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方法論記事

ヒト化免疫不全マウスモデルにおける慢性、急性、再活性化HIV感染

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DOI:

10.3791/60315

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2019年12月3日

 ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Human Virology, School of Medicine, University of Maryland, 2Grupo Inmunovirología, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

この記事について

サマリー

ここでは、ヒト化マウスにおけるHIV感染のダイナミクスを研究するための3つの実験的アプローチについて説明する。最初は慢性感染イベントの研究を許可し、後者の2つは一次感染またはウイルス再活性化後の急性イベントの研究を可能にする。

要約

ヒト化NOD/SCID/IL-2受容体γ鎖ヌルマウスは、感染症に関する基礎および前臨床研究で利用することができるヒト免疫のいくつかの特徴を再現する。ここでは、HIV感染のダイナミクスを研究するためのヒト化免疫不全マウスの3つのモデルについて説明する。1つ目は、新生児マウスにおけるCD34+造血幹細胞の肝内注射に基づいており、複数の血液およびリンパ組織閉じ込め細胞の再構成を可能にし、続いて参照HIV株による感染を可能にする。このモデルは感染後36週間まで監視することを可能にし、従って慢性モデルと呼ばれる。第2および第3のモデルは、末梢血単核細胞が成体マウスに腹腔内注射される急性および再活性化モデルと呼ばれる。急性モデルでは、健康なドナーからの細胞は腹腔内経路を介して生着し、続いて参照HIV株による感染である。最後に、再活性化モデルでは、抗レトロウイルス療法下でHIV感染ドナーからの細胞が腹腔内経路を介して生着する。この場合、マウスの薬物のない環境は、ウイルスの再活性化とウイルス負荷の増加を可能にする。ここで提供されるプロトコルは、HIV感染のヒト化免疫不全マウスモデルに対する従来の実験的アプローチを記述する。

概要

ヒト化NOD/SCID/インターロイキン(IL)-2受容体γ鎖ヌル(以下、huNS γ鎖ヌル)マウスモデルは、感染症、自己免疫、癌の病因の研究、ならびに薬物およびヒト細胞ベース療法の前臨床試験のために広く使用されている。これらのマウスは、非肥満糖尿病(NOD)バックグラウンドに基づいており、IL-2受容体γ鎖軌跡(IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15、およびIL-21の一般的なγ鎖)における細胞変異および標的突然変異を有し、マウスT、B、およびナチュラルキラー(NK)細胞1の発達において重篤な障害を誘発する。従って、それらは、ヒト組織、ヒトCD34+造血幹細胞(HSC)、およびヒト末梢血単核細胞(PBMC)3、4、5の生着を支持する。加えて、幹細胞因子(SCF)、顆粒球/マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)、およびIL-3などのヒト造血因子のトランスジェニック発現は、ヒト骨髄ロイド集団6、7、8の生着を促進する。

HIV研究では、いくつかのhuNS γ鎖ヌルマウスモデルが記載されているが、マウス株、使用されるヒト細胞の種類、生着細胞の組織の種類、および細胞の起源(すなわち、健康対.HIV感染ドナー)9,10.しかしながら、元の株は、参照HIV株11、12、13を有する感染後のヒト細胞生着およびウイルス複製の高レベルに起因して広く使用されている。ヒト造血因子のトランスジェニック発現を伴う同様の免疫不全マウス株(例えば、 NOG-EXLまたはNSG-SGM3)またはヒト肝臓および胸腺組織のインプラント(骨髄肝胸腺[BLT]マウス)は、抗HIV免疫応答における骨髄集団の役割、これらの組織に対するHIVの影響、およびウイルス貯留部としての関与を評価するのに有用である。さらに、ヒト白血球抗原(HLA)分子のトランスジェニック発現を有するいくつかの株、ならびにBLTマウスは、HIV感染16、17に対するT細胞応答を研究するために使用することができる。

