方法論記事

マウス切除創傷治癒モデルと組織形態学的創傷解析

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DOI：

10.3791/61616

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2020年8月21日

 , 
1Department of Anatomy and Cell Biology, University of Iowa

この記事について

サマリー

このプロトコルは、マウスで両側の完全な厚さの切除傷を生成する方法と、その後、形態測定分析のために創傷を監視、収穫、および準備する方法を記述する。これには、シリアル組織学的セクションを使用して形態異常を定義、正確に定量化、検出する方法の詳細な説明が含まれています。

要約

マウスの外皮創傷モデルは、創傷治癒の順次重なり合う相(炎症、増殖および改造)のそれぞれを研究するために広く使用されてきた。マウスの創傷は、治癒プロセスのこれらの異なる段階が測定可能である組織学的に明確かつ容易に認識可能な創傷床を有する。フィールド内では、組織学的分析のために任意に定義された創傷の「中間」を使用することが一般的です。しかし、創傷は三次元の実体であり、しばしば組織学的に対称的ではなく、小さな効果サイズで形態異常を検出するための明確かつ堅牢な定量方法の必要性を支持する。本プロトコルでは、マウスにおける二国間の全厚切除創傷を作成するための手順と、選択したシリアルセクションの画像処理プログラムを用いて形態測定パラメータを測定する方法についての詳細な指示を説明する。創傷長さ、表皮長さ、表皮領域、および創傷領域の2次元測定は、創傷、全体的な創傷領域、表皮容積および創傷容積を覆う3次元表皮領域を外挿するために、断面間の既知の距離と組み合わせて使用される。この詳細な組織学的分析は、従来の分析よりも時間とリソースの消費が多いが、その厳格さは、本質的に複雑な創傷治癒プロセスで新しい型を検出する可能性を高める。

概要

皮創傷治癒は、連続的に重なる相を有する複雑な生物学的プロセスである。損傷した上皮のバリア機能を回復させるためには、時間的および空間的に調節される細胞および分子プロセスの調整が必要です。第1段階では、炎症、好中球およびマクロファージが創傷に移行し、局所防御および全身防御を動員する。炎症期に続いて重なり合うのが増殖段階である。線維芽細胞は急速に増殖し、造粒組織に移行し始める。先導端から離れた角化細胞は、前縁の分化された角化細胞が創傷2を再上皮化するために移行するとして、創傷に向かって方向に増殖する。最後に、造粒組織の線維芽細胞がコラーゲンを合成して沈着し始める間に、再造形および成熟相が始まる。新しいマトリックスの改造と組織は、怪我の後に1年まで続くことができます 3.複数の細胞タイプ間のクロストークを伴う重複する事象の複雑さにより、長年の研究にもかかわらず、創傷治癒の根底にある細胞および分子メカニズムの多くは十分に理解されていない。

マウスモデルは、使用の容易さ、比較的低コスト、遺伝的操作性1、4、5による創傷治癒のメカニズムを調査するための主要な哺乳類モデルである。マウスモデルには異なるタイプの創傷が記載されているが、最も一般的なのは切除創傷(両側性パンチまたは直接パンチ生検のいずれか)であり、続いて切開創傷モデル4が続く。切除創傷モデルは、癒しのプロセスを経ていない制御組織を本質的に生成するため、切開モデルに対して明確な利点があります。外科プロトコルの一部として切除されるパンチ生検組織は、傷ついた組織と同様に処理し、所望の基準のための恒食状態を確立するために使用することができる。切除された対照組織は、皮膚前処理の効果を評価する場合や、傷害時に遺伝子改変が成功したことを確認する場合にも有用である。

