アンジェルマン症候群モデルマウスの行動特性

サマリー

この原稿は、アンジェルマン症候群マウスモデルを検証するための再現性の高い行動テストのセットを提示します。

要約

この原稿は、ASの確立されたマウスモデルにおけるアンジェルマン症候群(AS)様表現型を特徴付けるために利用可能な一連の行動試験について説明しています。ロタロッド学習パラダイム、詳細な歩行分析、巣作りテストを使用して、動物の運動障害を検出および特徴付けます。オープンフィールドでの動物の感情と高架プラス迷路テスト、およびテールサスペンションテストでの影響をテストします。ASマウスをオープンフィールドテストでテストする場合、運動機能障害は迷路でのマウスの行動に影響を与え、活動スコアを変化させるため、結果を慎重に解釈する必要があります。

提示された行動テストの再現性と有効性は、異なるノックアウトバリアントを持ついくつかの独立したUba3aマウス系統ですでに検証されており、この一連のテストをAS研究における優れた検証ツールとして確立しています。関連する構成と顔の妥当性を備えたモデルは、疾患の病態生理学を解明し、原因となる治療法の開発を可能にするために、さらなる調査を必要とします。

概要

アンジェルマン症候群(AS)はまれな神経発達疾患です。ASの最も一般的な遺伝的起源は、母体由来の染色体の15q11-q13領域の大きな欠失であり、これは患者のほぼ74%に見られます¹。この領域が欠失すると、E3ユビキチンリガーゼをコードするASの主な原因遺伝子であるUBE3Aが失われます。ニューロンにおけるUBE3A遺伝子の父方対立遺伝子は、刷り込みとして知られるプロセスでサイレンシングされます。その結果、遺伝子の父方の刷り込みは、中枢神経系(CNS)²での母方の発現のみを可能にします。したがって、母体由来の染色体からのUBE3A遺伝子欠失は、AS症状の発症につながる。ヒトでは、ASは生後約6か月で発症し、発達遅滞はすべての発達段階を通じて持続し、影響を受けた個人に重度の衰弱症状をもたらします^3,4。この障害の主な症状には、ぎくしゃくした運動失調歩行、重度の言語障害、知的障害など、細かい運動能力と粗大運動能力の欠如が含まれます。AS患者の約80%も睡眠障害やてんかんに苦しんでいます。今日まで、利用可能な唯一の治療法は、てんかん発作を軽減し、睡眠の質を改善する対症療法薬です¹。したがって、再現可能な行動表現型を有する堅牢な動物モデルの開発と洗練された表現型解析は、疾患の病態生理学的メカニズムを解明し、効果的な薬物療法と治療法を発見するために不可欠です。

中枢神経系に影響を与えるヒトの疾患の複雑さは、モデル生物が同等のゲノム、生理学、および行動を有することを要求します。マウスは、生殖周期が短く、サイズが小さく、DNA修飾が比較的容易であるため、モデル生物として人気があります。1984年、Paul Willnerは、^{モデルの値を決定する}ために使用される3つの基本的な疾患モデル検証基準、つまり、構成、顔、および予測妥当性を提案しました5。簡単に言えば、構築物の妥当性は障害の発症に関与する生物学的メカニズムを反映し、顔の妥当性はその症状を要約し、予測妥当性は治療薬に対するモデル反応を記述します。

上記の原則を遵守するために、最も一般的な遺伝的病因であるUBE3A遺伝子を含む母体の15q11.2-13q遺伝子座の大量欠失を選択し、ASモデルマウスを作成しました。CRISPR/Cas9技術を用いて、C57BL/6N^{バックグラウンドから}マウスにおいて、UBE3A遺伝子全体にまたがる76,225 bpの長さの領域を欠失させ、遺伝子のコード要素と非コード要素の両方を網羅しました6。その後、これらの動物を繁殖させ、UBE3A^+/-ヘテロ接合型マウスを得た。モデルの顔面検証のために、UBE3A^+/-雌と野生型の雄の交配動物を用いてUBE3A+/-子孫(C57BL/6NCrl-UBE3A/Phと命名され、後にUBE3A ^mGenedel/+として割り当てられた株)を獲得し、同腹仔を対照した。コアASの症状を再現するために、彼らの細かい運動能力と肉眼的な運動能力、感情、および影響をテストしました。前回の記事では、AS患者も知的障害に苦しんでいるため、動物の認知機能も評価しました⁶。しかし、UBE3A^mGenedel/+マウスでは、おそらく試験⁷の時点で動物の年齢が若かったため、認知障害は見られませんでした。その後、約18週齢の高齢動物を調べたところ、場所選好パラダイムでの逆転学習中の行動の柔軟性の欠如が明らかになりました。ただし、この分析に使用される機器の複雑さには、別の方法論モジュールが必要であり、ここでは含まれていません。