一般に、これらのマウスにおいて、ヒト化は、細胞起源、送達経路(腹腔内、肝内、静脈内、心内)および生着時のマウス年齢18、19、20に依存する。細胞起源に関しては、臍帯血に由来するヒトCD34+HSC、胎児肝臓、又は動員末梢血を新生児又は若いマウス3、21に注射することができる。加えて、成人γ鎖ヌルマウスは、PBMC(ここでは、hu-PBL-NS γ鎖ヌルマウスと呼ばれる)の注射によってヒト化することができ、血液中のこれらの細胞の時間循環を可能にし、二次リンパ球器官、および炎症組織22、23、24。

ここで説明する、HIV感染の研究のためのhuNS γ鎖ヌルマウスモデルの確立のための詳細なプロトコルである。1つ目は、健康なドナー由来の臍帯血に由来するヒトCD34+HSCを新生児マウスに注射し、続いてヒト免疫系再構成後14週間のHIV株を用いた感染を行う慢性モデルである。このモデルは感染後〜36週間のマウスの監視を可能にする。第2モデルは急性モデルであり、健康なドナー由来のPBMCを成人NS γ鎖ヌルマウスに注射し、続いてマウスにおけるヒトT細胞増殖の3週間後に参照HIV株を用いて感染する。最後に、第3モデルは再活性化モデルであり、HIV感染ドナー由来のPBMCを抑制抗レトロウイルス療法(ART)下で成人NS γ鎖ヌルマウスに注射する。この場合、薬物のない環境は、ウイルスの再活性化とウイルス負荷の増加を可能にします。2つの後者のモデルは生着後0~9週間のモニタリングを可能にする。

全体的に、これらの3つのモデルは、ウイルス学的研究、新規薬物の前臨床試験、および世界的な免疫応答に対するHIV感染効果の評価に有用である。また、HIVに感染したヒト化マウスの使用には、実験の前に機関バイオセーフティ委員会(IBC)および制度動物ケア利用委員会(IACUC)による審査と承認が必要であることを考慮することも重要です。これにより、危険な生物学的物質の使用および実験動物の人道的取り扱いに関するすべての社内外の制度規制に従うことができる。

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プロトコル

この研究では、メリーランド大学医学部の動物ケア・利用委員会(IACUC)によって審査され、承認されたプロトコルに従って、すべての動物のケアと手順が行われました(プロトコル番号1018017、1018018、および0318009)。

