このプロトコルはデキストランの硫酸塩ナトリウムと結合されるアゾメタンによって引き起こされる潰瘍性coloproctitis準のcolorectal癌のマウス モデルを提供する。このモデルは、大腸がんの予防と治療における伝統的な漢方薬化合物の有効性を評価するために使用されました。
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この記事について
サマリー
要約
大腸がん(CRC)は消化器系の一般的な悪性腫瘍であり、世界で3番目に多い悪性腫瘍であり、悪性腫瘍関連死因の第2位となっています。潰瘍性大腸炎(UC)は前癌性病変であり、UC関連CRC(UC-CRC)は大腸がんの最も一般的なサブタイプです。したがって、合理的なUC-CRCモデルは、新薬開発の基礎であり、保証です。漢方薬(TCM)は、その優れた有効性により、UC-CRCの治療に広く使用されています。中医学の古典的な強壮剤処方として、Liujunzi煎じ薬(LJZD)はUC-CRCの治療に広く使用されています。本研究では、アゾメタンとデキストラン硫酸ナトリウムを併用してUC-CRCモデルを確立し、LJZDを投与した。このデータから、LJZDは、マウスの体重、大腸の長さ、病理学的および炎症的因子、大腸バリア機能、およびがんマーカーを使用して、UC-CRCのがん転移を効果的に抑制できることが確認されました。このプロトコルは、UC-CRC の予防と治療における TCM の有効性を評価するためのシステムを提供します。
概要
大腸がん(CRC)は、一般的な消化器悪性腫瘍であり、世界で3番目に多い悪性腫瘍であり、世界で2番目に多い死因であり、世界のがん発生率の10%、がん関連死全体の9.4%を占めています1,2。遺伝的要因、慢性炎症、高脂肪食、糖尿病、および異常な腸内細菌叢は、大腸がんの危険因子です3,4。その中で、炎症性腸疾患、特に潰瘍性大腸炎(UC)は、CRC 5,6の明らかな危険因子です。UC関連CRC(UC-CRC)は、大腸の慢性炎症に基づく炎症、非定型過形成、および癌の移行過程であり、CRC 7,8の典型的な腺腫-腺癌発生モデルとは異なります。一般集団と比較して、炎症性腸疾患の患者では大腸がんのリスクが約10〜40倍高くなります9。
現在、大腸がんの標準治療は依然として手術であり、腫瘍の位置と病期に応じて、放射線療法、全身薬物療法、またはその両方の組み合わせが可能です
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プロトコル
この動物実験は、長春中医薬大学倫理委員会によって承認されています(記録番号:2021214)。特異的病原体フリーC57BL/6Jマウス(8-10週、体重18-22g)の雌雄を、22°C、相対湿度65%の独立換気ケージに収容した。マウスは、水と食事を自由に利用できる適応摂食を7日行った後に実験を開始しました。
1. 薬剤の調製
- LJZDの調製
注:使用された漢方薬は長春中医薬大学付属病院から購入し、本物の漢方薬であることが確認されました( 表1参照)。- 唐深(12g)、白珠(12g)、甘草(6g)、陳彡(12g)、江板霞(9g)を専用の陶器鍋に入れます( 材料表を参照)。1000 mLの蒸留水を加え、室温で1時間浸漬します( 図1Aを参照)。
- 粉末12gをグラインダーで微粉末にし、別の容器に蒸留水300mLを室温で1時間浸します。
- 専用の陶器鍋で上記の漢方薬を混ぜます。混合物を沸騰させ、300 mLの煎じ薬だけが残るまで中火で続けます。濾過には医療用ガーゼを使用し、濾液は室温で保存してください。
- 1000mLの蒸留水を加え、上記の煎じ薬操作をもう一度繰り返します。医療用ガーゼを使用して再度ろ過します。濾液を混ぜ合わ....
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結果
LJZDの煎じ薬は、 表1 の薬物の組成比および 図1AのTCMの煎じ薬方法に従って調製した。 図1Bに示した時点によると、マウスに7日目に 1mg/mLのAOMを腹腔内注射し、3週目、6週目、9週目に 2%DSSを含む飲料水をマウスに自由に投与した。UC-CRCマウスモデルは、15週目に 正常に確立されました。一方、マウスは7週目から15週目まで強制経口投与でLJZDを投与された。データは、対照群と比較して、UC-CRCモデル群に有意な体重減少が見られ、LJZD治療によって緩和されたことを示しました(図2A、P < 0.01)。試験終了時に、LJZD治療はUC-CRCモデル群と比較してDAIスコアを改善した(図2B)。対照群と比較して、UC-CRCモデ.......
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ディスカッション
大腸がんは世界で最も多いがんの1つであり、毎年約1,148,000人が新たに発症し、576,000人以上が死亡しています。大腸がんは、遺伝性、散発性、UC-CRC31など、さまざまな原因に応じて3つのタイプに分けることができます。UCなどの炎症性腸疾患患者における大腸がんの発生率は、一般集団のそれよりも有意に高い。UCは、典型的な腺腫-腺癌経路とは異なる炎症性-がん経路を介して大腸がんの発症を刺激する6。現在、UC-CRCの原因は不明であり、主に長期の再発性慢性炎症によって引き起こされ、死亡率は最大60%です32,33。UC-CRCには有効な治療法はなく、近年研究のホットスポットとなっています。UC-CRCの分子メカニズムを理解することは、UC-CRCの早期発見と正確な治療に不可欠です。
現在、UC-CRCの動物モデルを構築する方法は数多くあり、その形成メカニズムも異なり.......
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開示事項
著者は何も開示していません。
謝辞
この研究は、吉林省科学技術局(YDZJ202201ZYTS181)の支援を受けた。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| アゾキシメタン | シグマ | A5486 | |
| 5-アミノサリチル酸 | Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd | 3819413 | |
| C57BL/6J | 遼寧省長生バイオテクノロジー株式会社 | NO 210726210100853716 | |
| カバースリップ | 江蘇省泰実験装置有限公司 | 10212432C | |
| DABカラー開発キット | Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd | 2005289 | |
| 脱水機 | 武漢Junjie電子有限公司 | JJ-12J | |
| デキストラン硫酸ナトリウム | 大連美倫バイオテクノロジー株式会社 | MB5535 | |
| 埋め込み機 | 漢Junjie電子有限公司 | JB-P5 | |
| マトキシリン-エオシン染料 | 武漢百度バイオテクノロジー株式会社 | B1000 | |
| IL-6 | 江蘇美麺工業株式会社 | MM-0163M2 | |
| イソフルラン | RWDライフサイエンス株式会社 | R510-22-10 | |
| KI67一次抗体 | Google Biotechnology Inc | GB121141 | |
| 中性ガム | 武漢百度バイオテクノロジー株式会社 | 10004160 | |
| オブジェクトスライド | 江蘇省泰実験装置有限公司 | 10212432A | |
| オクルージン一次抗体 | アフィニティ | DF7504 | |
| 起立性光学顕微鏡 | ニコン | ニコン エクリプス CI | |
| 病理学的ミクロトーム | 上海ライカ計器株式会社 | RM2016 | |
| ZO-1 一次抗体 | Abcam | ab221547 |
参考文献
- Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 Cancers in 185 Countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
- Tsai, K. Y., et al.
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再版と許可
