慢性心理社会的ストレス(CGS)パラダイムは、母親と乳児の精神疾患をモデル化するために、マウスで妊娠中に臨床的に関連するストレータを採用しています。ここでは、このモデルを検証するためにCGSパラダイムとダウンストリーム評価を適用するステップバイステップの手順を提供します。
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この記事について
サマリー
要約
分娩期は、母親の暴露が神経精神疾患の発症を含む母親と子孫の両方に長期的な悪影響を及ぼす可能性のある敏感な期間と考えられている。母子ダイアドにおける情動性調節不整合の出現に関連する危険因子が広範囲に研究されている。妊娠中の心理社会的ストレスへの暴露は、一貫して最も強い予測変数の一つとして浮上している。この関連付けを探索するために、いくつかのげっ歯類モデルが作成されました。しかし、これらのモデルは、女性が経験するストレッサーの種類、強度、頻度を正確に捉えていない、繰り返しの方法で提示される物理的ストレッサーまたは限られた数の心理社会的ストレッサーの使用に依存しています。これらの限界を克服するために、予測不可能な方法で提示された異なる強度の様々な心理社会的侮辱を採用する慢性心理社会的ストレス(CGS)パラダイムが生成されました。この原稿は、妊娠6.5日目から17.5日目までの妊娠中の雌マウスが日中および一晩で様々なストレッサーにさらされるこの新しいCGSパラダイムを記述しています。日のストレッサーは、2時間の休憩で区切られた1日あたり2つ、異物や捕食者の臭いへの暴露から寝具の頻繁な変化、寝具の除去、およびケージの傾きまで多岐にわたります。夜間ストリッサーには、連続光暴露、ケージメイトの変化、または濡れた寝具が含まれます。我々は以前、CGSへの暴露は、ストレス反応性の増加、断片化した母親のケアパターンの出現、アンヘドニア、および不安関連行動、周産期気分および不安障害に苦しむ女性のコア機能を含む母親の神経内分泌および行動異常の発症を引き起こすことを示した。したがって、このCGSモデルは、母体の情動調節不整合の根底にある分子欠陥を解明するユニークなツールとなり、胎児の神経発達に影響を与え、子孫に長期的な行動に悪影響をもたらす胎盤間メカニズムを解明することができます。
概要
分娩期の母親の悪影響を受けた母親および乳児の神経精神疾患に対する感受性の増加の根底にあるメカニズムはほとんど知られていない。実質的な母親の生理学的変化は、妊娠中および産後期への移行中に起こり、健康な子孫の神経発達のためだけでなく、母親の精神的健康を維持するためにも重要であると仮定されるいくつかの神経内分泌適応を含む1、2。母体視床下部下垂体副腎(HPA)軸のレベルでは、日周HPA軸活性のより平坦なリズムおよび急性ストレッサー3、4、5に対するHPA軸応答を減衰させることを含む、グルココルチコイド放出の概日およびストレス誘発レベルの両方での適応が観察される。HPA軸活性の増強は、循環性グルココルチコイドのレベルの増加を含む、産後の摂動性調節不変性の女性のサブセットで報告され、負のフィードバックを阻害した6、7、8を考えると、産後ストレス反応性の増加をもたらし、母親のHPA軸適応を防ぐストレッサーへの暴露は、神経精神障害に対する感受性を高めると考えら....
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プロトコル
記載されているすべての動物実験は、シンシナティ小児医療センターの動物ケアと使用委員会によって承認され、国立衛生研究所のガイドラインに従っていました。標準的なげっ歯類のチョウと水への アドリビタム アクセスは、CGSパラダイム中を含むマウスに常に提供された。マウスは、特に指定されていない限り、14時間/10時間の明暗サイクル(06:00時間のライト)で収容された(すなわち、夜間の光への暴露)。
1. 時取り合いの準備
- タイミング付き交配を設定する少なくとも2週間前に、成人雌マウスを標準的なマウスケージ(18.4cm x 29.2 cm x 12.7 cm)に一緒に収容し、ケージあたり4匹のマウスを収容する。各メスのマウスに、イヤータグを使用して特定のID番号を付けます。
注:C57BL6雌マウスは妊娠前おらず、3〜6ヶ月の間にこのプロトコルに使用されました。 - タイミング付き交配を設定する少なくとも1週間前に、交配に使用する成人雄マウスを個別に収容する。
2. 時間指定の交配を設定する
- 時間指定の交配を 18:00 時間に設定します。2匹の雌マウスを取り、個別に収容された雄のマウスを保持するケージの中に置きます。翌朝の08:00までに時間の交配を分けます。
3. 妊娠....