治癒パラメータは、平面測定やヒストロジーを含む多くの異なる技術によって評価することができる。しかし、プラニメトリーは創傷の目に見える特性しか評価できないし、また、かさぶたの存在のために、しばしば、占いが可視化される治癒の測定値と相関しない、それによって、構造学を分析4の「ゴールドスタンダード」にする。組織学的分析はゴールドスタンダードであるにもかかわらず、最も頻繁に創傷の任意のサブセット6,7で行われる。例えば、創傷を埋め込み、切断する前に「半分」に創傷を切断することは、材料の切断およびデータ分析に費やされる時間とリソースを削減するために現在一般的な習慣である。このプロトコルに記載された形態測定解析の方法は、創傷組織全体を包含し、創傷の形態学的特徴を正確に反映し、小さな効果サイズで創傷治癒欠陥を検出する可能性を高めるために開発された。このプロトコルでは、最も一般的に研究されているマウス創傷、両側の完全な厚さの切除傷を生成するための外科的方法、ならびにそのような組織学的分析のための詳細かつ厳格な方法が現場ではほとんど使用されない。

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プロトコル

すべての実験は連邦規制に従って完了し、アイオワ大学の方針と手順はアイオワ大学IACUCによって承認されています。

1. 動物と畜産

  1. 毛包ステージが四葉語にある8〜10週齢で所望のマウスラインの成体マウスを使用する。
  2. 手術当日は、マウスを清潔なケージに分離し、創傷の破壊を最小限に抑えるために個別に収容します。

2. 手術

注:無菌の手術状態を維持する必要はありません。動物間の無菌性を維持するために注意する必要がありますが、パンチ生検自体は清潔ですが、無菌表面で行われます。動物1匹あたりの手術期間は10〜15分です。

  1. 麻酔
    1. イオフルラン気化器を4~5%の流量に設定し、酸素流量計を毎分1リットルに設定して、誘導室で1〜2分間動物を麻酔します。代替麻酔オプションについては 、「議論」 を参照してください。
    2. 手順を開始する前に、適切な麻酔を確認してください。麻酔の深さは、しっかりとしたつま先ピンチによって確認することができます。
    3. 誘導容器から鼻コーンにマウスを移し、イオブルランの流量を1.5%に、酸素流量計を0.5 L/分に下げます。
    4. 処置が5分を超えるので両眼に眼科軟膏を適用する。
    5. サーマルパッドを使用して、常温を維持します。
  2. 創傷部位の準備
    1. 肩のレベルでマウスの背面の毛皮を取り除くために尾のrostralの動きで電気カミソリのクリッパーを使用してください。2つ以上の傷を行う場合は、必要に応じて背中の下の髪を削除します。
    2. 残りの髪を取り除くために、マウスの後ろから20°で保持されたロストラルの尾骨運動でカミソリの刃を使用して、クリップされた領域を密接に剃ります(図1A)。
    3. ポビドネヨウ素綿棒で剃った領域をきれいにします。
    4. ヨウ素綿棒からの潜在的な皮膚刺激を減らすために無菌70%イソプロピルアルコール準備パッドで皮膚を拭きます。
  3. 負傷
    1. 背背の中線に沿って肩甲骨の間の皮膚をつまみ、サンドイッチされたスキンフォールドを体から引き離す(図1B)。
    2. 清潔なペーパーベースのタオルまたは同等物でドレープされた平らな表面にスキンフォールドを置いて、マウスを横に置きます。タオルの下に歯科用ワックスを使用して、下地の表面を損傷から保護します(図1C)。
    3. 所望の大きさの生検パンチをできるだけ体の近くに置き、皮膚をリラックスさせます。皮膚を伸ばさないか、または創傷のサイズが指定されたパンチサイズより大きくなる(図1D)。
    4. 下押しで皮膚をパンチし、両側の皮膚のすべての層が貫通していることを確認するために揺れる動きを使用してもよい(図1E)。各動物のための新しい生検パンチを使用してください。
    5. 傷口からパンチ生検を取り除く(図1F)。まだ取り付けのサイトがある場合は、周囲の皮膚からパンチを解放するために滅菌はさみやピンセットを使用してください。創傷治癒解析の下流計画に基づいて、必要に応じてパンチ生検制御組織を処理する(提案については 、議論 を参照)。
    6. 最初の創傷領域を測定し、外れ値を解析から排除するために、同じ距離から創傷部位またはフレーム内の定規で巨視的な写真を撮ります。
    7. 承認された動物のプロトコルに従って、最低24時間の鎮痛を投与する。例えば:ブプレノルフィンSR-LABは、痛みの軽減の48時間のために0.5-2 mg /kgで皮下に単回投与として注射される(代替提案および考慮事項のための 議論 を参照)。
    8. 直立姿勢を維持し、ケージの周りを正常に歩いているまで、麻酔から出てくるようにマウスを監視します。

