アルツハイマー型における糸埋め込み鍼治療の手術手順と注意点

Summary

この研究は、アルツハイマー病様ラットにおける糸埋め込み鍼治療のプロトコルを提示します。

Abstract

糸埋め込み療法(TEAT)は、ツボに生分解性の縫合糸を挿入することで病気を予防・管理し、刺激を長く持続させる治療法です。TEATは、通常の鍼治療の不快感を回避し、持続的な治療効果を提供するシンプルなアプローチです。この記事では、アルツハイマー病様症状のラットの学習能力と記憶能力に対するTEATの潜在的な影響について説明します。ラットの化学的に誘発されたニューロンの変性および認知障害は、アルツハイマー病で観察される真の病理学的変化を完全に反映しているわけではない。そこで、当研究グループでは、これらの症状をアルツハイマー病様症状と指定しました。ツボの選択、操作プロセス、および頭と腰に必要な予防措置を概説するためのプロトコルが確立されています。実験は、対照群、モデル群、TEAT群の3つのグループで行われ、それぞれ6匹のラットが含まれていました。アルツハイマー病様症状を誘発するために、ラットにD-ガラクトースを7週間(49日間)腹腔内注射しました。TEATグループのラットは、ツボ猫腸埋め込み治療を受けました。介入期間の後、ラットの学習と記憶を評価するために、モリスウォーターメイズ(MWM)が実施されました。その後、ラットを生贄に加工し、脳組織を検査しました。アルツハイマー病の症状を示すラットの病理に対するTEATの影響を理解するために、組織学的検査が行われました。この研究は、TEATがアルツハイマー病様症状のラットの学習と記憶を改善する可能性があることを示唆しており、この神経変性疾患に対する新しい治療アプローチが有望である可能性を示しています。

Introduction

糸埋め込み鍼治療(TEA)は、特殊な針を使用してキャットガットまたは吸収性縫合糸をツボに埋め込むことを含みます。この技術は、縫合糸が吸収されて劣化するまで、効果が持続します。ツボに1週間以上持続的かつ持続的な刺激^{を与え、毎日の}反復的な手順²を必要とせずに同等の結果を達成します。これにより、治療を求める患者が減り、医療資源をある程度節約することができます。近年、TEATは、内科、外用医学、皮膚科、顔の特徴、婦人科、小児科など、中国のさまざまな医療分野でますます使用されています³。研究によると、てんかん⁴ や顔面神経麻痺⁵など、特定の慢性疾患や複雑な疾患に対して長期的かつ信頼性の高い効果を発揮するのに効果的であることがわかっています。それに最低の外傷および簡単な操作の利点^{がある 6}.さらに、TEAT の治療費は電気鍼治療 (EA) よりも低いと報告されています⁷。そのため、TEATは臨床研究や科学研究においてますます評価されています。

アルツハイマー病(AD)は、時間の経過とともに進行する神経変性疾患です。その病態生理学的過程は、臨床症状が現れる約20年前から蓄積し始めるが、そのメカニズムはまだ完全には解明されていない⁸。ADに有効な薬剤の入手可能性が限られていることを考えると、研究はますます疾患の前駆期および前臨床段階に焦点を当てています⁹。予防は、AD ^9,10の発症と進行に対処するための重要な戦略です。近年、伝統的な中国医学(TCM)は大きな進歩を遂げており、^AD11,12の予防と治療に新たな可能性を提供することが期待されています。鍼治療のサブタイプとして、TEAT は、その広い治療範囲、最小限の外傷、簡単な操作、低い治療頻度、および長期的な有効性により、他の治療法よりも好まれています⁶。新たな文献では、TEATは肥満^13,14、糖尿病¹⁵、不眠症¹⁶、閉経後骨粗鬆症¹⁷、うつ病¹⁸の個人に利益をもたらす可能性があることが示唆されており、これらはすべてADの危険因子です。また、マイトファ^ジー2を調節することにより老化ラットの老化を改善し、空間学習および記憶障害を改善し、海馬の病理学的損傷を緩和し、血管性認知症(VD)ラットの炎症応答を阻害する¹⁹。TEATがAD中の病理学的プロセスにも作用するかどうかを把握することは魅力的に見えました。