ここで提示された行動テストは、その高い予測値と十分な構成概念の有効性のおかげで、遺伝子研究における一般的な表現型ツールに属します^8,9,10。これらのテストを使用して、ヒト疾患の中核症状を再現可能な年齢に依存しない方法で再現することにより、ASのマウスモデルを検証しました。動物の感情性は、高架プラス迷路およびオープンフィールドテストで評価されました。これらのテストは両方とも、動物が食物、避難所、または交尾の機会を求めて新しい環境を探索すると同時に、不安原性コンパートメントを回避するアプローチ回避の対立に基づいています¹¹。さらに、オープンフィールドテストは、マウスの自^{発運動をテストする}ために使用されます8。尾懸垂試験は、マウスノックアウトモデル¹²における新しい抗うつ薬またはうつ病様表現型をスクリーニングするために、うつ病研究で広く使用されています。このテストでは、避けられない状況で動物が時間の経過とともに発達する絶望を評価します。運動学習と詳細な歩行特性は、それぞれロタロッドとデジゲイトで決定されました。加速棒での動物の持久力は、そのバランスと運動協調能力を特徴づけますが、マウスのステップパターンの詳細な分析は、多くの神経発生運動障害に関連する神経筋障害の敏感な評価です¹³、^14、15。ネストレットシュレッダーテストは、げっ歯類の衝動的な行動を検出するための標準的な方法論の一部であり、自然なげっ歯類の建物の行動を利用しているため、動物の健康状態を示します^16,17。

実験群の規模は、3Rルールの要求を満たすための妥協とコロニー育種性能の効率的な使用の結果でした。しかし、統計的検出力を得るために、十分な量の繁殖ペアが確立されているため、グループには10人以上の個体がいました。残念ながら、繁殖性能は必ずしも十分な数の動物をもたらすわけではありませんでした。

プロトコル

この研究で使用されたすべての動物と実験は倫理審査を受け、欧州指令2010/63 / EUに従って実施されました。この研究は、チェコ中央動物福祉委員会によって承認されました。マウスを個別換気ケージに収容し、22 ± 2°Cの一定温度に12時間の明暗サイクルで維持した。マウスには、マウス固形飼料および水を 自由摂取で提供した。マウスをケージあたり3〜6匹の群で飼育した。試験前に計量以外の取り扱いは行わなかった。このプロトコルで使用されるすべての材料と機器の詳細については、 材料表 を参照してください。

1. テスト前およびテスト中の一般的な考慮事項

注:わかりやすくするために、個々のテストの説明の前に一般的なコメントが表示されます。これは、住宅室で実施され、実験装置の使用を必要としないネストレットシュレッダー試験を除いて、各試験に適用されます。

1. 輸送や環境の変化に起因するストレスを最小限に抑えるために、試験前に少なくとも14日間研究施設に動物を収容してください。
2. 体重は行動研究における一般的な交絡因子であるため、テスト前に動物の体重を記録します。
3. 動物を収容室から輸送後少なくとも1時間実験室に順応させて、輸送ストレスを最小限に抑えるために、そのような輸送が行われるときはいつでも(すなわち、収容室で行われる雌羊細断を除く以下に説明するすべての試験)。
4. 尾の各動物に無毒の水性マーカーでラベルを付けて、実験中に迅速に識別できるようにします。
5. 各試行後の試験中に動物によって実験装置に沈着したすべての尿および糞便を除去する。
6. 各試験動物の前後にすべての実験装置を75%アルコールで拭きます。洗浄により、試験中に堆積した嗅覚痕跡が除去され、安定した実験条件を維持するのに役立ちます。
7. 動物を自宅のケージから実験装置まで、できるだけ注意して、できれば小さな不透明な容器に入れて輸送し、他の操作が必要でない限り自由に放します。
8. テスト後、各動物を一時的な保持ケージに入れて、ホームケージ内のテストされていない動物に影響を与えないようにします。
9. 連続した日に男性と女性をテストします。テスト中に異なる遺伝子型の順序を交互にして、実験グループ間の予測不可能な環境要因のバランスを取ります。
10. すべての動物がテストされた後、動物を家のケージに戻し、収容室に戻します。
11. 動物を繰り返し試験する場合は、各試験の間に少なくとも1日の間隔を維持してください。