3. ポスト創傷モニタリング

  1. 研究者によって決定された実験エンドポイント、および機関プロトコルに従って準拠している実験エンドポイントについて、マウスを毎日監視します。例としては、感染、目に見える体重減少、またはハンチ姿勢が含まれます。
  2. 最初の手術後に行われたように、制御された方法で毎日の巨視写真を撮ります。

4. 創傷の収穫

  1. 承認された動物プロトコルに従って、目的の時点でマウスを創傷後に安楽死させる。
  2. 以前の写真取得と一致する制御された方法で創傷部位の巨視的な写真を撮る(図2A,C)。
  3. メスを使用して創傷部位の周りに広い長方形をカットします(図2D,E)。
  4. はさみとピンセットを使用して長方形の組織を解放し、下の組織から皮膚を切り離します(図2F)。ペトリ皿に入れる(図2G)。
  5. 傷を収穫する。傷口の全側面を囲む傷のない組織を2mmまで長方形の形で切り下げる(図2H,I)。傷を収穫するための代替オプションについては 、「ディスカッション 」を参照してください。
  6. その後の研究のために必要に応じて創傷を処理します。パラフィン埋め込みおよび組織学的分析のために、マウス1匹につき少なくとも1つの傷を予約する。

5. 創傷の固定および埋め込み

  1. 傷を固定する
    1. 創傷組織を室温で3時間に対して調製した4%パラホルムアルデヒド溶液8 に固定し、一晩で4°Cに移す。電子顕微鏡(EM)グレードのパラホルムアルデヒドおよび溶液ろ過は必要ありません。
    2. 1x PBSで30分間傷口を2回洗います。
    3. 70%ETOHでPBSを交換し、埋め込みになるまで4°Cで保管してください。組織組織を24~48時間以内に処理して、抗原の損失を回避するか、組織学的特徴を評価するだけであれば1〜2週間以内に組織を処理します。
  2. 創傷を処理し、埋め込む
    1. 各創傷を埋め込みカセットに移します。プロセスとして鉛筆にカセットを埋め込むラベルは、インクを削除します。
    2. エタノールの割合を増やして組織を脱水し、キシレンでクリアし、次にパラフィンワックスで組織に浸透させることによって、組織を手動でまたは自動化されたプロセッサを使用して組織を処理する(表1)。
    3. 埋め込み型の水平面から創傷を90°(「立っている」)埋め込む(図3A,B)。

6. 0日目の創傷面積解析

  1. NIHイメージJまたはNIHフィジーのフリーソフトウェア(https://imagej.net/Fiji/Downloads)をダウンロードしてください。
  2. 0日目の傷の写真を含むファイルを開きます。
  3. [分析] の下の [領域] のチェック ボックスをオンに |測定を設定する。
  4. [分析] の下の[ スケールの設定] を選択します。距離をピクセル単位で入力し、距離の既知の距離と距離の単位(長さの単位)を入力します (距離の単位) 相対測定値のみがスタディの一部である場合、このステップをスキップします。
  5. フィジーのツールバーの [フリーハンドの選択] を選択します。
  6. 傷の周囲を輪郭を描きます。
  7. [分析] の下の [測定]をクリックします。
  8. 傷1つにつき動物ごとの測定値を追跡するためのスプレッドシートを作成します。
  9. スプレッドシート内の傷領域の寸法をコピーします。
  10. 特定の実験の全創傷の平均面積と標準偏差を計算します。
  11. 組織学的分析から平均の2つの標準偏差の外の傷を除外する。