1. ヒトCD34+新生児マウスのHSC生着

  1. 滅菌スクラブ、手袋、専用シューズ、靴カバー、マスク、ゴーグル、ヘア/ビアードボンネット、無菌ラボコートなど、使い捨て可能な個人用保護具(PPE)を常に使用してください。
  2. 冷凍CD34+HSCの1 x 106を、認定バイオセーフティキャビネットの下でRPMI 1640メディア10%FBSの10 mLで再サスペンドし、滅菌状態を維持します。
  3. 懸濁液の10°Lを使用してカウントし(予想される細胞数の存在を保証するために)、血球計におけるトリパンブルー除外染色によって細胞の生存率を確認する。
  4. 室温(RT)で15分間400 x gで遠心分離機。上清を廃棄し、冷たい1x PBSで必要な濃度(50μLでCD34+HSCの1.4 x 105)に再サスペンドします。注射するまで細胞を氷の上に置く。
  5. 子犬(生後1~4日の性別のNS γ鎖ヌル子犬)を、ブリーダーケージから少量の寝具と一緒に無菌の100mm2ペトリ皿に入れます。さらに、手の間にきれいな寝具をこすり、受容者の子犬の異物の臭いをさらにマスクします。
    注:これは、子犬に含浸される外国の臭いを最小限に抑え、それによって母親が手順の後にケージに戻って子犬を受け入れる可能性を向上させます。
  6. ペトリ皿を清潔な輸送ケージに入れ、清潔なマウスマイクロアイソレータケージにケージを入れて、子犬を環境から保護します。搬送ケージをカバーパッドで覆い、照射室への輸送中に動物が外部光にさらされるのを防ぐ。
  7. 137Cs源への暴露により、100cGy全身照射(WBI)を有する子犬を照射する。消毒液で照射器の内部を清掃し、マウスを照射器に入れ、ターンテーブルをオンにして、すべての子犬が均一に照射されるようにします。照射器を閉じ、電源スイッチを押して照射プロセスを開始します。照射時間が完了するまで待ち、すぐにマウスを取り外します。
    注:照射はマウスにストレスを発生しないため、以前の麻酔は必要ありません。
  8. 照射手順の後2~4時間、氷上の滅菌ガーゼで覆われた冷蔵滅菌ペトリ皿の中に、麻酔(〜5~10分)になるまで、バイオセーフティキャビネットに子犬を置きます。グロス運動が止まると十分な麻酔が行われます。
  9. 注射器に取り付けられた針(29 G,0.5インチ)を、50°Lのセルサスペンションと1.4 x 105のCD34+HSCを認定バイオセーフティキャビネットの下に積み込みます。
  10. 肝注射による生着のために、親指と人差し指で子犬を拘束する。マウスの拘束を最小限に抑えるには(〜30〜45秒)、1人の研究者に子犬を保持して注射を投与させ、2番目の研究者にHSC懸濁液で注射器をロードさせる。70%アルコールで注射部位をきれいにし、肝臓に直接50°Lの細胞を送り込みます。肝臓を完全に突き刺さないように注射するときは、浅い針の角度を使用してください。対照として、1x PBSの50°Lのマウスを肝臓に注入する。
  11. 子犬を、滅菌ガーゼで覆われた予め温めた滅菌ペトリ皿の上に1~5分間置き、回収を可能にします。子犬が過度に温められないように、20°Cでげっ歯類用の赤外線ウォーミングパッドを使用して料理を事前に温めます。
  12. 子犬を両親に返す直前に、親指と人差し指を使って少量のメントールとユーカリベースの軟膏を両親のスネトに塗布し、共食いや子犬の拒絶反応を避ける。
  13. 乾燥肌、授乳、発疹、脱毛症などの子犬の移植片対宿主病(GVHD)の兆候を毎日チェックしてください。これらの徴候のいずれかが観察された場合、動物を安楽死させる。
  14. 3週齢のウィーンマウスを性別でグループ化する。ケージあたり5匹以上の動物を入れないでください。14週齢のフローサイトメトリーにより末梢血中の生着を確認する。
    注:生着の成功率は80%~100%です。

2. 若年マウスのヒトPBMC生着

  1. 急性および再活性化モデルの場合、6~8週齢のNS γ鎖ヌルマウスを、ARTの下にあった健康なドナーまたはHIV感染患者由来のヒトPBMCを腹腔内に注射する。両方のモデルにおいて、HIV感染(シャム)を有さずに健康なドナーからPBMCを注射したマウスをコントロールとして含む。
  2. 50mL円錐管に滅菌密度勾配培地の5mL中の全血の層15mL。
  3. RTで30分間400xgで遠心分離は、ブレーキなしで、バフィーコートが密度勾配媒体と混合するのを避ける。
  4. 単核細胞の割合(密度勾配培地と上清の間)を慎重に収集し、1x PBSの10 mLを含む15 mL遠心管にバフィーコートを移します。RTで10分間300 x gで遠心分離機。
  5. 上清を捨て、ペレット化細胞に5mLのACK緩衝液を加え、残りの赤血球を除去する。RTで4分間インキュベートします。
  6. RTで10分間300 x gで遠心分離剤を廃棄し、1x PBSまたはRPMI 1640培地の10 mLで再サスペンドします。
  7. 細胞懸濁液の10°Lを使用して細胞を数え、血球計におけるトリパンブルー除外染色による生存率を確認します。典型的には、1~2 x 106個の細胞が血液の1mLごとに得られ、生存率は95%を超える。
  8. RTで10分間300 x gで遠心分離剤を使用し、上清を廃棄し、必要な濃度(この場合は1x PBSの200°Lで3.5 x 106セル)にセル番号を調整します。
  9. シリンジを付属の針(28 G,0.5インチ)に3.5 x 106のPBMCを、認定されたバイオセーフティキャビネットの下に1x PBSの200°Lでロードします。
  10. ケージからマウスを取り外し、メッシュをつかむように尾で持ち、穏やかなトラクションを後方に適用します。次に、人差し指と親指を動物の肩に当て、首のゆるい皮膚をつかみ、中指を使って背中を安定させます。
  11. マウスの頭を後ろにスライドして、背面が頭の上になるようにします。これにより、腹腔内の内臓を後方に変位させ、注射中に内臓を穿刺するリスクを低減する。
  12. 70%アルコールで注射部位をきれいにします。
  13. 細胞を注入する前に、ステップ2.9で使用した注射器を貫通し、細胞を注入する前に吸引し、何らかの材料が吸引された場合は、注射器を取り外して廃棄する。それ以外の場合は、腹腔内に細胞をゆっくりと注入し、注射器を取り除いて廃棄する。マウスを制御するために1x PBSを注入する。
  14. 動物をケージに戻します。
  15. 3週間後のフローサイトメトリーにより末梢血の生着を確認する。

