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方法論記事

膣洗浄を利用したげっ歯類の強烈なサイクルモニタリング:通常のサイクルのようなものはありません

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DOI:

10.3791/62884

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2021年8月30日

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この記事について

サマリー

この研究は、雌ラットを含む実験計画において考慮すべき重要な要因を詳述している。より大きな意味では、これらのデータはスティグマを軽減し、より包括的な診断および介入ツールの開発を支援するのに役立ちます。

要約

現在の方法論は、雌のスプレイグ・ドーリー(SD)思春期ラットの発情周期を監視するための再現性があり、標準化され、費用対効果の高いアプローチを確立している。この研究は、ホルモンサイクルの複雑さと、信頼性が高く有効なモニタリング技術を構築するために必要な幅広い理解を示しています。主要な実験計画と手続き的要素の詳細な検討を通じて、サイクルとその基本原則のこの記述は、さらなる理解のための枠組みを提供し、将来の複製のための誤解を解体する。

この手順では、膣洗浄を用いたサンプル採取プロセスの概要とともに、発情前期、発情期、小胞体、およびジストラスの4段階モデルへのデータ分類のメカニズムについて説明します。これらの段階は、膣液の状態、存在する細胞型、細胞配置、および収集時の細胞量の4つの分類決定因子を利用する、新しい提案されたアプローチによって特徴付けられる。各段階のバリエーション、好ましいサンプルと好ましくないサンプル、周期性と非循環性の区別、および収集された分類コンポーネントのグラフィック描写は、データの効果的な解釈的および組織的実践とともに提示されます。全体として、これらのツールは定量化可能なデータ範囲を初めて公開することを可能にし、レプリケーション時の分類係数の標準化につながります。

概要

斬新な貢献
げっ歯類の発情周期は、健康の重要な指標として同定されています。しかし、研究者の無意識の偏見や女性の体に関する不正確な解釈は、科学界を妨げています。「発情」という言葉の語源そのものが、劣等感と否定性を意味します。エウリピデスはこの用語を「狂乱」または狂気、ホメロスはパニック、プラトンは不合理な衝動を表すために使用しました。この研究は、これらの原始的な視点が現在の科学界にどのように影響するかを強調し、新しいモザイクパラダイム(以前に研究された方法の更新された組み合わせ、より包括的なアプローチの範囲を拡大した)を通じてこれらの懸念に対処します。

標準化された包括的なモニタリング手法はなく、データ解釈の実践が不明瞭な可能性があるため、この手法の研究と使用はまず必要です。第二に、発情周期特性は研究されている個々のラットに依存するが、それらはしばしば普遍化される。第三に、ホルモンサイクルは日常的で有益なプロセスですが、「人間への翻訳」セクションで探求されている危険なスティグマに囲まれています。本研究は、(A)発情周期モニタリング手法を詳細に記述し、その結果がどのように解釈できるかを明らかにすること、(B)各周期の完全性と個性を維持する方法を概説すること、(C)根拠のない慣行を永続させる誤解に注意を喚起すること、の3つの方法でこれら3つの問題に取り組むことを目的とする。

この研究はま....

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プロトコル

このプロトコルで概説されているすべての取り扱いおよび手順方法は、国立衛生研究所(NIH)の動物の世話と使用のガイドラインと一致しており、ペパーダイン大学の施設動物ケアおよび使用委員会(IACUC)とUCLA学長の動物研究委員会(ARC)によって承認されています。

1. 動物の世話と使用

  1. 雌ラットを、検出力分析による数で、および雄ラットがホイッテン効果またはより一貫したサイクリングを促進するように取得する46。既知のデータベース47における研究の目的に基づいてひずみを決定する。
    注:現在のデータは、共同研究の一環として、ペパーダイン大学とUCLAの両方の研究所にある雄SDラットの存在下での女性の思春期のSD国際遺伝子標準化プログラム(IGS)のデータを反映しています。これらのラットは28日齢で別々の群に到着し、発情周期の進行を10日または20日間モニターして、34日齢(7日間の馴化期間の後)から急性および慢性レベルの差を実証した。
  2. 取り扱い前に、輸送後の生理学的安定化のための検疫および/または順応期間を設け、新しい環境に適応させてください。
    注:3日間の最小期間が引用されており、7日間の期間が推奨されています48,49,50,51,52

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結果

現在のデータは、雄SDラットの存在下での女性の思春期のSD国際遺伝子標準化プログラム(IGS)のデータを反映しています。これらの動物は、共同研究の一環としてペパーダイン大学とUCLAの両方の研究所にありました。図5は、4サイクル段階の複数のバリエーションを示しています。図5A1は、いくつかの細胞型が存在するダイストラスサンプルとして同定された。この例は、上皮細胞の数が多いサンプルが、LEUの優位性など、他の分類成分の適格性を満たす場合に、ダイストラスとして適格であることを示しています。このサンプルはまた、この段階でしばしば見られるLEUsを構成する粘液鎖配置を実証し、これはPRO段階で見られるSNE細胞からなる鎖に類似している。DIE段階の粘液鎖とSNE細胞からなるPRO段階に現れる鎖を区別するには、LEUの優位性を同定することが重要です。図5A2,3は、しばしば観察される細胞配置の進行、すな.......

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ディスカッション

重要な手順と重要な考慮事項
提供されたプロトコルにおける特定の重要なステップは、特に膣細胞の集合内で、強調を必要とする。膣液抽出中、シリンジ挿入の適切な角度と深さを確保することは、満足のいく結果を生み出し、最終的に動物への刺激、傷害、または子宮頸部刺激を防止するための鍵です。子宮頸部の刺激は、白血球のみの膣塗抹標本11の12〜14日目によって示される偽妊娠誘発の1つの源であり得る。顕微鏡評価段階では、収集された膣細胞を表示する視覚面に焦点を当てることが重要です。これは、1 つまたは 2 つのセルを識別し、フォーカスが達成されるまで視覚化を調整することによって完了します。

これに続いて、ステージングのための膣細胞の代表的な画像のキャプチャは、顕微鏡スライドの全体をスキャンすることによって起こる。これにより、キャプチャされた画像は、動物の膣管に収集され、存在するものの正確な描写を反映することが保証されます。分類の前に、細胞型や各細胞型が持つことができるさまざまな形質転換を区別するなど、分類決定要因に.......

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開示事項

著者らは、開示すべき利益相反はありません。

謝辞

この研究は、カリフォルニア大学ロサンゼルス校脳損傷研究センター(BIRC)のNIH資金提供による共同研究を通じて実施されました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
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sr=8-4
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参考文献

  1. Schneider, M. Adolescence as a vulnerable period to alter rodent behavior. Cell and Tissue Research. 354 (1), 99-106 (2013).
  2. Camacho-Arroyo, I., Montor, J. M. Beyond reproductive effects of sex steroids. MiniReviews in Medicinal Chemistry. 12 (11), 10....

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