖の好みテスト

注: テストの前に水や食品の剥奪は適用されません。プロトコルは、以前に報告された²³として行われました。

1. 最初の 2 日間、水道水で満たされた 2 つのボトルを持つマウスを個別に家します。
2. 次の 2 日に 2 つのボトルは 1% ショ糖液でいっぱいマウスを与えます。
3. 最後の日、マウス 24 h、水道水との 1 つおよび 1% ショ糖液と他の 2 つのボトルを与えます。マウスの飲水行動の側の好みを除去するために 12 h 後 2 つのボトルの位置を切り替えます。
4. 消費のショ糖液と水道水の両方の量 (mL) を記録します。ショ糖の優先順位を次のように計算: ショ糖好み (%) = ショ糖消費量/総液体の消費量 × 100%。

6. オープン フィールド試験

1. 4面黒艶木箱とぼんやり点灯と静かな部屋にオープン フィールド試験を実行します。青い線で天を 25 等しい正方形に分割します。
2. 各マウスのオープン フィールドでアクセス前に 5% アルコールをきれい。その後、優しくオープン フィールドの中央にマウスを配置します。
3. フィールド右上高精細デジタル カメラ約 200 cm を中断し、5 分それぞれのマウスの動作を記録します。
4. ビデオ追跡システム ソフトウェアでマウス行動ビデオを評価し、総走行距離とセンター ゾーンにエントリの数のデータを記録します。
5. 統計ソフトウェアによって移動した総距離、センター ゾーンにエントリの数のデータを分析します。

結果

博士秀牙鼎らによって結果が以前公開されていることに注意してください。¹⁸

データは、平均 (SEM) の平均 ± 標準誤差として表現されました。一方通行 ANOVA または非パラメトリック テストは一般的なデータに基づく正規性の検定と分散の均一性の検証のために使用されました。LSD テストは、グループ間の比較に使われました。さらに、一般化線形モデル (GLM) の繰り返しの測定プロセスは繰り返し測定データのための一方向の分散分析を実施する使用された (スコアをコートし、体重) と比較して差異の多変量解析プロセスを採用して時に各グループ間 (LSD 法) をポイントします。

CUMS 誘発マウスの物理的な状態

ディスカッション

本研究で使用される CUMS モデルはうつ病²⁴のストレス素因モデルを構築する一般的な方法です。強力な予測的妥当性²⁵をこのモデル メソッドには示されている抗うつ薬は CUMS のほとんどの症状を復元できます。このメソッドによって動物は慢性的な予測不可能なストレス刺激を受け、低下場所優先エアコン、無快感、障害感情のような行動²⁶など主要な不況の徴候、コアを開発します。ここでは、このプロトコルでは、Xiaoyaosan またはフルオキセチンの連続使用は CUMS 誘発モデル マウスの実験で得られた結果によるとうつ病のような動作を改善できることがフルオキセチンは、Xiaoyaosan の介入効果を証明するために陽性対照薬としては.

コートの評価スコア、オープン フィールドとは異なりテスト、強制水泳試験や目新しさの抑制給与試験、ヒトのうつ病に関連付けられていないが、うつ病モデルの最も一般的な信頼性の高い、よく検証法は、メジャーマウス

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Chinese Herbs	Tongrentang (Bozhou, AnHui) Decocion Pieces Limited Company	-	薬は中日友好病院の漢方薬準備室で抽出され、蒸留水を使用してXiaoyaosanの懸濁液を調製し、用量は0.25g / kg / dでした。
フルオキセチン	PATHEON FRANCE	5545A	蒸留水を使用してフルオキセチンの懸濁液を調製し、用量 2.6 mg/kg/d を調製しました。
C57BL/6j mice	Beijing Vital River of the Charles River Company	SCXK 2011-0004	12週齢の健康な雄C57BL/6Jマウス60匹をCharles River CompanyのBeijing Vital Riverから購入しました。
マウスケージ	スタイリングバイオテクノロジー	34853016	318回;202回;135 mm
蒸留水	-	-	実験では水を使用しました。
スクロー	スシグマ	-	スクロースは、1% スクロース溶液を調製するためのスクロース選好試験で使用されました。
ACS-2EAS電子天秤北京	Hengzhongheng電子技術有限公司	●	さまざまな段階でマウスの常衡の重さを量るために使用されました。
木製の黒い光沢のないボックス	-	-	(40 cm x 40 cm x 15 cm)、青い線で25の等しい正方形に分割されています。
WV-CP470カメラ	パナソニック、日本	-	オープンフィールドテストの全過程を記録するために使用されたHDデジタルカメラ。
Etho Vision 3.0 Software	Noldus, Wageningen, Holland	-	マウスの運動機能と感情を評価するために使用されたビデオ追跡システム。
SPSS Statistics 21.0ソフトウェア			IBM-SPSS 21.0ソフトウェアを用いてデータの解析を行い、一般データには正規性検定に基づく一元配置ANOVAまたはノンパラメトリック検定と分散の均一性検定を、グループ間の比較にはLSD法を採用した。
Graphpad Prism 6.0 ソフトウェア	Graphpad Software,Inc.USA	-	統計グラフの描画には、Graphpad Prism 6.0 ソフトウェアを使用しました。