3. 後生き生きケア

  1. 耳のタグ付けによってマウスを識別します。
  2. これらの実験で使用されたマウスは、苦痛の臨床徴候の各手順の後、1日あたり2倍近くを観察する。
  3. ヒト細胞移植後、GVHDのマウスをモニタリングする。新生児、少年、成人マウスのGVHD症状をモニタリングするために、体重測定に加えて、皮膚疾患(色、乾燥、発疹、脱毛症)の出現について動物を評価します。早期安楽死を考慮するために獣医によってこれらの兆候を示す動物を評価します。

4. HIV感染手順とシャム感染手順

注:慢性および急性モデルの場合、マウスはそれぞれ第14週および第3週後生移植時にHIV BaL参照株に感染する。HIVとの注射は、下腹部象限に腹腔内に投与される。

  1. ABSL2手順に従ってBSL2キャビネットで、28 G 0.5インチ針を使用して、ウイルス/PBSの注射器へのロードプロセスを実行します。注入されるウイルスの総量は、200μLの滅菌RPMI 1640における15,000個の中央組織培養感染用量(TCID50)である。
  2. ケージからマウスを取り外し、メッシュをつかむように尾で持ち、穏やかなトラクションを後方に適用します。次に、人差し指と親指を動物の肩に当て、首のゆるい皮膚をつかみ、中指を使って背中を安定させます。
  3. マウスの頭を後ろにスライドして、背中が頭の上になるようにします。これにより、腹腔内の内臓を後方に変位させ、注射中に内臓を穿刺するリスクを低減します。
  4. 腹部の左下/右象限に、あらかじめ濡れたアルコールパッドでマウスを清掃します。滅菌RPMI 1640の200μLに含まれるHIV BaLウイルスの15,000 TCID50を注入する。
  5. 注射後、マウスをホームケージに戻します。

5. 後眼穿刺による採血

注:後眼出血は血液の速い収集を可能にし、それによって全体的な収集時間を減らし、ヒトリンパ球マーカーの安定性を高める。マウスの血液を収集するためにEDTAチューブを使用してください。

  1. 慢性モデルでは、14週後のHSC注射で、後眼窩静脈を介して血液を採取する。急性および再活性化モデルでは、PBMC注射後3週間でこの手順を実行する。
  2. 外部にダクトされたバイオセーフティフードクラスB2で採血前に250μLのイソフルラン吸入を用いて動物を麻酔する。
  3. 建物の外に通ったバイオセーフティキャビネット内の透明な1 L瓶に金網の下にイソフルランを綿パッドに分配します。メッシュの使用は、動物がソフルラン浸漬パッドに接触しないことを保証し、イソフルランも皮膚を通して吸収されるため、皮膚刺激や過剰の可能性を引き起こす可能性があります。また、手足の怪我を避けるために、メッシュと動物の間に柔らかいペーパータオルを置きます。
  4. 瓶がイソフルランで飽和したら(それを追加した後約1分間)、動物を導入し、呼吸数を観察し、その後減少します。右反射の欠如(瓶を穏やかに傾ける時)とグロス運動の欠如を含む麻酔の深い面の臨床徴候をチェックしてください。動物が完全にリラックスし、つま先ピンチ反射を欠いているとすぐに出血手順を開始します。
    注:アイソフルランが蒸発するので、麻酔の徴候が見られなかった場合、より多くの薬物を分配する。
  5. 後方眼出血の場合は、マウスの外頸静脈を親指で下顎に押し、同じ手で人差し指で上まぶたをそっと伸長します。
  6. ヘマトクリットチューブを眼の内側カンサスに挿入し、血液がフラックスを始めるまでベントロラテラル方向に向ける。
  7. 少なくとも100μLの血液を採取する。所望の血液量が得られたら(動物の体重の1%以下の体積)、外部頸部圧力を中止し、ヘマトクリット管を除去する。
  8. 止血が完了することを保証し、滅菌ガーゼを使用して眼に直接圧力をかけることで、30s以上を確保します。
  9. 目にテトラカイン滴を適用します。麻酔から完全に回復するまで動物を監視し、ケージに戻します。
    注:採取された血液の100μLは、ヒトCD45+および他の血球集団の生着レベルの評価、ならびに血漿ウイルス負荷の評価のために使用される。