現在の研究では、埋め込み方法、埋め込みツール、スレッド、埋め込み間隔期間など、TEAT 操作のいくつかの重要な要素で統一性と標準化が欠けています。この標準化の欠如は、治療の効果の評価と関連するメカニズムの探求に影響を及ぼし、外部への昇進とコミュニケーションを制限します。先行研究^20,21では、D-ガラクトース(D-gal)の腹腔内投与が、ニューロンの変性や認知障害を含むラットのアルツハイマー病のような病理学的変化を誘発する可能性があることが実証されています。さらに、白慧(GV20)と神舟(BL23)での電気鍼治療は、認知機能低下の改善、神経炎症の緩和、および神経細胞の損傷の軽減に効果的であることが示されています。本研究では、アルツハイマー病様モデルラットを例に、このモデルの下でのツボの選び方やTEATの手術過程や注意点について紹介します。実験研究におけるTEATの重要な運用要素について説明し、将来の研究の参考資料を提供します。

Protocol

すべての実験は、国立衛生研究所の実験動物の管理と使用に関するガイドに従って実施され、湖北省疾病管理予防センターの実験動物管理および使用委員会によって承認されました。試験には、体重220〜250gの3か月齢の雌Sprague-Dawley(SD)ラット合計18匹を使用しました。すべてのラットは、23±1°C、湿度40%〜50%で12時間の明暗サイクルで維持され、餌と水に自由にアクセスできました。ラットが実験室の条件に慣れることを許された1週間の順応期間の後、実験が開始されました。

1. モデル開発

1. 実験計画を 図1に示します。体重220〜250 gの生後3か月の雌ラット18匹を、対照群、モデル群、および乳頭群にランダムに分けます。各グループは6匹のラットで構成されています。
2. モデル群とTEAT群にD-ガラクトース(D-gal;120 mg / kg /日)を毎日注射し、対照群は生理食塩水注射(120 mg / kg /日)を腹下部²²に7週間(49日間)注入します。注射は毎日午前8:00から9:00の間に投与する必要があります。
3. 毎週7日目の午前9:00から10:00の間にラットの体重を量ります。実験は49日間続きました。14^日、28日、42日に14日ごとに糸を埋めます。各スレッドの埋め込み時間を午前 9:00 から 12:00 の間に固定します。
4. ラットにアルツハイマー病関連の病理学的症状を誘発するために、D-ガラクトースの腹腔内投与を7週間続けてください²²。

2. 乳頭の準備

1. 眼科用ハサミ、トレー、ピンセットなどの手術器具を滅菌し、消毒します。手術室環境の表面を徹底的に清掃し、消毒します。
2. 手術用プラットフォームを準備するには、小動物の加熱パッドを表面に平らに置き、滅菌タオルでドレープします。その後、清掃・消毒した操作ボードを、粗い面を上に向けてスムーズに上に置きます。次に、加熱パッドのスイッチを入れ、温度を32°Cに設定します。
3. 施術には、直径0.6mmの6号使い捨て糸埋込針と、長さ2cmの5-0吸収性外科用縫合糸(コラーゲン縫合糸)を選択します。2cmの5-0吸収性外科用縫合糸を眼ハサミで0.5cmと0.2cmに切ります。カットした糸を0.9%生理食塩水に浸し、脇に置きます。
4. 石鹸と水で20秒間手を洗い、その後乾かします。その後、滅菌手袋を着用してください。
5. 腹側下部にクロラール水和物(300 mg/kg)をIP注射してラットに麻酔をかけ、つま先つま先つまみ試験による反応のなさに基づいて、手術面で動物が反応しない場合に麻酔を確認し、安定した生理状態を維持します。さらに、ラットが麻酔下にある間の角膜の乾燥や潜在的な損傷を防ぐために、動物用軟膏をたっぷりと目に塗布し、手順全体を通して目が潤滑されたままになるようにします。
   注:ネズミがピアスを経験するのは苦痛であるため、ラットに麻酔をかけることをお勧めします。

