方法論記事

ラットの血液サンプル コレクションの代替方法として鎖骨下静脈穿刺

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DOI：

10.3791/58499

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2018年11月18日

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1Department of Cardiology, The Second Xiangya Hospital, Central South University, 2Department of General Surgery, The Second Xiangya Hospital, Central South University

この記事について

サマリー

ここでは、ラットの鎖骨下静脈から血液サンプルを収集するためのプロトコルを提案する.

要約

動物実験では十分な血液量が採血が欠かせません。ラットの尾静脈からの採血は人気があり、ストレスの少ないレトロ軌道叢サンプル コレクションなど、他のより積極的な方法と比べています。しかし、この血の収集方法は時々 不十分な成功率によって制限されます。鎖骨下静脈穿刺による採血の方法を紹介します。鎖骨下静脈は鎖骨のすぐ下に位置する、この静脈は血のコレクションのボリュームの要件を満たすために十分な大きさです。この方法は必要な血液量が採血コレクションの安全かつ適切なことが分かった。鎖骨下静脈穿刺による採血は、ラットにおける失敗の尾静脈採血の場合代替血液収集方法として役立つことができます。

概要

血のコレクションには、動物の研究に不可欠です。レトロ軌道神経叢、頚静脈、伏在静脈、尾血管や頚動脈1,2,3,4ターゲット静脈採血があります。時に、腹部大動脈、下大静脈も心5,6,7から血を取得でした。このような機会に動物が犠牲になります、その後観測には使用できません。これらのメソッドを使用するため、実験の毎日の仕事のより少ない。ラットの尾静脈からの採血は人気があり、ストレスの少ないと比較すると上記の方法8。

ただし、尾静脈からの採血は時々 不十分な成功率によって制限されます。場合によっては、このメソッドによって十分な血液量を得ることが困難も。鎖骨下静脈が十分に大きいと鎖骨の骨のすぐ下に、鎖骨下静脈穿刺は血液サンプリング ルーチン血液コレクション メソッドが成功した場合の代替方法をすることができます。ラットにおける鎖骨下静脈穿刺による採血の方法を紹介します。

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プロトコル

本研究は、動物研究第二 xiangya の第 2 病院 (中国・長沙市) から中央南大学倫理委員会によって承認されました。原稿が到着に従って準備された (動物研究: 報告で生体実験) のガイドライン9。

1. 材料と動物の準備

  1. 必要な材料の準備: 粘着テープ、脱毛剤、75% エタノール、採血管、2.5 mL の注射器の針 (24 G、0.6 mm × 25 mm)、毛シェーバー、電子スケール、ゲージ (材料の表を参照) に接続します。
  2. 20 Sprague-dawley (SD) ラット、高齢者は 8-10 週間と計量 153 200 g (材料の表を参照) を使用します。10のケアおよび実験動物の使用のためのガイドに従いラットを維持します。
  3. 食品や飲料水への無料アクセスと標準的な条件の下で家のラット。530 cm2ケージ木製シェービング寝具 (ケージごと 2 ラット) にしてください。温度制御室内温度 25 ° c. のまわりで動物を維持します。
  4. 全身麻酔を誘導する (ペントバルビ タール ナトリウム 40 mg/kg) 鎖骨下静脈穿刺前に腹腔内注射を通してすべての動物。
  5. ラットを仰臥位で配置します。後肢を快適な位置に固定し、上肢をトランクのすぐ横に体軸に平行修正します。
    注: このプロシージャ (図 1) の機械的人工換気は必要ありません。
  6. きれいに毛皮を削除する鎖骨スペースの両側 (毛剃りと脱毛剤、材料表を参照してください)、任意の目に見える汚れ。首と 75% エタノールと胸部の皮膚を拭いてください。清潔で乾いたガーゼで穿刺のための区域を維持します。

2. 採血手順

注: 両側鎖骨下静脈穿刺に適している、ここで我々 は穿刺の右側を選択します。位置と右鎖骨の方向は、演算子の左親指 (図 2) によって識別されます。胸骨上窩、胸骨上窩、針 (図 2) の方向に人差し指でそっと。

