マウスにおける右冠動脈の永久結紮による右心室心筋梗塞の生成と特徴付け

サマリー

右心室と左心室の間にはいくつかの違いがあります。しかしながら、右室梗塞(RVI)の病態生理は解明されていない。本プロトコールでは、RVIマウスモデル生成のための再現可能な方法が導入され、RVIのメカニズムを説明する手段を提供し得る。

要約

右心室梗塞(RVI)は、臨床現場で一般的な症状である。重度のRVIは、致命的な血行力学的機能障害および不整脈につながる可能性がある。左冠状動脈結紮によって生成された広く使用されているマウス心筋梗塞(MI)モデルとは対照的に、RVIマウスモデルは、モデル生成に関連する困難さのためにめったに使用されない。RVI誘導RVリモデリングおよび機能不全のメカニズムおよび治療に関する研究は、患者におけるRVIの病態生理学を模倣する動物モデルを必要とする。この研究は、C57BL/6JマウスにおけるRVIモデル生成のための実行可能な手順を導入する。さらに、このモデルは、MI後24時間での梗塞サイズ評価、心エコー検査による心臓リモデリングおよび機能の評価、RV血行動態評価、およびRVI後4週間における梗塞ゾーンの組織像に基づいて特徴付けられた。さらに、RVにおける冠状動脈配列を観察するために冠状動脈系キャストを行った。RVIのこのマウスモデルは、右心不全のメカニズムに関する研究を容易にし、RVリモデリングの新しい治療標的を模索するであろう。

概要

右心室(RV)は、肺動脈に接続された単純なチューブであると長い間考えられていましたが、長年にわたって不当に無視されてきました¹。しかし、RV機能は血行力学的障害^2,3において重要な役割を果たし、心血管疾患4,5,6,7の独立したリスク予測因子として役立つ可能性があるため、RV機能に対する関心が高まっています。RV病には、RV梗塞(RVI)、肺動脈高血圧症、および弁膜症^{が含まれる8}。肺動脈性高血圧症への大きな関心とは対照的に、RVIは無視されたままである^7,9。

RVIは、通常、下後心筋梗塞¹⁰、¹¹を伴い^、右冠状動脈(RCA)閉塞によって引き起こされる。臨床調査によると、重篤なRV....

プロトコル

すべての手順は、米国国立衛生研究所が発行した実験動物の世話と使用のためのガイド(NIH出版番号85-23、1996年改訂)に従って行われ、南方医科大学(中国広州市)の動物倫理委員会によって承認されました。健康な雄のC57BL/6Jマウス(8~10週齢;体重25~30g)を南方医科大学動物センターから入手した。雌マウスを使用することもできるが、性差の潜在的な影響のために両方の性別を混合することは推奨されない。到着後、マウスを12時間/ 12時間の暗/光サイクル(ケージあたり3〜4匹のマウス)の下で、自由摂取の食物と水で飼育した。

1. 手術の準備

1. 手術前にオートクレーブで手術器具を滅菌する。加熱パッドを37°Cに調整します。
2. 外科的痛みを和らげるために、50mg / kgのペントバルビタール( 材料表を参照)の腹腔内注射によってマウスを麻酔する。麻酔誘導のためにマウスを別々の箱に入れる。つま先離脱反応がないことによって麻酔の深さを確保する。
   注:鎮痛には優れているため、吸入麻酔に1.5%イソフルランを使用することもお勧めします。
3. 切歯を縫合糸で固定し、粘着テープで四肢を固定することによって、マウスをパッド上に仰臥位に置く。反射を確認して麻酔の深さをもう一度確認してください。
4. 脱毛クリームで首から剣状体に髪を取り除きます。交互の....

結果

この研究では、マウスをRVI(n=11)または偽操作(n=11)群に無作為に割り付けた。2匹の正常なマウス心臓における冠状動脈キャストを 図1Aに示す。RCAライゲーションに応答して、ECGのリードIIIにおいてSTセグメント上昇が見られた(図1B)。さらに、2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロリド(TTC)染色は、術後24時間で梗塞領域がRV遊離壁の45%を占めることを示した(図1C、D)。上記のデータは、RVIマウスモデルの正常な生成を示した。

LV短軸における4チャンバー頂点図(図2A)および2チャンバービューおよび対応するMモード心エコー検査(図2B)測定の記録を、RVリモデリングおよび機能を評価するために手術後4週間で実施した。偽群と比較.......