7. シリアル切り分け

  1. パラフィン埋め込み創傷ブロックを一晩4°Cで冷やします。
  2. ミクロトームのブロックホルダーにパラフィンブロックを挿入し、ブレードがブロックを横切ってまっすぐ切るように配向します。組織が90°で「立っている」ようなブロックの向きをして、表皮と真皮の同時断面化を可能にする(図3C,D)。
  3. 2~4個のパラフィンセクションをそれぞれ7μmで作ります。
  4. 乾燥したペイントブラシと解剖用のからかい針を使用して、各リボンをしっかりとした黒いプラスチックシートなどの堅固で操作可能な表面に移します。
  5. 各リボンの上部をカミソリの刃で外し、顕微鏡スライドに置きます。
  6. 明視野顕微鏡下で染色されていない部分を観察して、毛包の不在、結合組織または表皮の外観の変化、および/またはかさぶたの存在によって特定することができる傷ついた組織が含まれている部分を決定する(図4A,B)。
  7. 傷の開始前に20のセクションまで傷ついていないセクションを捨てます。
  8. 汚れのない部分で傷が検出されないまで、ステップ7.3と7.4を繰り返すことによって創傷を通して切り離す。

8. パラフィンセクションの取り付け

  1. 最初のリボン(図3E)から始めて、5つのセクションごとにパラフィンセクションをカミソリブレードで分けます。
  2. ラベル顕微鏡は、スライド番号とすべてのセクション番号の両方でスライドします。
  3. ぬれたペンキのブラシで5つのセクションのグループをつかみ、それらを平らにするために暖かい水浴(40-45 °C)の水の表面にそれらを浮かべる。
  4. ラベル付き顕微鏡スライド(図3F)のいずれかを使用して、ウォーターバスから5つのセクションのグループを選び、最大24時間37°Cに設定されたスライドウォーマーの上に置きます。
  5. スライドをスライド ボックスに直立して保存します。

9. 組織学的染色

  1. 8番目 の顕微鏡スライド(40番目 のパラフィンセクションに相当)を、ヘマトキシリンとエオシンで染色ラックと汚れに移します。

10. 顕微鏡イメージング

  1. 4倍の目的とデジタル取得機能を備えた明るい視野顕微鏡を使用して画像を取得します。画像が撮影されるスケールを記録します。
  2. 各染色スライドの上部セクションの傷全体を画像化し、両側にいくつかの傷のない組織を含むようにしてください。傷が 1 つの画像の枠よりも大きい場合は、重なり合う複数の画像を撮影します。
  3. モルフォメトリクス解析の断面番号を含むファイルを保存します。同じ傷の重なり合う写真には、セクション番号の後にa、b、cなどを使用します。

11. モルフォメトリック解析

メモ: 傷が複数の画像にまたがっている場合は、個々の写真から取得した測定値を合計して、スプレッドシートに記録する傷部分ごとにメートル単位ごとに 1 つの値 を取得します。