3. Baihui(GV 20)のスレッド埋め込み操作

1. 頭頂骨の右中点にあるラットのツボBaihui(GV 20)を見つけます(図2A)。ラットを頭が完全に露出するように配置し、耳を前方に引っ張って、耳の頂点線を接続するために人間で使用される方法に近づけます。頭蓋骨の中央の縦方向の隆起を触診し、その位置をほぼその中間点に特定することにより、Baihui(GV 20)ポイントを特定します。このツボは、矢状縫合糸と頭頂骨の交点に合わせて、平らに置いた場合に耳が頭に接触するレベルでさらに確認します。マーカーを使用してBaihui(GV 20)をマークします。
2. トリマー(通常は電動男性用ヒゲトリマー)を使用して、ラットのツボの周りの頭の領域を剃ります。
3. 手術前に、0.5%ヨウ素溶液を中心から外側に向かって円を描くように塗布し、ツボと周囲の皮膚を消毒します。その後、3つの消毒プロセスを実行します:iodophor 3xを使用し、それぞれに続いてアルコールを塗布して、適切な除染を確保し、無菌技術のためのサイトを準備します。
4. 鉗子を使用して、生理食塩水に浸した0.2cmの吸収性外科用縫合糸をクランプし、針管の前端に配置します。次に、針の芯に接続します。
5. 片方の手で親指と人差し指で白輝(GV 20)の周りをつまみ、もう一方の手で針を持ちます。
6. 針を白輝(GV 15)ポイントから0.1cm下、皮膚表面に対して20°の角度で水平かつすばやく挿入し、皮膚をつまみます(図3A)。
7. 針先がBaihui(GV 20)ポイントから0.1 cm上に達したら、針管を引っ込めながら針のコアを押して、0.2 cmの吸収性外科用縫合糸をツボの皮下組織に完全に埋め込みます(図3B)。
8. 縫合糸が露出していないことを確認しながら、針をゆっくりと取り外します。滅菌乾燥綿で針穴を10秒間押して、出血を防ぎます。ツボにラインを埋め込んだ後、糸が体外に出ている場合は、糸を抜いて再手術してください。

4. 神舟の糸埋め込み操作(BL 23)

1. ラットのツボ神舟(BL 23)は、第^2腰椎 の5mm外側に位置しています(図2B)。まず、ラットの股関節結節に基づいて6^番目の 腰椎を見つけます。次に、上向きに4つの椎体を数えて、2^番目の 腰椎を見つけます。神舟(BL 23)は、それに対して5 mm横になります²³。
   注:白慧(GV 20)と神舟(BL 23)のツボの組み合わせは、脳障害の予防と治療のために伝統的な中国医学(TCM)理論で頻繁に利用されるセットです。以前の研究^20,21で確認されたように、このツボの組み合わせはその有効性のために確立されています。
2. マーカーを使用して神舟(BL 23)をマークします。ラットのツボの周りの背中と腰の部分をトリマー(通常は電気ひげトリマー)を使用して剃ります。
3. 手術前に、0.5%ヨウ素溶液を中心から外側に向かって円を描くように塗布し、ツボと周囲の皮膚を消毒します。その後、3つの消毒プロセスを実行します:iodophorを3回使用し、それぞれにアルコールを塗布して、適切な除染と無菌技術のためのサイトの準備を確保します。
4. 鉗子を使用して、生理食塩水に浸した0.5cmの吸収性外科用縫合糸をクランプし、針管の前端に配置します。次に、針の芯に接続します。
5. 押す手の人差し指と中指、または親指と人差し指で皮膚を伸ばします。穴を開ける手で針を持ちます。
6. 針を神舟(BL 23)の0.25cm下のポイントに垂直にすばやく挿入します。 図 4A を参照してください。
7. 針先が皮膚下0.5cmに達したら、針先を調整し、挿入方向を求心性にして、皮膚表面と45°の角度を形成し、0.5cm斜めに挿入します(図4B)。
   注:腎臓の近くにある神舟(BL 23)に針を刺すときは注意が必要です。針を深く挿入したり、持ち上げたり突き上げたりすると、損傷を引き起こす可能性があります。そのため、挿入深さは0.3〜0.6cm程度をおすすめします。
8. チューブを引っ込めながら針の芯を押し、0.5cmの吸収性外科用縫合糸をツボのツボの筋肉組織に完全に埋め込みます(図4C)。
9. 縫合糸が露出しないように、針をゆっくりと引き出します。次に、滅菌乾燥綿で針穴を10秒間押して出血を防ぎます。ツボにラインを埋め込んだ後、糸が体外に出ている場合は、糸を抜いて再手術してください。

5. 術後のケア

1. 術後、麻酔からの回復を容易にするために、32°Cの温度に設定された小動物用加温パッドにラットを置きます。動物を飼育箱に戻す前に、動物が完全に意識があり、その状態が満足のいくものであることを確認してください。
2. 手術後、1週間以内に患部で無菌性炎症反応の兆候を観察します。これらの徴候には、発赤、腫れ、または膿のような分泌物が含まれる場合があります。通常、これらの症状は治療を必要としません。ただし、滲出液が過剰にある場合は、患部を排出して消毒してください。このような場合は、創傷が完全に回復するまでエリスロマイシン軟膏を塗布してください。