ディスカッション

フランスのSicardたちは、2019年にRVIのマウスモデルを初めて報告し、外科的プロセスを記述し、RVI⁹後のLVとRVの相互作用に焦点を当てた。しかし、今日まで、さらなる研究のためにこのモデルを使用した研究は報告されていない。より詳細な手順は、研究者がRVIのマウスモデルを調査に使用するのに役立ちます。Sicardら⁹による報告とは対照的に、我々は、モデル生成のための段階的な情報と品質管理のための戦略を提供し、RCA、RV血行動態の解剖学的分布、および梗塞領域における心筋細胞の生存をさらに評価した。最近の報告は、梗塞領域の心筋細胞が心筋再生において不可欠な役割を果たすことを実証した²³。RVI患者のRV機能は、再灌流がなくても、3〜12ヶ月以内に自発的に回復する^16,24。これらの知見は、マウスRVIモデルが右心不全または心臓再生の潜在的な治療標的の探索に役立つことを示唆し.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
2,3,5-トリフェニルテトラゾリウム塩化	シグマ	T8877	TTC染色用
動物ミニベンチレーター	Havard	Type 845	人工換気用
動物超音波システム VEVO2100	ビジュアルソニック	VEVO2100	ドップラー流速とASプラー
Batson's #17 解剖学的腐食キット	Polyscience Inc	7349	血管系鋳造用
buprenorphine	Isoreag	1134630-70-8	手術後のマウスの痛みを軽減するために
C57BL/6J マウス + D29A1A2:D27	南医科大学の動物センター	-	マウスの RVI モデルの生成のために
カメラ	Sangnond		写真を撮るため
冷たい光イルミネーター	オリンパス	ILD-2	手術用ライト
電計	ADI 機器	ADAS1000	電図記録用
脱毛クリーム	レキットベンチザー	RQ/B 33 タイプ2	マウスの毛を除去
ヒートパッド-サーモスタット手術システム (ALC-HTP-S1)	SHANGHAI ALCOTT BIOTECH CO	ALC-HTP-S1	ヒーティング
ヘマトキシリン-エオシン染料	Leagene	DH0003	ヘマトキシリン-エオシン染色
ヘパリンナトリウム塩	マックリン	H837056	ヘパリーゼーション用
イソフルラン	RWD ライフサイエンス	R510-22	吸入麻酔
ラボはへらを作りました			喉頭鏡として働く
ラボは気管カニューレ			挿管用
Matrx VIP 3000イソフラン気化器	ミッドマークコーポレーション	VIP 3000
医療用ナイロン縫合糸 (5-0)	Ningbo Medical Needle Co.	5-0	胸部閉鎖用
顕微手術用肘ピンセット	RWDライフサイエンス	F11021-11	手術用
顕微手術用ハサミ	NAPOX	MB-54-1	動脈切開用
ミラーカテーテル	ADインスツルメンツ、上海	1.0F	圧力勾配の測定
MS400D超音波プローブ	ビジュアルソニック	MS400D	ドップラーフローの測定速度とASプラーク
針鉗子	ビジュアルソニック	F31006-12	手術用
ニトログリセリン	北京YIMIN MEDICINE Co		冠状動脈の拡張用
眼科用ハサミ	RWDライフサイエンス	S11022-14	手術用
ペントバルビタール ナトリウム塩	メルク	25MG	麻酔
パワーラボ 多方向生理学的記録システム	ADインスツルメンツ、上海	4/35	圧力記録
精密電子天秤	デンバーインスツルメント	TB-114	体重計
シルク縫合糸 (8-0)	Ningbo Medical Needle Co.	6-0	状動脈結紮小
動物マイクロサージェリー機器	Napox	MA-65	器具
組織鉗子	ビジュアルソニック	F-12007-10	手術
組織ハサミ	ソニック	S13052-12	行動態測定用オープンチェスト
ジェル	広功パイ	250ML	の準備心エコー測定
血管クランプ	ビジュアルソニック	R31005-06	大動脈からの血液遮断用

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