2.行動テスト

1. 高架プラス迷路 (EPM)
   注:C57BL / 6NCrlおよびUBE3A^{mGenedel / +} マウス株の雌雄は、9〜12週齢でこの研究のためにテストされました。試験時の動物の体重は、男性で22〜36 g、女性で18〜28 gの範囲でした。
   1. プラス型の迷路をカメラのすぐ下のテストプラットフォームに置きます。壁のポテンショメーターを使用して、ルクスメーターを使用して中心の光強度を70ルクスに設定し、調整中にセンサーを迷路の中心に配置します。
   2. Viewer ソフトウェア アイコンをダブルクリックしてソフトウェアを開き、[構成] タブの左上にあるアイコンをクリックして EPM テスト用の構成をロードします。[ファイル] メニューから EPM プラグインを読み込みます。コンピューターのキーボードを使用して、動物情報(動物ID、遺伝子型、性別、および実験情報(日付、光強度)を[実験]タブの対応するフィールドに入力します。ゾーンの位置、開いた腕、閉じた腕が正しく構成されているかどうかを確認します。ビジュアルコントロールとコンピューターマウスを使用して、仮想アウトラインゾーンがビデオプレビューの対応するEPMゾーンと一致することを確認します。
   3. EPMは、動物の一般的な不安を評価するために使用されるテストであり、アプローチ回避の競合に基づいています。げっ歯類は当然、より安全な場所(閉じた腕)を支持して、明るい保護されていない領域(両手を広げる)を避ける傾向があります。この完全に自動化されたテストはビデオ追跡システムに基づいているため、ソフトウェアに各ゾーンで費やされた時間と入り口の数を自動的に計算させます。
   4. テスト中は、産業用赤外線に敏感なカメラ を介して 動物をビデオに記録します。ソフトウェアが記録中にリアルタイムで動物の位置を検出できるようにします。これに続いて、ソフトウェアに動物の足跡を自動的に評価させて、迷路での動物の行動を説明するすべてのパラメーターを計算させます。不安誘発性の両手を広げて過ごした時間と両手を広げた訪問の割合を使用して、動物の不安のような行動のレベルを評価します。
      注意: カスタムメイドの迷路は赤外線透過性材料でできており、発光ダイオード(LED)赤外線光源プラットフォームに配置されています。
   5. [取得]タブの左上にある矢印アイコンにマウスカーソルを置きます。手でホームケージから動物を取り出し、EPMの中央にそっと置きます。コンピュータのマウスを左クリックしてプロトコルを起動し、すぐに実験室を出ます。
   6. 5分間の無料の迷路探索の後に記録プロトコルが終了したら、プロトコル終了後に表示されるウィンドウで[ OK ]をクリックして記録されたデータを保存し、ファイルに適切な名前を付けて、[ 保存]をクリックします。 [データ 分析]タブの左側の垂直パネルにあるアイコンをクリックして、オフライン分析のためにテストされた各動物の結果を.csvファイルにエクスポートします。
   7. 動物を手で迷路から取り出し、一時的な保持ケージに入れます。同じ方法ですべての動物のテストを進めます。Elevated Plus迷路プラグインの結果タブにある[結果のコピー]アイコンをクリックして、オフライン分析のためにすべてのテストされた動物の結果をメモ帳ファイルにコピーします。
      注意: ソフトウェアとハ ードウェアは異なる場合があり、関連するマニュアルに従う必要があります。さらに、照明やコンピューターの配置などの実験設定は、動物施設の建設によって異なる場合があります。
2. オープンフィールド(OF)テスト
   注:オープンフィールドテストは、新しい環境での探索行動によって引き起こされる動物の全体的な動きを評価します。さらに、保護されていない明るい場所で一般的な不安を検出するためのスクリーニングツールとして一般的に使用されます。これは、前回のテストでも使用されたビデオ追跡システムを利用する完全に自動化されたテストです。
   1. 4つのOFテストボックスをカメラのすぐ下のテストプラットフォームに置きます。壁のポテンショメーターを使用して、ルクスメーターを使用して各OFテストの中央で光強度を200ルクスに設定し、調整中にセンサーを各ボックスの中央に配置します。