6. 行動検査と組織学的検査

1. 介入後、8 週目にモリス ウォーター メイズ (MWM) 実験 ^2,24 を実行して、学習能力と記憶能力を評価します。学習トライアルを 5 日間にわたって実施し、1 日 4 回のトライアルを行います。その後、最後の取得日から24時間後にプローブトライアルを実施します。
2. 統計解析ソフトウェアを使用して統計比較を実行します。一元配置分散分析(ANOVA)と事後テューキー検定により、学習能力の行動データを分析します。二元配置反復測定分散分析 (ANOVA) とそれに続く事後 Bonferroni 検定により、エスケープ遅延データの有意性を評価します。p <0.05の値は、すべてのテストで有意と見なされます。
3. 行動評価後、上記のようにラットに麻酔をかけ、150 mg / kg体重のペントバルビタールナトリウムの腹腔内注射で安楽死させます。.
4. 血管系を介して灌流された4%パラホルムアルデヒドを使用して、灌流によってラットの脳を固定します²⁵。
   1. 強制針の挿入と固定
      1. 12Gの針を準備し、まっすぐでラットの心室を通過するのに適していることを確認します。ラットの心室(通常は左心室)を特定し、それを通して針を上行大動脈に挿入します。この手順には、精度とラットの解剖学的構造に関する十分な理解が必要です。
      2. 針が所定の位置に配置されたら、止血剤を使用して、大動脈に入るポイントの近くに強制針を固定します。これにより、針を固定し、針が動かないようにすることができます。
      3. クランプが針をしっかりと保持するのに十分なほど締まっていることを確認しますが、大動脈を損傷したり血流を妨げたりするほどきつくはありません。強制針は、適切な灌流を維持するために、手順全体を通して上行大動脈に留まる必要があります。.
   2. 生理食塩水による灌流
      1. 灌流用の針なしの50ccシリンジを準備します。ラットの体外にある強制針のもう一方の端を、通常の生理食塩水で満たされた注射器に取り付けます。
      2. 心臓から血液が流れ出るように、右心房付属器を切るために小さな切開を行います。このステップにより、灌流中に血液が生理食塩水によって置換されます。
      3. 正常な生理食塩水を上行大動脈に着実かつ一定の速度で注入し始めます。これにより、血液が洗い流され、組織を固定するための準備が整います。
      4. 右心房付属器から出てくる液体を監視し、必要に応じてシリンジを交換して新鮮な生理食塩水との連続灌流を維持する準備をしてください。
         置き、固定剤で灌流する準備をします。
      5. 生理食塩水を含むシリンジを、組織学で一般的に使用される固定剤である4%パラホルムアルデヒドを含むシリンジと交換します。パラホルムアルデヒドを使用して灌流を進め、その後の処理と分析のために組織を所定の位置に固定します。
         注:この手順全体を通して、感染を防ぐために無菌技術を維持し、怪我を最小限に抑えるためにラットを優しく扱うことが重要です。さらに、一貫性と有効性を確保するために、関係するすべての人員が技術の訓練を受ける必要があります。
5. ラットの脳を取り出し、4%パラホルムアルデヒドを含む標本ボトルに4°^C25,26で24〜48時間入れます。エタノール脱水とキシレン処理を段階的に行い、その後、従来の連続冠状切片(4〜5μm)で測定します。ヘマトキシリンとエオシン (H&E) 染色 (200x) を使用して、各グループの海馬ニューロンの形態と喪失を評価します。
   注:胃腸(GI)病変を評価するための剖検検査は、実験期間を通じてGI障害を示す臨床徴候がないことに基づいてげっ歯類に対して実施されませんでした。.動物は、そのような病状の存在を示唆する明白な副作用を示さなかった。

Results

本稿では、アルツハイマー型認知症様ラットにおけるTEATの具体的な手術方法について紹介します。実験研究におけるTEATの重要な運用要素について説明し、将来の研究の参考資料を提供します。

乳首はアルツハイマー病様ラットの学習を改善します
フローチャート(図5)に示すように、適応訓練期間中、各グループのラットが遊泳中に周囲の環境を観察していることが観察されました。遊泳速度の分析(図6)では、グループ間で有意差はなく、移動速度と視覚のベースラインレベルが一貫していることが示されました。実験結果に観察された違いは、運動能力や視覚のばらつきによるものではありませんでした。

ラットは5日間のプラットフォーム検索トレーニングを受けました。 図7Aでは、ラットの各グループの運動軌跡が訓練の初期段階と後期段階で異なっていたことが観察できます。2日目は、逃げ出したネズミの群れのほとんどがランダムに泳ぎました。しかし、5日目には、対照群のラットは方向を向いて泳ぎ、モデル群のラットはプールの壁に沿ってランダムに泳ぎました。TEAT群ラットの動きは、ターゲット象限で密度が高くなりました。この実験では、脱出遅延を測定し、遅延が短いほど能力が高いことを示しました。 図7B は、モデル群が対照群と比較して学習能力と記憶能力の低下を示したことを示しています。しかし、TEAT グループは、AD 様病理を持つラットの空間参照記憶障害に有意な改善を示しました。