6. 生着レベルとフローサイトメトリー分析のスクリーニング

  1. フルオロクロム標識抗ヒト抗体のインキュベーションを含む全血の従来のフローサイトメトリー染色プロトコルに従ってください(推奨フローパネルについては、材料表を参照)、続いて赤血球のリシスと洗浄手順13、15。
    注:生着のレベルのスクリーニングのために、抗ヒトCD45抗体が含まれる。比較のために、抗マウスCD45抗体も使用され得る。同じ抗体ミックスで染色されたヒト血液サンプル、染色されていないマウスおよびヒト血液サンプル、および試薬の交差反応性をテストするための非ヒト化コントロールを含む。染色後、常にいくつかのバックグラウンド信号があります。ただし、すべての正のシグナルは、負のシグナルと交差反応性のコントロールと明確に区別されます。
  2. 適切なフローサイトメーターで、リンパ球ゲート(FSC-A対SSC-A)上で少なくとも10,000イベントを取得します。フローサイトメトリー分析のために、重複除外後に、ヒトCD45+細胞のパーセンテージならびに関心のある他の細胞集団を決定する。

7. 血漿ウイルス負荷の評価

  1. 感染後1週間に1倍のHIV感染動物のウイルス負荷を評価する。
  2. 後眼出血(約100μL)の後、抗凝固血液の遠心分離後に上清を3,500xgで採取し、微遠心分離機で3分間採取して血漿を得る。ペレットは、血液細胞のフェノタイピングに使用されます。
  3. 市販のウイルスRNA抽出キット(材料表参照)を使用して、40°LのプラズマからRNAを取得します。
  4. 最初の株合成ミックス(材料表参照)およびHIVギャグプライマーSK431を使用して、RNAをcDNAに変換します。
  5. HIVギャグプライマーSK38/SK39および蛍光緑色色素(例えば、SYBR緑色)を用いて定量的リアルタイムPCRを実行する前の研究13、25に記載されている。

8. 抗レトロウイルス療法の投与

  1. 感染後少なくとも3週間後に経口ARTを投与し、高いウイルス負荷が観察された場合、慢性、急性、および再活性化モデルで投与する。
  2. ヒトおよびマウスのKm値37および3に従って、テノホビルジソプロキシルフマル酸(TDF)、エムトリシタビン(FTC)、およびラルテグラビル(RAL)の用量を計算する。典型的には、TDF、FTC、およびRALのヒト同等の用量は、それぞれ61.7 mg/kg/日、40.7 mg/kg/日、および164 mg/kg/日である。
  3. 飲料水中の投与のために、薬物錠剤を粉砕し、水ボトルにそれぞれの量を追加し、ケージ内の各マウスがその毎日の用量を取得することを保証します。薬物粉末はボトル内に堆積物を形成する可能性があるため、定期的に水ボトルを振って均質な懸濁液を達成する。
  4. 溶けたばかりの薬で毎週水筒を交換してください。
  5. ALの開始後、またはALの開始後に毎週または2週間ごとに後眼静脈を介して血液を採取し、ウイルス負荷およびCD4:CD8比の変化を評価する。