   2. Viewer ソフトウェア アイコンをダブルクリックしてソフトウェアを開き、[構成] タブの左上にあるアイコンをクリックして OF テスト用の構成をロードします。コンピューターのキーボードを使用して、動物情報(動物ID、遺伝子型、性別、および実験情報(日付、光強度))を[実験]タブの対応するフィールドに入力します。ゾーンの位置(中央と周辺)がOFテストボックスと一致するかどうかを確認し、必要に応じて調整します。ビジュアルコントロールとコンピューターマウスを使用して、仮想の輪郭を描かれた中央ゾーンと周辺ゾーンが、ビデオプレビューの対応するOFテストゾーンと一致することを確認します。
   3. テスト中は、産業用赤外線に敏感なカメラ を介して 動物をビデオに記録します。ソフトウェアが記録中に動物の位置をリアルタイムで検出し、動物のトラックを自動的に評価して、OFテストボックス内の動物の行動を説明するすべてのパラメーターを計算できるようにします。歩行距離、平均速度、および休息時間は、新しい環境での動物の活動を評価するために使用されるパラメーターであり、センターエントリの数とセンターでの時間は、動物の不安のような行動を表します。
      注意: カスタムメイドの迷路は赤外線透過性素材でできており、LED赤外線光源プラットフォームに配置されています。
   4. [取得]タブの左上にある矢印アイコンにマウスカーソルを置きます。ホームケージから4匹の動物を手で取り出し、各OFテストボックスの隅にそっと置きます。コンピュータのマウスを左クリックしてプロトコルを起動し、すぐに実験室を出ます。
   5. 10分間の無料の迷路探索の後にプロトコルが終了したら、プロトコル終了後に表示されるウィンドウで [OK ]をクリックしてデータを保存し、ファイルに適切な名前を付けて、[ 保存]をクリックします。 [データ 分析]タブの左側の垂直パネルにあるアイコンをクリックして、オフライン分析のためにテストされた各動物の結果を.csvファイルにエクスポートします。
   6. 動物を手で迷路から取り出し、一時的な保持ケージに入れます。同じ方法ですべての動物のテストを進めます。エクスポートしたデータを分析します。
      注意: ソフトウェアとハ ードウェアは異なる場合があり、関連するマニュアルに従う必要があります。さらに、照明、迷路の数、コンピューターの配置などの実験設定は、動物施設の建設によって異なる場合があります。
3. テールサスペンションテスト(TST)
   注:3匹のマウスを自動尾部懸濁装置と同時に試験する。
   1. 部屋の光強度を100〜120ルクスに維持します。
   2. TSTシステムをUSBケーブルでコンピュータに接続します。USBドングルをコンピュータに挿入し、BIO-TSTソフトウェアアイコンをダブルクリックしてソフトウェアを起動します。[グローバル]の下の[設定]タブで、取得時間を360秒に調整します。[実験] タブで [被験者の新しいリスト] を選択し、開いたタブの指示に従って、新しい実験ファイルとテスト対象の新しいリストを作成します。
   3. [取得] タブで [実行の開始] | [続行] をクリックして実行を開始します。トランスポア医療用テープなどの片面粘着テープを、動物の尾の約3/4にベースから始めて巻き付けて、試験用の動物を準備します。
   4. サスペンションフックをテープに通し、動物をその上に吊り下げます。各動物の視覚化位置の下にある [開始 ]アイコンをクリックして、フックに掛けた直後に各動物のデータ取得を開始し、テスト中に動物を継続的に観察します。
   5. 動物の最初のセットの取得が完了したら、[ 次の実行の開始]をクリックし、フックから動物を取り外し、粘着テープを尾から剥がし、尾に沿ってハサミでテープを慎重に切断し、動物を一時的な保持ケージに入れます。
   6. 75%アルコールと紙ティッシュで装置を洗浄し、上記のように残りの動物に進みます。[分析]タブで、分析のために取得の最後の4分間を選択し、[分析]期間内のすべての有効な実行を選択し、[選択した被験者の分析]をクリックして目的のデータ形式を選択し、[選択したデータのエクスポート]をクリックして、収集したデータをエクスポートしてさらに分析します。
      注:テストは6分間続きます。最初の2分間は動物は激しく奮闘しますが、残りの4分間は絶望反応が蔓延するため、この期間中の不動時間が分析に取られます。ソフトウェアとハ ードウェアは異なる場合があり、関連するマニュアルに従う必要があります。さらに、機器自体は異なる場合があります(テスト位置の数など)。