TEATはアルツハイマー病様ラットの空間記憶を改善します
プローブ試行では、動物が時間を過ごす位置は空間バイアス²⁷を示す。ラットは、プラットフォームを検索するために、エッジベース、ランダムベース、トレンドベース、および線形ベースの4つの主要な方法を使用します²⁸。結果は、ラットの各グループが異なる探索戦略を採用したことを示しています(図8A)。対照群は主に線形探索と指向性探索戦略を使用しており、強力な記憶力とプラットフォームの位置を思い出す能力が示唆されました。対照的に、モデル群のラットはエッジのようなメイン探索戦略を示し、記憶能力が著しく低下していることを示しました。彼らはプラットフォームを見つけることも、その場所を覚えることも学びませんでした。TEATグループのラットは、トレンドベースの検索戦略を示しました。軌道密度は、元のプラットフォームが配置されていた象限と隣接する象限で最も高かった。これは、モデルグループと比較してメモリが向上していることを示しています。

図8B および 図8C は、元のプラットフォームの象限での滞在期間とラットがプラットフォームを横切った回数の結果を示しています。モデル群のラットは、対照群と比較して、元のプラットフォームの象限での滞在時間とプラットフォームを横切った回数が大幅に減少しました(p <0.01)。モデル群と比較して、TEAT群のラットは、元のプラットフォーム象限での滞在時間とプラットフォームを横切った回数(p <0.01)に有意な増加を示しました。これらの結果は、TEAT が AD 様病理を持つラットの空間学習と記憶障害を改善できることを示唆しています。

TEATはラットの海馬の老化を改善します(図9)。対照群と比較して、モデル群のラットは、錐体細胞の数とその不規則な配置の大幅な減少を含む、深刻な病理学的変化を示しました。また、核凝縮や神経細胞の変性などの異常が認められました。しかし、TEAT治療後、ラットの海馬錐体細胞の数は増加し、より組織化されました。一部の核は凝縮を示しましたが、全体的な細胞形態はより正常に見えました。細胞はより密集して分布し、秩序化され、細胞質染色はより一貫性があり、細胞を取り巻く浮腫は大幅に減少しました。特に、正常な錐体細胞が観察されました。