9. マウス安楽死、二次リンパ器官の採取、単核細胞の単離

  1. 安楽死は、3つのヒト化マウスモデル、感染時間に沿って定期的に、または実験の終わりに行われる。
  2. CO2窒息により成体マウスの安楽死を行い、続いて子宮頸部脱臼を行う。窒息の場合は、非プリチャージチャンバーを使用し、固定圧力レギュレータ付きの市販シリンダーからCO2を分配し、2013 AVMAガイドラインに準拠するためにチャンバー容積/分の20%〜30%以内にガスの流れを制御するラインリミレータで。
  3. >60 s の CO2フローを維持し、呼吸停止を監視し (最大 5 分間かかる場合があります)、次に子宮頸部脱臼を維持して安楽死を保証します。
  4. 安楽死させる <7 日の新生児は、物理的な方法 (すなわち、鋭いはさみを使用) によって生じる。
  5. 腋窩、中膜リンパ節、腸間膜リンパ節(通常は観察される)を可視化し、ピンセットと鋭いはさみで抽出します。また、腹膜腔の左上に位置する脾臓を抽出する。
  6. 無菌RPMI 1640培地を含む1.5mL遠心管にリンパ組織を堆積させる。
  7. 直ちに70mm毛穴サイズのナイロン細胞ストレーナーでリンパ組織を処理し、50 mLチューブで細胞を採取する。組織を吸引しないでください。
  8. 1%FBSを補充した5mLのRPMI 1640培地で細胞を洗浄し、細胞フィルタリングを容易にします。
  9. 組織分解後、マイクロ遠心分離機で10分間3,500xgで細胞懸濁液を遠心分離する。
  10. 上清を捨て、1x PBSの500 μLで細胞を再サスペンドします。
  11. 細胞懸濁液を500μLの滅菌密度勾配培地を含む1.5mL遠心管に移す。
  12. マイクロ遠心分離機で3,500 x gで遠心分離機を、ブレーキなしで、バフィーコートが密度勾配媒体と混合するのを防ぐため
  13. 単核細胞の割合(密度勾配培地と上清の間)を慎重に収集し、1x PBSの500 μLを含む1.5 mL遠心管にバフィーコートを移します。3分間3,000 x gで遠心分離機。
  14. 残りの赤血球を500°LのACK緩衝液でリザリングし、RTで4分間インキュベートして取り出します。
  15. 3分間3,000 x gで遠心分離剤を廃棄し、1x PBSまたは中程度の1mLで再サスペンドします。

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結果

上述したように、14週後のHSC注射(慢性モデル)または3週間後のPBMC注射(急性および再活性化モデル)において、マウスはフローサイトメトリーによって生着したヒト細胞のレベルをスクリーニングするために血を流す。1)ヒトCD45+細胞再構成および2)CD4+およびCD8+T細胞の割合の評価のための代表的なゲーティング戦略を図1Aに示す。典型的には、生着のレベル(ヒトCD45+細胞のパーセンテージ)は、CD34+HSC注入後の10%〜80%の範囲であり、注射およびマウス株の経路に依存する(図1B)。PBMC注射後、生着量のレベル(ヒトCD45+またはCD3+細胞のパーセンテージ)は5%〜65%の範囲であり、マウス株間の差異も含まれる(図1B)。

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ディスカッション

ヒト化のための免疫不全マウス株の開発において重要な進歩が達成されており、研究目的1に応じて使用できる多くの異なる選択肢がある。ここで提供されるNS γ鎖ヌルマウスおよび遺伝的に類似した株のヒト化のための一般的なプロトコルは、HIV感染を研究するための3つの異なるモデルで採用される。第1の実験アプローチでは、照射された新生児マウスは、臍帯血、胎児肝臓、または動員末梢血3、21に由来し得るヒトCD34+HSCを注入する。NS γ鎖ヌルマウスの適切な照射は、マウス骨髄および他の前駆細胞を排除し、ヒト細胞集団の効率的な再構成を可能にするので、重要なステップである。しかしながら、いくつかの報告は、照射27なしで、異なるマウス株におけるヒト細胞の再構成を証拠としている。この点に関しては、NS γ鎖ヌルマウスは放射線感受性であり、高γ照射は胸腺リンパ虫<...