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結果
妊娠した雌マウスをCGSに曝露すると、妊娠期の体重増加の減少(図2A)および産後初期における副腎体重の増加を含む慢性ストレス関連パラメータの変化をもたらす(図2B)19。重要なことに、CGSへの暴露は、母親の神経内分泌機能における産後異常をもたらす。CGSダムは、新規急性侮辱の適用に続く血清コルチコステロンレベルの上昇によって証明されるように多動性HPA軸を示す(図3)19。
妊娠中の雌マウスをCGSにさらすと、さらに、うつ病のような表現型の出現を反映しているように見える産後初期の行動異常が生じる。CGSダムは、子犬が受け取る母親の信号の断片化の程度の増加によって反映されるように、母親のケアの変化を表示します。舐め/グルーミングの平均持続時間が短縮され、CGSに続く平均発作数の増加に関連しており、育成行動の多数.......
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ディスカッション
妊娠中のマウスを新しいストレッサーに対するHPA軸応答を含む産後の母親の神経内分泌機能をCGS摂動に曝露し、周産期気分および不安障害に関連する様々な行動異常に関連している。このモデルが環境危険因子の利用を採用していることを考えると、遺伝モデル22で他の方法で観察されるよりも高い形素変異が予想される。しかし、結果を混乱させる可能性のある変数を最小限に抑えるために注意を払えば、CGSパラダイムの適用から得られた結果は、研究機関全体で一貫して得ることができます。
このプロトコルの重要なステップには、CGSマウスとは別の住宅制御マウスを含む一般的な畜産慣行に関連するステップと、タイミング交配ステップが含まれる。共同ハウジング制御およびCGSマウスは、それ自体が対照群にとってストレスの多い刺激であり、したがって神経内分泌または行動結果23,24を混乱させる。同様に、サプライヤーから出荷された妊娠中のマウスで実験を始めないことをお.......
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開示事項
著者らは開示する利益相反はない。
謝辞
著者らは、国立一般医学研究所T32 GM063483-14助成金とシンシナティ小児研究財団からの支援を認めたい。2019年、ズーボフスキーらから適応したデータについては、クリエイティブ・コモン・ライセンスは、http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 動物ランセット | Braintree Scientific Inc. | GR4MM | |
| 鈍い端の調査 | の細部の科学用用具 | 10088-15 | |
| のBraintreeの科学的なInc. | プラグのびん | WTRBTL S-BL | 100 mLガラス製ウォーターボトル、ストッパーとシッパーボールポイントチューブ付き、1 mLずつグラデーション。 |
| コニカルチューブ(50mL) | コーニング株式会社 | 352098 | 急性ストレスに対するHPA軸応答を測定するためにマウスを拘束するために使用されます。円錐形のチューブの端に換気用の小さな開口部があることを確認してください。 |
| レゴス | アマゾン | - | |
| マーブルアマゾン | - | ||
| マウスコルチコステロンELISAキット | バイオベンダー | RTC002R | |
| マウスEZM | TSEシステム | ズ- | |
| 相互実験用シェーカー | ラブネットインターナショナル | S2030-RC-B | |
| 血清セパレーターチューブベ | クトンディキンソン | 365967 | |
| 静的ケージ底 | 部 Alternative Design Manufacturing and Supply Inc. | RC71D-PC | |
| 静的ケージ - フィルター付きベンチレーテッドトップ | Alternative Design Manufacturing and Supply Inc. | FT71H-パソコン |
参考文献
- Hillerer, K. M., Reber, S. O., Neumann, I. D., Slaterry, D. A. Exposure to chronic pregnancy stress reverses peripartum-associated adaptations: implications for postpartum anxiety and mood disorders. Endocrinology. 152 (10), 3930-3940 (2011).
- Hillerer, K. M., Neumann, I. D., Slaterry, D. A.
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