図1:実験のフロー図。 適応の1週間後(0週目)、研究では18匹のラットをコントロール、モデル、TEATの3つのグループに割り当てました。1週目から7週目には、対照群には生理食塩水の注射を受け、モデル群とTEAT群にはD-ガラクトースを投与しました。TEATグループはさらに、2週目、4週目、6週目に糸埋め込み鍼治療を受けました。すべてのラットは、8週目にモリス水迷路テストを受け、その後安楽死しました。略語:Adapt = 適応、Con = 対照群、Mod = モデル群、TEAT = 糸埋め込み鍼治療群、D-gal = D-ガラクトース、MWM = モリス水迷路テスト。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図2:ツボの位置。(A) ラットのツボBaihui(GV 20)。それは頭頂骨の右中間点に位置しています。 (B) ラットのツボ神舟(BL 23)。これは、第2腰椎の側方5mmに位置しています。略語:GV = Governor Vesselは、体の背面の正中線に沿って走る主要な経絡を指す伝統的な中国医学(TCM)の概念であり、BL = Bladderは膀胱経絡を表し、TCMでは、体と脚の後ろに沿って走る6つの陽経絡の1つであるFoot-Taiyang経絡に対応します。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図3:Baihui(GV 20)の詳細なスレッド埋め込み操作。(A) 針は、Baihui(GV 20)のツボから0.1cm下の皮膚表面に対して15°の角度で水平に挿入され、皮膚をつまんで手順を容易にします。 (B) 針先が白輝(GV20)のツボから0.1cm上の位置に到達したら、針管を引っ込めながら針芯を押し込み、0.2cmの吸収性外科用縫合糸をツボの皮下組織に完全に移植します。略語:GV = Governor Vessel、伝統的な中国医学(TCM)の概念で、体の後面の正中線に沿って走る主経絡を指します。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図4:神舟の詳細なねじ山埋め込み操作(BL23)。(A) 針は、神舟(BL 23)の深さまでツボに垂直に急速に挿入されます。 (B) 針先が皮膚表面から0.5cmの深さに達すると、針はツボの中心に向かってリダイレクトされ、皮膚と45°の角度を作り、その後、0.5cmの深さまで斜めに挿入されます。 ( C) 針軸が前進している間、チューブは引っ込められ、0.5cmの吸収性外科用縫合糸のセグメントが神舟(BL)の筋肉組織に完全に移植されます。23) ツボ。略語:BL = Bladderは、Bladder Meridianの略で、TCMでは、体と脚の後ろに沿って走る6つの陽子午線の1つであるFoot-Taiyang子午線に対応します。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図5:WMWテストのフローチャート。 実験前の適応訓練は0日目とされ、その間にラットの運動能力が観察され、遊泳速度が統計的に分析されます。これに続いて、5日間の場所ナビゲーションフェーズ(1日目から5日目)が続き、脱出までの待ち時間(脱出待ち時間)がさまざまなグループ間で比較および分析されます。6 日目には、空間プローブの試行が行われ、ターゲット象限で費やされた時間 (ターゲット象限の滞留時間) とプラットフォームの交差回数が評価されます。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図6:グループ間の遊泳速度(m/s)の比較。 この図は、それぞれが6匹の動物(n = 6)で構成されるさまざまな実験グループにわたるラットの平均遊泳速度(メートル/秒)を示しています。エラーバーは標準偏差を示します。ns (p > 0.05) で示されるように、群間差は得られませんでした。統計解析はSPSSソフトウェアを用いて行い、すべてのデータは正規分布に従っていました。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図7:WMWのプレイスナビゲーションの結果。(A) このパネルは、場所ナビゲーション試験中の各実験グループ内のラットのナビゲーション経路を示す代表的な運動軌道図を示しています。 (B) エスケープレイテンシーは、秒(s)で測定され、各グループが6匹のラット(n = 6)で構成されるグループ間で比較されます。統計分析は、ナビゲーション試行の過程における被験者内の影響とグループ間の被験者間の違いを評価するために、二元配置反復測定ANOVAを使用して実行されました。データは正規分布の仮定に準拠しており、グループ平均±標準偏差として示されています。有意差は、対照群とアスタリスク(*p < 0.05, **p < 0.01)、モデル群とハッシュタグ(#p <0.05, ##p < 0.01)で示されています。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図8:WMWのプローブトレイルの結果。(A) パネルには、各実験グループ内のプローブ試行におけるラットの空間探索行動を捉えた代表的な運動軌跡図が表示されます。 (B) このグラフは、ラットのプラットフォーム位置の記憶保持を反映して、グループ間でターゲット象限内の滞留時間(秒、秒)を比較します。 (C) グラフは、ラットがプラットフォームエリアを横切った頻度(freq)を示しており、彼らの空間記憶能力を示しています。各グループは6匹のラット(n = 6)で構成され、データは一元配置分散分析を使用して統計的に分析され、グループ間の違いが評価されました。データは正規分布に準拠し、平均±標準偏差として表示されます。有意差は、対照群と比較した場合のアスタリスク(**p < 0.01)と、モデル群と比較した場合のハッシュタグ(#p < 0.05、##p < 0.01)で示されています。**p < 0.01 対対照群、#p < 0.05 対モデル グループ、##p < 0.01 対モデル グループ。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図9:ラット群の海馬CA1領域のヘマトキシリンおよびエオシン染色評価(200倍拡大)。(A) 対照群は、保存状態の良い錐体細胞を有する典型的な神経細胞構造を示す。 (B) モデル群は、錐体細胞の密度の著しい減少、暗く染色された変性ニューロン、および無秩序な配置を特徴とする顕著な病理学的変化を示します。 (C) TEATグループは、海馬のアーキテクチャが強化されており、より整然としていて、より規範的な形態を持つ錐体細胞の数が増加しています。時折核の凝縮が見られますが、細胞はより密集しており、均一な細胞質染色を示し、細胞周囲浮腫の大幅な減少を示しています。規範的な錐体細胞の存在が特に観察されます。スケールバー = 50 μm. この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

Discussion

介入時間
ADの病因は複雑であり、その病因は依然として不明です。現在、この病気に対する効果的な治療法はなく、その経過は不可逆的です。したがって、学界は、ADの予防と治療に焦点を当てることの重要性についてコンセンサスに達しました。ADの予防および治療戦略は、状態が発生する前に治療するというTCMの概念に従って、早期介入を強調し、発症、感染、および再発前の治療を強調しています。ヒト^29,30およびげっ歯類^31,32における蓄積された研究は、早期の鍼治療および灸介入が明らかな副作用なしに有意な結果を達成できることを示しており、ADを予防および治療するための有望な潜在的方法となっている。したがって、この研究では、モデリングプロセス中に治療を行いました。TEAT は、D-gal 腹腔内注射の開始時に実施されました。

