このプロトコルはESLPの研究との使用のために設計されている同所性左肺の同種移植の幼体のブタモデルを記述する。麻酔薬と外科的技術、および重要なステップとトラブルシューティングに重点が置かれています。
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このプロトコルはESLPの研究との使用のために設計されている同所性左肺の同種移植の幼体のブタモデルを記述する。麻酔薬と外科的技術、および重要なステップとトラブルシューティングに重点が置かれています。
肺移植は末期肺疾患のゴールドスタンダード治療法であり、世界中で年間4,600件以上の肺移植が行われています。しかし、肺移植は利用可能なドナー臓器の不足によって制限されています。そのため、待機リストの死亡率が高い。上皮内肺灌流(ESLP)は、一部のセンターでドナーの肺利用率を15%〜20%増加させました。ESLPは、辺縁ドナー肺を評価および再調整する方法として適用されており、許容できる短期および長期転帰が実証されています 拡張基準ドナー(ECD)肺の移植後。現在進行中のin vitro研究結果を検証するには、大型動物(in vivo)移植モデルが必要です。ヒトとブタの解剖学的および生理学的違いは、技術的および麻酔上の重大な課題を提起します。容易に再現可能な移植モデルにより、現在のESLP戦略のin vivo検証と、ドナーの肺機能を改善するために設計されたさまざまな介入の前臨床評価が可能になります。このプロトコルは同所性同置の左肺のallotransplantationのブタモデルを記述する。これには、麻酔薬と外科的技術、カスタマイズされた外科的チェックリスト、トラブルシューティング、変更、およびアプローチの利点と制限が含まれます。
肺移植は、末期肺疾患の優れた長期治療です。世界中で年間4,600件以上の肺移植が行われています1。しかし、現在のところ、肺移植には大きな限界があります。一つには、臓器の必要性が利用可能なドナーを凌駕し続けていることです。2012年以降、肺移植の割合は、移植候補の増加、ドナー数の増加、回復臓器の利用の改善などの複合効果により、毎年増加しているにもかかわらず、移植待機者の死亡率は有意に減少していません2。臓器の質に関する懸念は、20%〜30%と報告されている臓器利用率3,4,5という低い報告があり、もう一つの大きな限界を表しています。最後に、肺移植の術後転帰の傾向は満足のいくものではなく、長期移植片と患者の転帰は依然として他の固形臓器移植に遅れをとっています2。
新しい技術である上皮内肺灌流(ESLP)は、これらの制限を軽減する可能性を秘めています。ESLPは、限界ドナーの肺を評価および再調整する方法としてますます適用されており、 拡張基準ドナー(ECD)肺の移植後の許容可能な短期および長期転帰 6,7,8,9,10。その結果、ESLPは一部のセンターの使用率を15%〜20%向上させました6,7,8,9,10,11。
適切なESLP研究には、in vitro所見のin vivo検証が必要です。ただし、ESLP12、13、14、15のブタ肺移植モデルに関する文献は限られています。さらに、入手可能な文献では、肺移植のためのヨークシャー豚の麻酔薬管理に関する詳細が不十分であり、血行動態が非常に不安定になる可能性があります12,13,14,15。簡単に再現可能なモデルを確立することで、現在のESLP戦略のin vivo検証と、肺虚血再灌流障害を減らすためのさまざまな介入の前臨床評価が可能になります。本研究の目的は、ESLPで使用するための同所性左肺同種移植のブタモデルを説明することです。プロトコルには、麻酔薬と外科的技術の説明、カスタム外科的チェックリスト、およびトラブルシューティングの経験とプロトコルの変更に関する詳細が含まれています。この研究では、左肺ブタ移植モデルの限界と利点についても議論されています。この原稿は、35〜50kgのヨークシャー豚におけるブタの肺の回収プロセスを概説しておらず、ESLPの確立と終了についても説明していません。このプロトコルは、レシピエント移植手術にのみ対応しています。
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すべての手順は、カナダ動物管理評議会のガイドラインおよび実験動物のケアと使用に関するガイドに準拠して行われました。プロトコルは、アルバータ大学の施設動物管理委員会によって承認されました。このプロトコルは、35〜50 kgの雌の若いヨークシャー豚に適用されています。豚は病原体を含まない食品グレードの標本です。それらは、カナダのアルバータ州エドモントンにある豚研究技術センター(https://srtc.ualberta.ca)から購入されます。ESLP手順に関与するすべての個人は、適切なバイオセーフティトレーニングを受けていました。
1.術前の準備と麻酔
注:豚は手術前に最大12時間一晩絶食します。
2.中心静脈および動脈ラインの挿入
3.左肺の調達
4.ESLPの終了、左肺の分裂、および電解液による洗い流し
5.左肺移植
6.孤立した左肺の評価
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すべての結果は、NPV-ESLP16 の 12 時間後の 4 時間の再灌流のコンテキストにあります。肺外植片では、いくつかの臨床転帰が予想されます(図3)。典型的には、ブタは左肺移植が成功した後も血行動態的に安定しているが、手術に対する血管拡張反応のためにフェニレフリンの低用量注入(用量範囲:2〜10 mg / h)が必要になる場合があります。心拍数は約100〜120 bpm、呼吸数(RR)はSpO 2>8〜30%、平均動脈圧(MAP)>60 mmHg、常温(38°C)、一回換気量(TV)は5 mL / kgを目標とし、ピーク圧力は20〜24 cm H2Oの片肺換気をします。片肺換気では、左肺を過膨張から保護するために換気量を半分に減らしました。呼吸数は、生理学的潮汐終末二酸化炭素レベルを目標とするように増加しました(図3)。したがって、図3は、移植の臨界点...