  1. イメージ J で、汚れた傷の画像のデジタル ファイルを開きます。ステッチされた画像を解析に使用しないでください。ズームイン重なり合う画像の測定を行うには、画像から画像までの測定値を取得するランドマークを見つせます。
  2. スケールと測定の設定を行います。
    1. [分析] の下の[ スケールの設定] を選択します。距離をピクセル単位で、既知の対応する距離と距離の単位 (長さの単位) を入力します。スケールはウィンドウに表示され、画像が取得された縮尺に対応している必要があります。
    2. 開いているイメージごとにスケールを同じに保つには、[グローバル] チェック ボックスをオンにします。
    3. イメージ J を閉じて再び開くたびに、手順 11.2.1 ~ 11.2.2 を繰り返します。
    4. [分析] の下の [領域] のチェック ボックスをオンに |測定を設定する。
  3. 創傷の長さを測定する
    1. フィジーのツールバーの [フリーハンドの選択] を選択します。
    2. 創傷の片側の傷のない組織の最後の毛包から、傷の反対側の傷害されていない組織の最初の毛包まで測定する(図4A,B)。
    3. これらの2つのランドマークに到達するために、ダーモ表皮接合部に沿ってトレースします。表皮が創傷全体を覆わない場合は、創傷の片側の皮膚表皮接合部に従い、移動する舌の端が顆粒組織の優れた側面または顆粒組織とかさぶたの間の接合に従い続け、最後に他方の側の傷害されていない組織の最初の毛包に達する(図4E,F)。
    4. [ 分析] の [ メジャー] をクリックします。計測の長さは、スケールで設定した単位と同じ単位で表示されます。
    5. 測定値を追跡するためのスプレッドシートを作成します (補足表 1)。
    6. 巻きの長さをスプレッドシートにコピーします。
  4. 表皮の長さを測定する
    1. 表皮が創傷全体を覆う場合、表皮の長さは創傷の長さと同じである。
      1. 「創傷長さ」の測定値をExcelスプレッドシートの「表皮長」列にコピーし、ステップ11.5にスキップします。
    2. 表皮が創傷全体を覆わない場合は、「フリーハンド選択」を選択し、造粒組織の優れた側面に従って、または肉芽組織と最初の毛包とかさぶたの間の接合部に従って、表皮のリーディングエッジ間の距離を測定する(図4C,D)。
      1. [ 分析] の [ メジャー] をクリックします。
      2. この測定値を傷の長さから引き、Excel スプレッドシートの「表皮の長さ」の下の数値を記録します。
  5. 創傷領域を測定する
    1. フィジーのツールバーの [フリーハンドの選択] を選択します。
    2. 創傷の片側の傷のない組織の最後の毛包から、傷の反対側の傷害されていない組織の最初の毛包まで測定する(図4A、B、E、F)。
    3. 表皮の優れた側面に沿って痕跡(かさぶたを含まない)または創傷が表皮によって完全に覆われなければ顆粒組織の優れた態様。
    4. 反対側の毛包に達すると、脂肪組織または筋肉に達するまで、毛包に沿って顆粒組織に垂直にトレースを続けます。顆粒組織の下縁を傷の反対側に沿って、毛包に沿って開始点を結合して領域を閉じる(図4E,F)。
    5. [ 分析] の [ メジャー] をクリックします。
    6. 「傷領域を測定」の下のスプレッドシートに、巻き領域をコピーします。
  6. 表皮領域を測定する
    1. フィジーのツールバーの [フリーハンドの選択] を選択します。
    2. 創傷が完全に上皮化されている場合:
      1. 反対側の毛包が到達するまで表皮の上面に沿ってトレースし、表皮と真皮の間の真皮表皮接合部に続く出発点に「戻る」ことで領域を完成させる(図4D)。
      2. [ 分析] の [ メジャー] をクリックします。
      3. 表皮領域を Excel スプレッドシートの 「測定された表皮領域」にコピーし、ステップ 11.7 にスキップします。
    3. 創傷が完全に上皮化されていない場合:
      1. 表皮の上面に沿って、リーディングエッジまでトレースし、ダーモ表皮接合部に続く開始点に戻ります(図4C)。
      2. [ 分析] の [ メジャー] をクリックします。
      3. 手順 11.6.3.1 と 11.6.3.2 を、傷の反対側で繰り返します。
      4. [分析] の [測定] をクリックします。
      5. ステップ 11.6.3.2 および 11.6.3.4 で得られた 2 つの数値を合計し、スプレッドシートの「表皮領域測定」の下に結果を入力します。
  7. 40 番目のセクション(8番目のスライドごと) ごとに、手順 11.3 ~ 11.6 を繰り返します。
  8. 創傷全体の表皮領域を計算します。
    1. 表皮の長さの横に、スプレッドシートの「表皮領域計算」に新しい列を作成します。
    2. 最後のセクションを除く各セクション(7 μm厚いセクションx 40セクション)の「表皮長」の数に280を掛けます。
    3. 最後のセクション (セクションの厚さ) に対して「表皮の長さ」の数に 7 を掛けます。
    4. 各セクションの「計算された表皮領域」の値を合計し、創傷全体の表皮領域を求める。
  9. 創傷全体の傷領域を計算します。
    1. 創傷長さの測定を使用して、ステップ11.8.1から11.8.4を繰り返します。
  10. 創傷全体の表皮容積を計算します。
    1. 「表皮領域測定」の測定を使用して、ステップ11.8.1から11.8.4を繰り返します。
  11. 創傷全体の巻き容積を計算します。
    1. 「傷領域測定」を使用して、ステップ11.8.1~11.8.4を繰り返します。
  12. 創傷の表皮体積の割合を計算します。
    1. 表皮容積全体を総創傷体積で割り、100を掛けてパーセンテージを求めます(各セクションに対してこの比率を行わない)。
  13. 創傷領域の表皮面積の割合を計算します。
    1. 表皮の総面積を全創傷面積で割り、100 を掛けてパーセンテージを求めます。創傷が完全に上皮化されている場合、この数は100である必要があります。