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開示事項

著者たちは何も開示する必要はない。

謝辞

この研究は、JCZに対するIHV臨床部門の内部資金によって支援されました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
0. 5 ml 微量遠心チューブネプチューン3735.S.X
1. 5 ml 微量遠心チューブネプチューン3745.S.X
10 ml 血清ピペットステラ sceintificVL-4090-0010
15 ml コニカルチューブステラ scientificT15-600
25 ml 血清ピペットstellar sceintificVL-4090-0025
5 ml 血清学ピペットステラ sceintificVL-4090-0005
50 ml 円錐管ステラ科学T50-600
ACK 溶解バッファー品質生物学的118-156-101
アルコール準備パッドフィッシャー科学06-669-62滅菌
抗ヒト CD3 クローン UCHT1バイオレジェンド300439APC抱合
反ヒトCD4クローンOKT4Biolegend317420AF488抱合型
抗ヒトCD45クローン 2D1Biolegend368522BV421
VC1Biolegend344710PerCP-Cy5.5抱合型
Biosafatyキャビネットレベル2可能であれば、イソフルラン
を取り扱う際にexausteチメニーに接続ボンネットフィッシャー科学17-100-900基本的な保護のための使い捨てキャップ
CavicideMetrex13-1000消毒剤
CD34+細胞ロンザ2C-101単一のドナーから入手可能な多くのバイアル
遠心分離ベックマン65-6KR
クリアジャーアマゾン77977
綿ガーゼパッドフィッシャーサイエンティフィ22-415-468
使い捨てラボコートフィッシャーサイエンティフィック19-472-422
EDTAマイクロチューブグライナーバイオワン450480
フェイスマスクフィッシャーサイエンティフィック17-100-897
FACS溶解液BD340202
FBSプレミアムHIアトランタバイオロジカルS1115OH
FicollGE health one17-1440-02
フローサイトメーターFACS Aria II
フローサイトメトリーチューブを使用しましたFalcon3520545 ml ポリスチレンと丸底
HIV BaLuQUANT コア施設で調製
ヒト PBMCHIV 陽性および陰性 ボランティア
赤外線保温パッドVenet scientificDCT-25小動物用仮治療用温暖パッド
Isentress (Raltegravir)MerckNSC 0006-0227061ヒト免疫不全ウイルス(HIV)を治療するための抗レトロウイルス薬-インテグラーゼ阻害剤
イソフルランヘンリー・シャインNDC 11695-6776-2
Mark I 照射器大学所属機器メリーランド州
マイクロピペット
微量遠心分離機Eppendorf
Mouse イヤータグNational Band &タグ会社1005-1L1
Natelson 採血チューブフィッシャーサイエンティフィック02-668-10
NOG-EXLタコニックHSCFTL-13395-F
NSG マウスジャクソン5557CD34 生着のための妊娠女性と PBMC 生着のための若年
NSG-SGM3ジャクソン13062
パラホルムアルデヒド 16%電子顕微鏡科学15710
PBS 1X pH 7.4Gibco100-10-023
シャーレ フィッシャー科学08-757-28
Quantistudio qPCRマシンThermoQS3
試薬リザーバーCostar4870
RPMI media 1640 1XGibco11875-093
シューカバーフィッシャーサイエンティフィック17-100-911
滅菌使い捨て手袋MicroflexSUF-524
SuperScript II First-Strand Synthesis SuperMixInvitrogen10080-400cDNA synthesis
シリンジ 28-G x 1/2BD329-461
シリンジ 29-G x 1/2BD324-702
Truvada (Emtricitabine およびテノホビルギリアドNDC 61958-0701-1ヒト免疫不全ウイルス(HIV)-ニクレオシドアナログ転写酵素阻害剤を治療するための抗レトロウイルス薬
パンブルーシグマT8154細胞数と生存率
Vick Vaporubの健康43214メントールとユーカリに基づく軟膏
分子生物学グレード生物学的351-029-131
型表面機ック滅菌性 トリ学校水高品質の

参考文献

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