4. 歩行分析
   1. トレッドミルの電源を入れ、速度インジケーターの横にある+または-記号をクリックして、機器パネルでベルト速度を手動で20 cm / sに設定します。ノブを時計回りに回して、装置のライトをオンにします。ソフトウェアアイコンをダブルクリックしてDigiGait Imagerソフトウェアを起動し、シャッタースピードをアルビノマウスの場合は100、フィールド内の黒/暗いマウスの場合はシャッタースピードを130に設定します。
   2. 最初の動物をホームケージから手で取り出し、トレッドミルベルトにそっと置きます。動物コンパートメントへのドアを閉めます。動物の尻尾がドアとフレームの間に挟まっていないことを確認するために目視検査します。
   3. 記録する前に、マウスがトレッドミルベルトを探索できるようにします。トレッドミルをゆっくりとした歩行速度に~3秒間設定してから停止し、動物を継続的に観察することにより、動物がテストを実行できることを確認します。
   4. 機器パネルの スタート ボタンを押してベルトを始動し、約10秒間記録します。少なくとも10〜15ステップの明確で流暢な移動が観察可能であることを確認してください。機器パネルの 停止 ボタンを押してベルトを停止し、マウスを手で一時保持ケージに戻します。
   5. 流暢な手順で一連の画像の記録をスクリーニングするには、[ 再生 ]をクリックし、 編集 モードのビジュアルコントロールで記録を確認します。開始フレーム番号と終了フレーム番号を関連するフィールドに手動で書き込んで、10〜15の流暢な動きを選択します(最初のフレームの場合はフレーム# から、最後のフレームの場合は To )。動物の情報(動物ID、生年月日、性別、体重、ベルト速度、ベルト角度)を記入し、必要に応じて関連フィールドにコメントします。[ 保存] をクリックして、さらに分析するためにファイルを保存します。
   6. ベルトを水できれいにし、残りの動物を同じように進めます。 カメラ を選択して、次の動物の散歩の記録を続行します。すべての動物の記録が取得されたら、分析に進みます。
      注意: ベルトの設定速度で歩くことができない動物は、テストから除外されます。私たちの経験に基づいて、高齢の動物(50週間以上)は、遺伝子型に応じて2%から50%の頻度で、トレッドミルの上を歩くのがより困難になることがわかりました。動物の排泄物は、トレッドミルの前面または背面にあるトレイに収集されます。トレイは各研究の後に空にされ、温かい石鹸水で洗浄されます。ベルトを湿らせた布で拭きます。
   7. 動物の足跡のビデオ録画の完全自動分析に基づいて歩行分析を実行します。 デジガイト解析 ソフトウェアでデータを調整します。
      注:歩行分析は、運動協調の尺度だけでなく、動的歩行信号の分析に基づく詳細な運動学的記述も提供し、連続したストライドによる足の配置の時間的履歴を表します。次のパラメータがソフトウェアによって自動的に測定されます:スイング時間、スイング中のストライド時間の割合、ブレーキング時間、ブレーキング時のストライド時間の割合、推進時間、推進中のストライドの割合、スタンス持続時間、スタンスでのストライドの割合、ストライド時間、スタンスのブレーキパーセンテージ、スタンスフェーズの推進パーセンテージ、スイング対スタンス比、 歩幅、歩幅、歩幅、足角変動、歩幅変動係数、歩幅変動係数、歩角変動係数、歩幅変動係数、スイング持続時間の変動係数、ピーク立脚時の足面積、ピーク立脚時の足面積変動、 後肢共有スタンス持続時間、共有スタンスの割合、左右後方スタンス持続時間の比率、歩行対称性、制動段階におけるトレッドミルベルトと接触する足面積の最大変化率、推進段階におけるトレッドミルベルトと接触する足面積の最大変化率、タウ推進、足の重なり距離、 足の配置位置、運動失調係数、正中線距離、軸距離、および足の抗力。このソフトウェアでは、ステップトレースノイズをわずかに補正することができますが、これは統計解析の前に完了する必要があります。ソフトウェアとハ ードウェアは異なる場合があり、関連するマニュアルに従う必要があります。
5. ロタロッド
   注:ロタロッドテストは、げっ歯類の運動機能-バランスと運動協調を評価するために使用されます。この試験では、マウスが固定直径(5 cm)の回転棒の上を歩き、動物が止まらなくなるまで一定時間(5分)にわたって回転を加速させる必要があります。