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結果

図5は、複数の外科医によって異なるマウス株で発生した野生型創傷に対して形態測定解析を行い、異なる個体によって分析した結果、得られた測定値と計算値の範囲を示している。異なる株由来の野生型マウスは、我々の研究と文献9,10の両方に記載されているように統計的な違いを示すことができる。これらの代表的な結果に基づいて、1つの研究内で、1つの株からのマウスのみを使用することをお勧めします。同じ個人が特定の研究内のすべての創傷を行うことをお勧めしますが、0日目の創傷の領域が個人の仕事間で統計的に異ならない限り、複数の個人が外科医として機能することができます。最後に、このプロトコルで説明されている形態測定解析は広範囲に及ぶ可能性があるため、複数の個体が同じ実験の一部を分析することができますが、2つのサンプルの分析結果が互いに5%以内にある場合に限ります。しかし、偏りを避けるために、単一の個体が目が見えない方法で創傷を分析することが好ましい。

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ディスカッション

両側切除創傷モデルは、創傷治癒の多くの異なる側面を研究するために使用することができる高度にカスタマイズ可能な手順である。創傷治癒プロジェクトを開始する前に、研究者は、特定の効果サイズの欠陥を検出するために必要な創傷の数を決定するために、パワー分析を実行する必要があります。個々のマウスまたは創傷を生物学的複製として使用すべきかどうかについての文献内に矛盾が存在するが、最近の研究では、単一の動物4に対する2つの創傷の間に有意な相関関係がないことを示した。これは、単一の動物からの創傷が互いに独立しており、生物学的複製とみなすことができることを示唆しており、欠陥を検出するために必要なマウスの数を減らすことができる。これは、有意性4に達するために多数の創傷が必要な小さな効果サイズを考慮する場合に関連する。さらに、パワー計算の結果は、各動物に対して行われる創傷の数に影響を与え、動物1匹につき2、4の創傷が最も一般的である。

外科プロトコル自体も非常に柔軟です。短い手順の長さと迅速な回復(マウスあたり...