ツボの選択
ADは、主に記憶、言語、推論、社会的行動に関与する脳領域に影響を与える重度の神経変性疾患です。脳(Nao)は、TCMでは骨髄の海(Sui)と考えられています。骨髄(Sui)は、TCMに特有の物質であるエッセンス(Jing)でできており、体の本質的な体質的な強さ、活力、抵抗力であると考えられています。エッセンス(Jing)は主に腎臓(Shen)に蓄えられます。腎臓のエッセンス(シェンジン)が弱いと、脳(ナオ)に栄養が不足し、認知障害が発生する可能性があります。したがって、TCMは、腎臓を強壮し、エッセンス(ジン)に利益をもたらすことが脳機能の改善に役立つことを示唆しています。脳は、ガバナー血管(GV)や太陽足の膀胱経絡(BL)などの特定の経絡が脳に入るときに、直接影響を受ける可能性があります。ADの予防と治療に使用されるガバナー血管(GV)と足の太陽(BL)の膀胱経絡の組み合わせは、非常に利用されています^33,34。Baihui(GV 20)は頭部の頂点に位置するツボで、ガバナー船の一部です。文献によると、ADの予防と治療に鍼治療と灸を使用した研究では、白輝(GV 20)の発生頻度が最も高く、式³⁵の重要なポイントと見なされています。神舟(BL 23)は、太陽足の膀胱経絡にあるツボです。それは、第2腰椎の棘突起の下縁から外側1.5寸に位置している。腎臓のバックトランスポート-シュウポイントとして、腎臓の陰、陽、エッセンス(ジン)、気など、腎臓のすべての側面を強化することができます。白慧(GV 20)と神舟(BL 23)での鍼治療と灸は、さまざまな方法で認知機能を改善し、AD症状を緩和する可能性がある^36,37。

インターバル時間
TEAT³⁸ の運用基準では、治療間隔と治療コースは、疾患の状態と選択した手術部位に基づいて、1週間から1か月の間隔で決定する必要があると規定されています。治療の経過は1〜5回の範囲です。この提案は、実験動物研究でも従うことができます。レビューされた文献³⁹に基づくと、治療は通常、週に1回または2週間ごとに行われ、ほとんどのケースでは4〜8回の連続した治療が行われます。実験は49日間続き、その間に糸は14^日、28^日、42^日に 埋められました。

ツールと方法
現在の実験動物研究では、さまざまな糸埋め込みツールが使用されています。これらには、No.7⁴⁰またはNo.9⁴¹使い捨て糸埋め込み針、自己再発明針、およびNo.12腰椎穿刺針⁴²が含まれます。自己再発明された針は、チューブとしてNo.5-7シリンジを使用し、針の芯には適切な糸状針を使用しています。針先は事前に滑らかにされています。例えば、体重250 ± 20 g(月齢は本文中で指定されていない)のSDラットを用いた研究では、No.7シリンジと0.30 x 0.40 mm糸状針^43,44を選択する。しかし、自己発明した針は厳密に消毒する必要があり、広く使用することはできません。針先が大きすぎたり鋭かったりすると、血管や神経が損傷し、打撲傷が発生する可能性が高くなります⁴⁵。直径が大きく先端が尖っている腰椎穿刺針は、血管や神経を傷つけやすいです。使い捨ての埋め込み針は、臨床診療で最も使用されています³⁹。自己再発明された針や腰椎穿刺針と比較して、使いやすく、操作が安全であるため、乳頭に最適です。さらに、実験の目標は人間の健康を改善することです。したがって、動物実験は臨床状況を反映する必要があります。したがって、使い捨ての糸埋め込み針を糸埋め込みツールとして使用することをお勧めします。

TEATではCatgutが主な糸材料でしたが、組織拒絶反応や動物由来の成分により、生合成吸収性の外科用縫合糸に取って代わられました。縫合糸には様々なサイズがあり、4-0縫合糸や3-0縫合糸用のNo.7など、針に合わせる必要があります。動物実験では、3-0⁴¹、4-0⁴⁶、5-0⁴⁷ が主に用いられます。ほとんどの縫合糸の長さは1〜2cmです。しかし、げっ歯類は人間よりもはるかに体が小さいため、体のサイズに適したサイズが不足しています。したがって、研究者は縫合糸をげっ歯類に適したものにするために、縫合糸を0.2〜0.5cmのセグメントに切断する必要があります。したがって、縫合糸は、切断後、後の使用または即時適用のために浸す前に、清潔で滅菌済みの蒸留水または生理食塩水ですすぐことが推奨されます⁴⁶。