   1. 機器のオン/オフスイッチを押してローター機器の電源を入れ、ロッドソフトウェアアイコンをダブルクリックしてソフトウェアを起動します。[ファイル]タブで新しいファイルを初期化し、適切な名前で保存します。[セットアップ] ウィンドウで、日付、ユーザー名、最終的なコメントなど、実験の詳細を入力します。速度プロファイルを 300 秒、初速度を 4 rpm、ターミナル速度を 40 rpm に設定します。
   2. [動物]フィールドでテストされた動物のスケジュールを準備し、各動物をロッド上のその位置に割り当てます。位置はソフトウェアに明示的に示されていませんが、リスト行に対応しています。たとえば、最初の行はロッドの最初の位置を示し、5 番目の行はロッドの 5 番目の位置を示します。実験グループ間の各ロッド位置のバランスをとることを忘れないでください。
      注:5匹の動物を同時にテストできます。
   3. 閉じるをクリックしてセットアップパネルを閉じ、測定をクリックして測定パネルを開きます。開始/停止をクリックしてロッドの初期回転を4rpmで開始し、最初の5匹の動物を割り当てられた位置に配置します。すべての動物がロッドに乗ったら、[プロファイルの開始]をクリックしてテストプロトコルを開始すると、ロッドは5分間で40rpmまで徐々に加速します。動物がロッドから落ちた場合は、プロトコルを開始する前にロッドに戻してください。
      注:動物は通常、最初の試行中にすべてのマウスを一度にロッドに置くのに十分な時間ロッドにとどまりません。開始時に一定の回転速度で動物をロッドに置くときは、辛抱強く待つことが重要です。テストの目的は、一定の回転速度でロッド上での動物の持久力を決定することではなく、動物がロッド上にとどまることができない速度を見つけることです。ロッドの速度は、ロッドにとどまる待ち時間に比例します。したがって、それは動物のバランスを表現するために使用されます。
   4. すべての動物がロッドから落ちた後、または5分が経過した後、動物を一時的な保持ケージに移動します。動物の排泄物を取り除き、ロッドとトレイをアルコールできれいにします。
   5. クリック 動物 -> 同じ方法で次の動物グループに進みます。すべての動物をテストしたら、[閉じる] をクリックして [計測] ウィンドウを閉じ、[表示] をクリックして収集したデータを表示します。取得したデータを.csvファイル形式でエクスポートし、[CSVのエクスポート]をクリックしてさらに分析します。
   6. 15分の試行間隔でロッド上の各動物を3回テストします。待機時間の平均値を使用して、3 つの試行をフォールオーバーして、さらに統計分析します。テストを5日間連続して繰り返すことにより、動物の運動学習を評価します。
      注意: ソフトウェアとハ ードウェアは異なる場合があり、関連するマニュアルに従う必要があります。さらに、機器自体は、たとえば、テスト位置の数、全体的な構造、およびロッドの寸法が異なる場合があります。
6. ネストレットシュレッダーネストビル
   1. 動物を標準装備(寝具、食物メッシュ、および給水)を備えた単一のポリカーボネートマウスケージに1週間分離します。鉗子を使用して約12 gの綿の巣箱を取り、はかりを使用して手動でその重量を記録し、ケージにランダムに置きますが、給水の反対側に置きます。動物と一緒にケージを収容室に戻します。
   2. 体重計を使用して手動で次の4日間、毎日同じ時間に各巣の重さを量ります。重量を紙または事前に作成されたスプレッドシートに記録します。計量するときは、各ネストレットが乾いていることを確認してください。そうでない場合は、加熱パッドで乾かし、マウスが巣を作った場所で、すべての巣を同時に割り当てられたケージに戻します。ネストレットがいくつかの部分に引き裂かれている場合は、最大のものの重さを量ります。
   3. データ分析のために、初期重量に対する各日のネストレット重量の減少を表し、それを使用済み材料のパーセンテージとして提示します。
      注:オスを一般的なケージに戻すと、動物の攻撃性が高まり、望ましくない怪我をする可能性があります。したがって、ネストレットシュレッダーテストは、動物福祉を損なうことを避けるために、テストレジメンの終わりに向かってスケジュールする必要があります。