  1. ヘパリン溶液 (10 IU/mL) で滅菌 2.5 mL シリンジをすすいでください。
  2. 穿刺部位 0.5 mm (図 3) の右の鎖骨の外側 1/3 地域に尾を探します。穿刺部位の皮膚に注射器をゆっくり移動します。針に入る鎖骨皮膚と、オペレーターの右手 (図 4) では否定的な圧力を適用します。
    注: 平均と最大の血液量は、1.0 mL と 1.4 mL、それぞれ。針の方向は胸骨上窩へ配置され、それにちょうど後部の鎖骨にほぼ平行でなければなりません。通常、鎖骨下静脈はこの方向で約 2 mm の針を挿入することによってアクセスできます。針が静脈と、血は否定的な圧力の下で注射器を入力します。
    1. 十分な血液量が描画されるまでの負圧を維持 (図 5)。
  3. 鎖骨下静脈採血に失敗した場合、皮下に針を撤回し、胸骨の少し内側の針の方向を調整します。
    1. 3 つの試みが失敗すると、同じ側の鎖骨下静脈を避けるため、採血の側を使用してください。
  4. 採血後、穿刺針を削除し、出血を止めるための 1-2 分の穿刺部位に圧力を適用します。
    注: 圧力は窒息を防ぐために非常に穏やかなする必要があります。

3. 血液サンプル処理

  1. (EDTA) と抗凝固剤被覆真空管とプラズマを収集する 1600 x g で 10 分間遠心に血液サンプルを転送します。
  2. クリーン チューブと-80 ° c (図 6) ストアに上清を吸引します。

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結果

20 SD ラットの合計 (男性 n = 10、女性 n = 10) ここで使用されました。ラットや他の動物の血 collectionwas ラットにおける鎖骨下静脈から以上 20 血液サンプリングをした熟練のオペレーター、鎖骨下静脈穿刺を持たない初心者のための演算子を実行の経験します。操作前に、初心者は熟練オペレーターにより行われる少なくとも 3 の手技を見た。

採血は、右鎖骨下静脈アクセスを 17 匹のネズミで成功しました。3 ラット (熟練群で 1) と初心者のためのグループの 2 のこのプロシージャが失敗した、採血これら 3 ラットの左鎖骨下静脈アクセスを成功しました。時間コースと血液量は、それぞれのケースを表 1に示します用に収集されます。初心者グループ (80%) と熟練したグループ間類似していた成功率 (90%, p = 0.531)。3 ラットにおける追加左鎖骨下静脈アクセスを含むとき...

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ディスカッション

ここでは、鎖骨下静脈からの採血の方法を紹介してラットの採血のため、このメソッドが実行可能な安全で、適用可能なことを示します。このメソッドは、ペース メーカー リード植込み患者11で鎖骨下静脈穿刺から派生されます。鎖骨下静脈は、ちょうど後部と鎖骨尾は位置し、腋窩静脈からの続きです。それは第一肋骨の外側の境界線から12前斜角筋の内側縁に実行されます。ここから、それは腕頭静脈を形成する内頚静脈と結合し、胸骨上窩 (図 8) のすぐ下に、スーパーの下大静脈に流出させます。鎖骨が容易に識別し、鎖骨下静脈と鎖骨の間の明確な解剖学的関係があります。ここでは、この臨床スキル動物実験に適用しました。ヒトとラットにおける上肢の方向が異なるため、上肢は穿刺 (図 1) を容易にする鎖骨尾のスペースを公開する処理中にトランクのすぐ横に配置されます。

鎖骨下静脈は尾静脈よりもはるかに大きいです。...

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開示事項

この作品は、国家自然科学基金の中国第 81670269、第 81500355 号 81500226 からの助成金によって支えられました。

謝辞

どれもが宣言されています。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
ratsHunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (中国湖南省長沙市) 
スタスティカルソフトウェアSPSS Statistics 17
脱毛剤France Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(広州市広東省、中国)
2.5 mL シリンジShandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(中国 威海市、山東省)
毛剃り器Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd(中国、上海市)
粘着テープ3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany)
Pentobarbital ナトリウムメルク
75% エタノール薬剤部、中央南大
血チューブ湖北省金興技術&開発有限公司(武漢湖北省、中国)(2ml)
電子スケール東莞Shengheng電子有限公司(東莞、広dng省、中国)
anethesia
hepain南京新白製薬のためのキャンバス手袋(南京、江蘇省、中国)(2mL、12500 IU)
生理食塩水Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(中国湖南省岳陽市) (100ml)
第2襄雅病院採

参考文献

  1. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
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  4. Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies. Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).
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