いくつかの研究では、ツボの約0.5cm下からツボ⁴⁸に向かってツボに素早く針を挿入するなど、埋め込み方法の詳細な要件が提案されています。げっ歯類は小さいので、これは重要です。下肢に豊富な筋肉組織があることに加えて、頭、背中、腹部の皮下組織と筋肉層は比較的弱いです。したがって、動物研究におけるTEATの挿入点と挿入角度の問題をここで強調する必要があります。げっ歯類の下肢に乳頭切除を行う場合、ツボに直接針を刺すことが可能です。本体は、内臓の損傷を防ぐため、斜めの針(<45°)やフラットの針(<15°)を使用して、ツボの下に針を挿入(糸本体の長さに応じて距離を柔軟に調整できます)することをお勧めします。

アルツハイマー病の予防と治療におけるTEATの可能性
近年、乳頭に関する研究が始まっていますが、その効果やメカニズムは未だに解明されていません。上述したように、TEATは、肥満^13,14、糖尿病¹⁵、不眠症¹⁶、閉経後骨粗鬆症¹⁷、うつ病¹⁸などのAD関連危険因子を改善することができる。これは、VDラットの学習障害と記憶障害に有益な効果をもたらします¹⁹。TEATは、運動誘発性疲労ラットの組織損傷を改善するために、PPAR経路を通じて脂質代謝を調節し⁴⁹、TRPV1経路⁵⁰を通じて間欠的な寒冷ストレス誘発マウスにおいて抗炎症作用および鎮痛効果を発揮する。本研究では、AD様ラットに糸埋め込み治療を行うことで、空間記憶の喪失を改善し、海馬CA1領域の変性細胞を減少させることで、学習障害や記憶障害を軽減できることを実証しました。ただし、現在の研究では、埋め込み方法、埋め込みツール、スレッド、埋め込み間隔期間など、TEAT操作のいくつかの重要な要素に統一性と標準化が欠如しているため、この記事では主に実験研究におけるTEATの重要な運用要素について説明します。この研究は、ADに対するTEATの影響の予備的な調査にすぎず、それらの間の正確な分子と相互作用を明らかにするには、はるかに補完と改善が必要でした。それにもかかわらず、それは避けられないADプロセスのための新しい試みを提供し、それはどういうわけか公的医療制度の重い負担を軽減するかもしれません。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9%生理食塩水、4%パラホルムアルデヒド、ヘマトキシリン、エオシンY(水溶性)、無水エタノール、0.01M PBS粉末、キシレン、塩酸、埋め込みパラフィン、中性ガム	ノファーム(www.sinopharm.com)
5-0吸収性外科用縫合	ボディメディカル(www.bodamedical.com)
70%アルコール、ヨードフォア、コットンボール			に使用。
クロラール水和物	シグマ	C8383
カバースリップ、スライドガラス	広州武強実験装置有限公司
脱水機	武漢Junjie JT-12J コンピュータ化された生体組織脱水機
デラックスサーモスタットヒートマット	Zhenhua Instruments		ラットの体温を維持するため。
D-ガラクトース	シグマ	G0750
電動男性用ひげトリマー			ズミの髭を剃るのに使用します。
小動物用電子スケール(ZK-DST)	河南Zhike情報技術有限公司
スロマイシン軟膏フロント	ファーム
ガラス皿			カット吸収性縫合糸を配置するために使用されます。
高圧蒸気滅菌ポット(YM100Z)	上海三深医療機器工場		器具の滅菌用。
製氷機(CMB40)	Shanghai Sheyan Instrument Co., Ltd.
顕微鏡(BX-53)	オリンパスの
粉			MWM試験に使用。
モリスウォーターメイズビデオトラッキングシステム&データ分析ソフトウェア(バージョン:Watermaze 2.0)	Chengdu Taimeng Technology Co.、Ltd
No.6スレッド埋め込み針	bodamedical(www.bodamedical.com)
眼科用ハサミ、トレイ、ピンセット
理学ミクロトーム (RM 2016)	LEICA、ドイツ
ペントバルビタール	ドイツ	P11011
油性マーカー			ボをマークするために使用されます。
スライスナイフ(R35)	の羽根、日本の
石鹸			手を洗うのに使います。
滅菌手袋