静脈内合成ペプチド、蛋白質キナーゼ C デルタ阻害剤は、虚血再灌流惹起急性肺傷害の減少を提供する金ナノ粒子のペプチド ハイブリッド以前使いました。ここで、製剤の詳細なプロトコルを示す.他の細胞内ペプチドは同様に定式化することができます。
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この記事について
サマリー
要約
蛋白質キナーゼ C デルタ阻害剤 (PKCδi) は、虚血再灌流による臓器損傷を防ぐために有望な薬剤です。通常、細胞透過性ペプチド、TAT の細胞内動態を活用します。しかし、TAT は、非固有の生物学的活性を示しています。金ナノ粒子 (GNPs) は、認識された毒性のない薬配信キャリアとして使用できます。したがって、我々 は PKCδi を提供する GNP/ペプチド ハイブリッドを使いました。2 つの短いペプチド (P2: CAAAAE と P4: CAAAAW)、95:5 の比率で GNP のサーフェスのプロパティを変更する使用されました。GNPs PKCδi (GNP/PKCi) と共役が蒸留水で安定して 0.9% 塩化ナトリウムとリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) ウシ血清アルブミンやウシ胎児血清を含みます。GNP PKCi の静脈注射は以前肺の虚血再灌流障害を防ぐために示されました。この資料では、GNP/PKCi を策定し、ハンナラ党/PKCi の理化学特性を評価するためのプロトコルについて説明します。ハンナラ党と他のペプチド ベースの薬を策定する同じような方法を使いました。この記事は、うまく行けばこの細胞内薬剤デリバリー技術とその応用を体内にもっと注意を引くでしょう。
概要
肺移植は末期肺疾患1患者を保存します。ただし、肺移植後の重篤な合併症では、障害が残っています。肺移植初期段階で主な移植臓器機能不全は最も有害な合併症1で、その主な原因は虚血再灌流 (IR)-誘発急性肺傷害2。
低温保蔵下ドナー肺における代謝は非常に低いレベルに制限されます。しかし、活性酸素と一酸化窒素合成血流3の停止のためにアクティブ化されます。移植後血行が復元され、活性酸素種と冷たい虚血時に生成される酸化窒素を高める組織の損傷に伴う炎症や細胞死。
IR の傷害を防ぐためには、蛋白質キナーゼ c δ 阻害剤 (PKCδi) は、心、脳と肺4,5,6,7,8で使用されています。これらの研究は、PKCδi が、再灌流時に、炎症とアポトーシスを減少することを示した。それはまた肺の IR 損傷ラットおよび肺移植モデル<....
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プロトコル
1. ペプチド溶液の調製
- ペプチドを取得 (P2: CAAAAE, P4: CAAAAW、PKCδi: CSFNSYELGSL)-20 ° C のフリーザーと室温 (RT) 雪解けから。
注意: ボトル、ペプチドの凝縮から湿気を防ぐために閉じる。 - マイクロ スケールの各ペプチドが 0.01 g の重量を量る。各ペプチドを別の 50 mL の円錐管に入れます。
- P2 チューブに 18.74 mL 純水 (DI) を追加します。
- P4 チューブに純水の 16.93 mL を追加します。
- PKCδi 管を純水で希釈した 50% アセトニ トリル 8.21 mL を追加します。
- 渦ペプチド ソリューションを簡単に。5 分超音波発生装置 (40 MHz) で 50 mL の円錐管を置きます。
- バイオ セーフティ キャビネットにペプチッド解決をもたらします。準備すべてのペプチッド解決は 1 mM をする必要があります。
- 各ペプチド溶液 1 mL を新しい 50 mL の円錐管に転送します。P2 と P4 のチューブに DI 水 19 mL を追加し、各ソリューションを 50 μ M に希釈して、独自のチューブに格納されているように PKCδi チューブに 50% アセトニ トリルの 19 mL を追加します。
2. ....
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結果
ハンナラ党は、する傾向があるは、GNP/PKCi ハイブリッドの生物物理学的特性を評価する注意が必要溶媒中で集計。国民総生産を集約すると、ソリューションの色がピンクから紫 (図 1 a) に変更します。紫外可視分光光度計がより敏感に変化を検出することができます。GNP/PKCi が集約されていない場合吸収のピークは 525 でする必要があります (図 1 b) nm。国民総生産を集約すると、吸収のピークが右にシフトされます。分析、集計は ΔOptical 密度を形成しているときの代替手段として (ΔOD = 外径 525 nm - 440 で OD nm) が減少します。
.......
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ディスカッション
適切な定式化を確保するため、δPKCi ソリューションが 1.6 で説明されている超音波処理ステップを経ることが重要です。ΔPKCi ペプチッド シーケンスには、50% アセトニ トリル溶液中 PKCi を溶解に役立ちます、超音波発生装置、疎水性の部分が含まれています。さらに、細心、手順 2.7 に示した溶媒を混合する非常に重要です。 23δPKCi ペプチドの凝集による手順が適切に行われていない場合、GNP/PKCi ハイブリッドはよくは配合できません。
GNP ベースの製剤は、いくつかの利点を提供します。数ナノメートルから 〜 100 に至るまでよく制御のサイズで GNPs を簡単に合成できる最初に nm。通常より小さい大きさで分類された GNPs ことができます薬を届けるセルに大きいものと小さいものがそのターゲット地域24に容易に拡散よりもより効率的に。 第二に、GNPs は、非毒性の in vitro および in vivo の25、それらに安全な薬物キャリアーを作るし.......
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開示事項
著者は、このプロジェクトで明らかに何もありません。
謝辞
この作品は、カナダ最初研究の卓越性のプログラム、トロント大学でデザインによる医療とオンタリオ州の革新 (日時-08-029) 研究省健康の研究のカナダの協会 (PJT-148847) からの研究補助金によってサポートされます。Mingyao リューはジェームズと肺の損傷、修復、および再生のメアリー デイビー椅子です。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 負に帯電したグルタミン酸ペプチド(P2) | CanPeptide | 配列:CAAAAE-NH2 長さ:6aa 修飾:C末端アミド化<-br / >量:50mg 純度:>95% | |
| 疎水性トリプトファンペプチド(P4) | Canペプチド | 配列:CAAAAW-NH2 長さ:6aa 修飾:C末端アミド化 量:50mg 純度: >95% | |
| &デルタ;PKCiペプチド | CanPeptide | Seqeuence:CSFNSYELGSL-NH2 長さ:11aa 修飾:C末端アミド化 量:50mg 純度:>95% | |
| コニカルチューブ(50ml) | Corning Life Sciences | 3582070 | |
| コニカルチューブ(15ml) | Corning Life Sciences | 3582096 | |
| アセトニトリル | Sigma-Aldrich | 271004-100ML | |
| ソニケーター | ・ブランソン・ウルトラソニックス・コーポレーション | ブランソン2510MTH | |
| マイクロチューブ | Diamed.ca | AD150-N | |
| 金ナノ粒子溶液 | テッドペラ | 15705-5 | 粒子サイズは20nm |
| ロッキングプラットフォームシェーカーVWR | 国際 | 40000-304 | |
| マイクロ遠心分離機 | Eppendorf | 5417R | |
| アクリルキュベット | SARSREDT | 67.758 | |
| UV-Vis分光光度計 | Agilent | Caty 60 UV-Vis |
参考文献
- Yusen, R. D., et al. The registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: thirty-first adult lung and heart-lung transplant report--2014; focus theme: retransplantation. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (10), 1009-1024 (2014).
- Lee, J. C., Christie, J. D., Keshavjee, S.
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再版と許可
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