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開示事項

著者らは、競合する財政的利益はないと宣言している。

謝辞

私たちは、長年にわたってこのプロトコルの最適化に貢献してきたダンヴァルト研究所のすべてのメンバーと、創傷分析のための連続断面の使用を促進する粘り強さが、その作成を可能にしたジーナ・シャッテマンに感謝しています。この研究は、NIH/NIAMSからマーティン・ダンヴァルト(AR067739)への資金提供によって支えられた。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
100%エタノール
70%エタノール
80%エタノール
95%エタノール
アルコールプレップNOVAPLUSV910070%イソプロピルアルコール、滅菌
水酸化
生検パッドCellpath22-222-012
黒いプラスチックシートしっかりしていて、紙のシートほどの大きさの操作可能なもの
明視野顕微鏡デジタル取得機能と4倍の対物レンズ付き
綿チップアプリケーター
カバースリップ22 x 60 #1
歯科用ワックスシート
デジタルカメラスケール用の定規を含め、該当する場合
解剖からかい針(ストレート)
埋め込み型22 x 22 x 12
埋め込みリングSimport Scientific Inc.M460
オシンY
氷河酢酸
バリカン
加熱パッドコンエアーモイストドライ加熱パッド
ヘマトキシリン
ミクロトーム
ブレード
ペイントブラシ
パラフィン タイプ 6
パラホルムアルデヒド
パーマウント
リン酸緩衝液 (PBS)
ポビドンヨードアプリケア82-255
プロセッシングカセットSimport Scientific Inc.M490-2
カミソリ刃ASR.009レギュラーデューティメス
刃 #10
メスの柄
鋭利な手術用ハサミ手術用無菌
皮膚生検パンチ研究者が決定したサイズ
スライドボックス
スライドウォーマー
スーパーフロスト顕微鏡スライドフィッシャーサイエンティフィック22 037 246
温度制御ウォーターバス
ティッシュ埋め込みステーションパラフィンディスペンサーとコールドプレートの最小
ティッシュプロセッサー真空ポンプ付きオーブンの最小
トリプル抗生物質眼軟膏
セット、手術用無菌
手術用無菌細り先端
WypAll X60Kimberly-Clark34865
アンモニウムエ値 値 ピン湾先端、先

参考文献

  1. Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation. Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).
  2. Park, S., et al. Tissue-scale coordination of cellular behaviour promotes epidermal wound repair in live mice. Nature Cell Biology. 19 (2), 155-163 (2017).
  3. Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. Wound repair and regeneration. Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).
  4. Ansell, D. M., Campbell, L., Thomason, H. A., Brass, A., Hardman, M. J. A statistical analysis of murine incisional and excisional acute wound models. Wound Repair Regeneration. 22 (2), 281-287 (2014).
  5. Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. A Modeling Conundrum: Murine Models for Cutaneous Wound Healing. Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).
  6. Crowe, M. J., Doetschman, T., Greenhalgh, D. G. Delayed wound healing in immunodeficient TGF-beta 1 knockout mice. Journal of Investigative Dermatology. 115 (1), 3-11 (2000).
  7. Pietramaggiori, G., et al. Improved cutaneous healing in diabetic mice exposed to healthy peripheral circulation. Journal of Investigative Dermatology. 129 (9), 2265-2274 (2009).
  8. Cold Spring Harbor. Paraformaldehyde in PBS. Cold Spring Harbor Protocols. 1 (1), (2006).
  9. Gerharz, M., et al. Morphometric analysis of murine skin wound healing: standardization of experimental procedures and impact of an advanced multitissue array technique. Wound Repair Regeneration. 15 (1), 105-112 (2007).
  10. Colwell, A. S., Krummel, T. M., Kong, W., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. Skin wounds in the MRL/MPJ mouse heal with scar. Wound Repair Regeneration. 14 (1), 81-90 (2006).
  11. Le, M., et al. Transforming growth factor beta 3 is required for proper excisional wound repair in vivo. PLoS One. 7 (10), 48040(2012).
  12. Sato, T., Yamamoto, M., Shimosato, T., Klinman, D. M. Accelerated wound healing mediated by activation of Toll-like receptor 9. Wound Repair Regeneration. 18 (6), 586-593 (2010).
  13. Martin, P., Leibovich, S. J. Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly. Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).
  14. Shaw, T. J., Martin, P. Wound repair: a showcase for cell plasticity and migration. Current Opinion in Cell Biology. 42, 29-37 (2016).
  15. Hoffman, M., Monroe, D. M. Low intensity laser therapy speeds wound healing in hemophilia by enhancing platelet procoagulant activity. Wound Repair Regeneration. 20 (5), 770-777 (2012).
  16. Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 3 (5), 349-363 (2002).
  17. Uchiyama, A., et al. SOX2 Epidermal Overexpression Promotes Cutaneous Wound Healing via Activation of EGFR/MEK/ERK Signaling Mediated by EGFR Ligands. Journal of Investigative Dermatology. 139 (8), 1809-1820 (2019).
  18. Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).
  19. Rhea, L., et al. Interferon regulatory factor 6 is required for proper wound healing in vivo. Developmental Dynamics. 249 (4), 509-522 (2020).

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