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このプロトコルにはいくつかの重要な外科的ステップが関与しており、移植と肺の評価を確実に成功させるためにトラブルシューティングが必要です。ブタの幼体の肺は、ヒトの成体の肺に比べて非常にデリケートであるため、手術医はブタの肺を扱う際には注意が必要です。これは、ESLPを12時間実行した後、臓器が体液量を帯び、過度の操作による損傷を受けやすくなるため、特に当てはまります。過度の圧力は、実験肺に無気肺または外傷を引き起こし、評価結果に影響を与えます。同様に、若いブタの維管束構造は非常にデリケートです。PAクランプのねじれは、組織層の裂け目や解剖を引き起こす可能性があるため、避けることが重要です。PAの裂傷は、移植肺に吻合できる左PAのより近位部分にアクセスするために心膜を開く必要があります。DeBakey血管クランプは、手術野によくフィットする薄型ですが、外科医が注意しないと、この器具は繊細なPAに損傷を与える可能性があります。外れやねじれを防ぐために、ドレープにスナップされるシルクタイを使用してクランプを所定の位置に固定すると便利です。気管支吻合をアンクランプした後の移植肺の気管支鏡検査も重要です。ESLPと移植の12時間後にドナーの肺気道内...
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DHFは、 Ex situ 臓器灌流技術および方法に関する特許を保有しています。DHFとJNは、Tevosol, Inc.の創業者であり、大株主です。
この研究は、大学病院財団に代わって資金提供されています。
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| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| ABL 800 FLEX 血液ガス分析装置 | 放射計 | 989-963 | |
| 成人小児用静電フィルター HME - 小型 | Covidien | 352/5877 | |
| アリソン肺リトラクター | ピリング | 341679 | |
| 動脈フィルター | SORIN GROUP | 01706/03 | |
| バックハウス タオル クランプ | ピリング | 454300 | |
| ウシ血清アルブミン | MP生物医学218057791 | ||
| Biomedicusポンプ | Maquet | BPX-80 | |
| 気管支鏡 | |||
| ケーブルタイ–ホワイト 12インチ | HUASU International | HS4830001 | |
| 塩化カルシウム | ッシャーサイエンティフィック | C69-500G | |
| クーリースターナルリトラクター | ピリング | 341162 | |
| クッシンググッチドレッシング鉗子 | ピリング | 466200 | |
| ベイキーメッツェンバウム解剖 | ピリング | 342202 | |
| はさみ | ピリング | 342202 | |
| DeBakey末梢血管クランプ | ピリング | 353535 | |
| Debakeyストレート血管組織鉗子 | リング | 351808 | |
| D-グルコース | Sigma-Aldrich | G5767-500G | |
| ドロップ吸盤 | |||
| 気管内チューブ9.0mm CUFD | マリンクロット | 9590E | |
| フロートランスデューサ | ーBIO-PROBE | TX 40 | |
| 輸液ポンプ | バクスター | AS50 | |
| Inspire 7 M 中空糸膜酸素供給器 | SORIN GROUP K190690 | ||
| インターセプト チューブ コネクタ 3/8インチ x 1/2インチ | メドトロニック | 6013 | |
| インターセプト チューブ 1/4インチ x 1/16インチ x 8インチ | メドトロニック | 3108 | |
| インターセプト チューブ 3/8インチ x 3/32" x 6'Medtronic | 3506 | ||
| 喉頭鏡 | N/A | N/ | A 10 インチ ブレード |
| メッツェンバウム解剖はさみ | ピリング | 460420 | |
| 医療用二酸化炭素タンク | Praxair | 5823115 | |
| 医療用酸素タンク | Praxair | 2014408 | |
| 医療用窒素タンク | Praxair | NI MK | |
| モスキートクランプ | ピリング | 181816 | |
| ハーケンオーリクルクランプ | |||
| 臓器室 | Tevosol | ||
| PlasmaLyte A | Baxter | TB2544 | |
| 吸引チューブ | ピリング | 162212 | |
| リン酸カリウム | フィッシャーサイエンティフィック | P285-500G | |
| PERFADEX Plus | XVIVO | 19811 | |
| サチンスキー クランプ | ピリング | 354002 | |
| スケール | タニタ | KD4063611 | |
| シリコン サポート メンブレン | テボソル | ||
| 重炭酸 | Sigma-Aldrich | 792519-1KG | |
| 塩化ナトリウム 0.9% | バクスター | JB1324 | |
| Sorin XTRAセルセーバー | SORIN GROUP | 75221 | |
| 胸骨鋸 | Stryker | 6207 | |
| 外科用電気焼灼装置 | Kls Martin | ME411 | |
| TruWave 圧力トランスデューサ | Edwards | VSYPX272 | |
| 2 ルーメン中心静脈カテーテル 7fr X2 | Arrowg+ard | CS-12702-E | |
| Vorse チューブクランプ | ピリング | 351377 | |
| Willauer-Deaver Retractor | Pilling | 341720 | |
| Yankauer Suction Tube | Pilling | 162300 | |
| 0 ETHIBOND Green 1X36" Endo Loop 0 | ETHICON | D8573 | |
| 0 PDS II CP-1 2x27" | エチコン | Z467H | |
| 1 VICRYL MO-4 1x18" | ETHICON | J702D | |
| 2-0 SILK ブラック 12インチ x 18インチ ストランド | ETHICON | SA77G | |
| 4-0 PROLENE ブルー TF 1x24インチ | エチコン | 8204H | |
| 6-0 プロレーヌ ブルー BV 2x30" | エチコン | M8776 | |
| 21ゲージニードル |
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