この作業は、評価とレビューを目的としています アルテミアサリナ 致死性バイオアッセイ手順、ブラインシュリンプ致死性アッセイとしても識別されます。このシンプルで安価な方法は、サンプル、すなわち天然物の一般的な毒性(予備毒性評価と見なされる)に関する情報を提供します。
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方法論記事
アルテミアサリナLを用いた致死性バイオアッセイ。
* These authors contributed equally
この記事について
サマリー
要約
天然物は古くから医薬品の製造に使用されてきました。今日では、天然資源から入手し、多くの病気に対して使用される化学療法薬がたくさんあります。残念ながら、これらの化合物のほとんどは、全身毒性と副作用を示すことがよくあります。選択された潜在的に生理活性サンプルの忍容性をよりよく評価するために、ブラインシュリンプ(Artemia salina)は一般的に致死性研究のモデルとして使用されます。 A.サリナ テストは、研究された生理活性化合物が幼虫期(ノープリウス)で微小甲殻類を殺す能力に基づいています。この方法は、細胞毒性試験、ならびに合成、半合成、および天然物の一般的な毒性スクリーニングのための便利な出発点となります。これは、前述の目的に一般的に適した他の多くのアッセイ(in vitro 細胞または酵母株、ゼブラフィッシュ、げっ歯類)と比較して、単純、迅速、および低コストのアッセイと見なすことができます。さらに、特別なトレーニングがなくても簡単に実行できます。全体として、 A.サリナ アッセイは、選択された化合物の予備毒性評価および天然物抽出物のバイオガイド分画のための有用なツールである。
概要
植物、動物、または微生物からの天然物は、その多様な生物学的および薬理学的活性のために、新しい生理活性分子の開発において長年にわたって関心が高まっている分野です1。しかし、関連する副作用、薬剤耐性、または薬剤の不十分な特異性は、特に抗癌剤として使用される場合、無効な治療につながる可能性のある主要な要因を表しています1,2。
過去数十年にわたって、いくつかの植物由来の細胞傷害剤が発見されており、そのうちのいくつかは抗癌剤として使用されている1,2,3。これに関連して、パクリタキセルは、天然起源の最も有名で最も活性な化学療法薬の1つとして報告されています3,4。現在、市場に出回っているすべての医薬品の35%以上が天然物に由来するか、天然物に触発されていると推定されています5。これらの化合物の潜在的な高い毒性は、植物自体のさまざまな種類の汚染物質または代謝成分でさえ毒性作用....
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プロトコル
1.機器の準備
- 市販の孵化装置を入手してください。孵化装置を設置するのに適した場所を選択してください(図2A)。漏斗状の容器を黒いサポート(セットに含まれています)に入れ、漏斗を適切な方向に回してレベルマークとタップを確認します。
- 手作りの移行装置を作るには、0.5 L(直径5.8 cm)のペットボトル2本の上部をカットして、最終的な高さ12 cmにします。各ボトルの底から7cmの片側に直径1.5cmの穴を開け、2つの開口部の間に13cmのゴムチューブ(外側1.3cm、内径0.9cm)を挿入します。ホットグルーで開口部を密閉し(図2B)、15分間乾燥させます。ボトルを平らな面に置き、水で満たして、漏れがないことを確認します。
2.人工塩溶液の調製
- ガラスビーカーに、35g/Lの濃度の人工塩溶液(かん水エビ塩)を調製する。これを行うには、製造元の指示に従って、28 gの塩を800mLの水道水に加えます。すべての塩が完全に溶解するまで攪拌棒で混ぜます。
注意: 利用可能な容器のサイズに応じて、準備した生理食塩水の量を調整します。
3. サン....