結果

高架プラス迷路とオープンフィールドテスト
EPMおよびOFテストでは、げっ歯類が新しい環境を探索する自然な傾向を使用します^18,19。探査は、げっ歯類が新しい環境の探査と起こりうる危険の回避のどちらかを選択するアプローチ回避紛争によって支配されています。動物は、避難所、社会的接触、または採餌を求めて未知の場所を探索します。ただし、新しい場所には捕食者や競合他社などの危険因子が含まれる場合があります。OFテストとEPMはどちらも、OFテストでは周辺と中央、EPMではクローズドアームとオープンアームの安全なコンパートメントと危険なコンパートメントで構成されています。げっ歯類は、開いた、高く、明るく照らされた領域と比較して、暗くて囲まれたコンパートメントを自然に好みます。したがって、訪問回数と訪問期間の減少として、または最初の訪問までの潜時の増加として表される、危険/不安原性の部分の探索の減少は、動物の不安のような行動を特徴付けます

ディスカッション

異なるマウス系統で作成されたASモデルは、ヒトの症状との比較を容易にするために、動物の感情状態、運動機能、および認知能力のテストで一般的に検証されます^31,32。ASモデルの運動欠損は、実験室全体で最も一貫した所見であり、変異体の感情状態が変化しておらず、巣作りが困難であることが続いています31,32,33。対照的に、認知障害は軽度または不在のいずれかです7,31,33。認知表現型の不一致は、Huangらによって示されているように、試験された動物の年齢に依存するようである^7。したがって、この論文では、マウ...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ケージ、個別換気	Techniplast
DigiGait	Mouse Specifics, Inc., 2 Central Street Level Unit 110 Framingham, MA 01701, USA	機器が入札されました。カタログ 番号は提供されず、会社のWebサイトでも見つけることができませんでした	。マウスの歩行、ハードウェア、ソフトウェアの詳細な分析が提供されました。
FDA Nestlet squares	Datesand Ltd., 7 Horsfield Way, Bredbury, Stockport SK6, UK	Material は、Velaz ベンダーから直接電子メールで購入しました。Velazはカタログ番号を提供していません。	巣作りテスト用の綿の巣。ネスレットの説明:各2〜3 g、直径は約5 x 5 x 0.5cmです。
Mouse chow	Altramion
Rotarod	TSE Systems GmbH, Barbara-McClintock-Str.4 Berlin, Germany	Equipment was tendered, no catalogue  number was provided also's company	Rotarod for 5 mice, hardware and software provided.ドラムの寸法:直径:30 mm、レーンあたりの幅:50 mm、落下距離147 mm。
Tail Suspension Test	Bioseb, In Vivo Research Instruments, 13845 Vitrolles FRANCE	参考文献: BIO-TST5	尾に吊るされた3匹のマウスの不動時間評価のための全自動機器、ハードウェアおよびソフトウェア提供
Transpore medical	M, Ltd.	P-AIRO1291	尻尾でフックに取り付けるために使用されるテープ。
ビューア - ビデオ追跡システム	Biobserve GmbH, Wilhelmstr. 23 A 53111 Bonn, Germany	ソフトウェアを搭載した機器が入札されましたが、カタログ 番号は提供されておらず、会社のウェブサイトでもカスタム	メイドのハードウェアを備えたソフトウェアを見つけることができます:迷路、IRベース、IR感度カメラ。カスタムメイドの寸法:42 x 42 cmの面積、49 cmの高さの壁、中央ゾーンの面積:39 cm2。カスタムメイドのEPMは、床から50cmの高さにあり、開いたアームの長さは79cmでした。幅9cm、閉じた腕の長さ77cm、幅7.6cm。

website 動物を