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結果
私たちのグループが最近研究したいくつかの天然物の一般的な毒性は、ブラインシュリンプ致死性バイオアッセイを通じて評価されました。4つの抽出物(Pa- P. ambigerus; Pb-P.バルバトゥス;Pc- P.シリンドラセウス;およびPe- P. ecklonii)は、それらの抗酸化活性(未発表の結果)で知られている プレクトランサス 属から、試験された。さらに、 プレクトランサス 属から得られた2つの天然化合物(1および2)、および3つの半合成誘導体(3、4、5; 図3)は、他の著作物3に記載した全て、調査も行った。本明細書では、潜在的な細胞傷害活性の観点からのそれらの予備評価が報告されている。
テストされたすべての抽出物は非常に有望な結果を示し、死亡率は非常に低く、ブランク(塩溶液)および陰性対照(DMSO; 図4
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ディスカッション
過去数年間、科学界は毒性スクリーニングの代替モデルへの関心を高めてきました21。A. salina致死バイオアッセイの他に、他の方法論が通常、サンプル忍容性の評価のために行われ、脊椎動物バイオアッセイ(げっ歯類など)、無脊椎動物(ゼブラフィッシュなど)、酵母株または細胞を使用するin vitro法、およびインシリコ法が含まれます22,23,24,25.これらの方法はすべて、費やされたお金と時間、結果の再現性、および分析するサンプルの種類を考慮して、明確な長所と短所があります。たとえば、インシリコアプローチは、標準化された低コストの方法論を表しており、最小限の機器しか必要としません。それにもかかわらず、そのような研究が単一のターゲットに焦点を合わせている場合、質の悪い.......
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開示事項
著者は、金銭的またはその他の利益相反を宣言しません。
謝辞
アミルカル・ロベルト教授を偲んで。
この作業は、プロジェクトUIDB/04567/2020およびUIDP/04567/2020の下で、CFIOSおよび博士号助成金SFRH/BD/137671/2018(Vera Isca)に起因するFundaçãopara a Ciência e a Tecnologia(FCT、ポルトガル)によって財政的に支援されました。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 24ウェルプレート | Thermo Fisher Scientific, Denmark | 174899 | Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 multidish |
| Aluminium foil | Albal | - | スーパーマーケットで購入可能 |
| Artemio Set | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany | 61066000 | ペットショップで購入可能 |
| 双眼顕微鏡 | Ceti, Belgium | 1700.0000 | Flexum-24AED、220-240 V、50 Hz |
| ボトル | -- | 0.5 L直径:5.8 cm;高さ:12センチメートル | |
| の塩水のシュリンプの嚢胞JBL | GmbHおよびCo. KG、D-67141、Neuhofenドイツ | 3090700 | ペットショップで購入することができます |
| 塩水のシュリンプ塩 | JBL GmbHおよびCo. KG、D-67141、Neuhofenドイツ | 3090600 | ペットショップで購入することができます |
| ジメチルスルホキシド(DMSO) | VWRの化学薬品 | CAS:67-68-5 | 純度99% |
| ディスカータブルチップ | ダイヤモンド | F171500 | 容量範囲:100-1000 µL |
| Eppendorf microtubes | BRAND | 7,80,546 | マイクロチューブ、PP、2 mL、BIO-CERT PCR QUALITY |
| Erlenmeyer flask | VWR chemicals | 4,47,109 | volume: 100 mL |
| Glass beaker | Normax | 3.2111654N | Volume: 1000 mL |
| Gloves | Guantes Luna | GLSP3-GraphPad | |
| Prism | GraphPad Software, San Diego, CA, USA-GraphPad | Prism version 5.00 for Windows, www.graphpad.com, accessed on 5 February 2021; commercial statistical分析ソフトウェア | |
| 自家製 A. salina Grower | - | - | 自家製:ホースで接続された2本のペットボトル |
| ホットグルー | Parkside | PHP500E3 | 230 V, 50 Hz, 25 W |
| Incubator | Heidolph Instruments, Denmark | - | ハイドルフユニマックス1010機器1台とハイドルフインクベーター1006 |
| ライト | ロブラン | SKYC3008FE14 | LED電球 |
| ピペット | VWR薬品 | 613-5265 | 容量範囲:100-1000&マイクロ;L |
| 重クロム酸カリウム(K < sub > 2< / sub>Cr 2< / sub >O < sub >7< / sub>) | VWR化学薬品 | CAS:7778-50-9 | 純度99% |
| のポンプProAir a50 | JBL GmbH and Co. KG、D-67141、Neuhofenドイツ | - | Artemioセット+1キットに含まれています |
| ゴムチューブ | -- | 外径1.3cm、内径0.9cm | |
| 攪拌棒 | VWR化学薬品 | 441-0147 |  6 mm, 250 mm |
| Termometer | VWR chemicals | 620-0821 | 0 - 100 °ハ |
参考文献
- Ntungwe, N. E., et al. Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples. Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).
- Cragg, G. M., Newman, D. J. Natural products: A continuing sour....
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再版と許可
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