ここでは、デング熱の診断ニーズに応えるため、臨床血清・血液サンプル中のデング熱NS1抗原濃度を定量するスマートフォンアプリ内蔵デング熱NS1紙ベース分析装置(DEN-NS1-PAD)をご紹介します。このイノベーションは、リソースが限られているものも含めて、さまざまな医療現場での臨床的意思決定を支援することで、デング熱の管理を強化します。
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方法論記事
ここでは、デング熱の診断ニーズに応えるため、臨床血清・血液サンプル中のデング熱NS1抗原濃度を定量するスマートフォンアプリ内蔵デング熱NS1紙ベース分析装置(DEN-NS1-PAD)をご紹介します。このイノベーションは、リソースが限られているものも含めて、さまざまな医療現場での臨床的意思決定を支援することで、デング熱の管理を強化します。
ネッタイシマカによって媒介されるデングウイルス(DENV)感染症は、熱帯および亜熱帯諸国における主要な公衆衛生上の懸念事項です。年間約1,000万人の患者と20,000〜25,000人の死亡者、特に子供の間では、実用的な診断ツールが緊急に必要とされています。デング熱の非構造タンパク質1(NS1)は、感染初期にサイトカインの放出、血管漏出、内皮機能障害と関連しており、重度のデング熱のマーカーとなる可能性があります。
ラテラルフローアッセイ(LFA)やマイクロ流体紙ベースの分析デバイス(PAD)などの紙ベースのイムノアッセイは、その簡便性、迅速性、安価性、特異性、および解釈の容易さから、診断検査として人気を博しています。しかし、デング熱NS1検出のための従来の紙ベースのイムノアッセイは、通常、目視検査に依存しており、定性的な結果しか得られません。この限界に対処し、感度を高めるために、スマートフォンアプリケーションを比色および定量リーダーとして統合した、紙ベースの分析装置(PAD)でのポータブル性の高いNS1デング検出アッセイ、つまりDEN-NS1-PADを提案しました。この開発システムにより、臨床サンプル中のNS1濃度を直接定量することができます。
患者から採取した血清・血液サンプルを用いて、システムの試作性能を実証しました。結果はすぐに得られ、設備の整った医療施設とリソースが限られている環境の両方で、臨床評価に採用できます。紙ベースのイムノアッセイとスマートフォンアプリケーションのこの革新的な組み合わせは、デング熱NS1抗原の検出と定量を強化するための有望なアプローチを提供します。このシステムは、肉眼の能力を超えて感度を高めることにより、特に遠隔地やサービスの行き届いていない地域におけるデング熱管理における臨床的意思決定を改善する大きな可能性を秘めています。
デングウイルス(DENV)感染症は、蚊が媒介する病気としては最も急速に広がり1、世界では年間3億9,000万人以上が9,600万人の症候性感染症に感染し、200万人が重症化し、2万5,000人以上が死亡しています1,2。世界保健機関(WHO)によると、推定39億人がデング熱のリスクにさらされています。~70%がアジア太平洋諸国、主に東南アジアに住んでいます3.2019年にWHOに報告されたデング熱の症例数は420万人で、タイでは少なくとも136,000人のデング熱患者と144人のデング熱感染による死亡例が144件ありました4。タイでのデング熱の流行は、4月から12月までの雨季に、都市部と農村部、特に北東部で発生します。
DENV感染症は、無症候性症状、軽度のデング熱(DF)から重度のデング出血熱(DHF)まで、さまざまな臨床症状を示します。重度のDHF状態の主な特徴は、血管透過性の増加であり、ショックと臓器機能障害が続きます1。血管漏出を引き起こす可能性のある分子経路を理解することは、効果的なデング熱治療薬を開発する上で非常に重要です。デング熱の非構造タンパク質1(NS1....
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タイ王国陸軍医療局、プラモンクットクラオ病院、バンコク、タイの治験審査委員会の倫理委員会(IRBRTA 1218/2562)が承認を与えました。この調査を実施するにあたり、必要なすべての倫理規定を遵守しました。
1. 紙製イムノアッセイの装置作製
注:紙ベースのイムノアッセイデバイスは、以前に確立された方法36、37、およびタイ特許請求第19010081638号に従って製造されました。
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製造方法の選択は、紙ベースのイムノアッセイデバイスで再現性のあるアッセイ性能を確保するために極めて重要です。私たちの研究では、紙ベースのイムノアッセイを実証する文脈で、さまざまな製造プロセスと材料を調査しました。私たちが選択した方法は、ワックス印刷システムを利用して、紙ベースのマイクロ流体デバイス内に疎水性バリアを作成します。このアプローチは、そのシンプルさ、スピード、一貫した結果により際立っています。注目すべきは、タンパク質の吸着を妨げ、セルロース紙の疎水性を高める可能性のあるフォトレジスト化学物質の使用を回避できるという利点があることです。さらに、ワックスプリンティングにより、流体チャネルの寸法が一定になり、再現性のあるアッセイ性能に貢献します。
疎水性バリアの形成に続いて、イムノアッセイに必要な試薬をセルロース紙の表面に塗布しました。PLLは、静電吸着により、アミン官能基の正電荷と負電荷を帯びた抗体の両方と相互作用することにより、生体分子の固定化を支援しました。このステップにより、抗体の修飾と固定化、および製造プロセス中の標識抗体複合体の適用が容易になります。重要なのは、この.......
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スマートフォンベースのリーダーシステムの重要な設計パラメータの1つは、サンプルの再現性のある画像処理を提供する能力です。この研究では、シンプルさと利便性のために、イメージングボックスやアクセサリを使用せずに、12〜13MPカメラを搭載した3つの異なるスマートフォンブランドから画像をキャプチャしました。カメラの解像度、画像撮影時間、照明条件、環境など、画像キャプチャのさまざまな条件は、デバイス上のテストおよびコントロールスポットの色の強度に影響を与える可能性があります。PADの照明と乾燥に対する異なる画像撮影時間の影響は、正規化された信号強度を使用することによって最小限に抑えられ、それはさまざまな時間に撮影された画像間で一貫していました36。背景信号減算は、色強度測定の精度を高め、照明条件の影響を効果的に軽減するための戦略として登場しました。私たちの発見は、環境への影響を最小限に抑える上でのベースラインまたはバックグラウンド減算技術の有効性を強調する以前の研究と一致しています39,40<.......
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著者には開示すべき利益相反はありません。
M.H.P.は、インドネシア・イスラム大学(UII)からの奨学金研究基金に感謝しています。著者らは、モバイルアプリケーションの開発と原稿への貢献を通じて、貴重な専門知識と支援をしてくれたNutchanon Ninyawee氏に感謝の意を表します。さらに、タイ科学研究イノベーション(TSRI)の2023年度基礎研究費(プロジェクト番号。FRB660073/0164)は、モンクット王工科大学トンブリ校のプログラムスマートヘルスケアの下で。
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| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| <強>材料 | |||
| 0.1 Mリン酸緩衝生理食塩水(PBS、pH 7.2) | |||
| 0.1%のTween 20、10%のスクロース、および1%のカゼインを含むBBS | コンジュゲート領域処理およびブロッキングバッファー | ||
| ホウ酸緩衝生理食塩水 (BBS) (pH 8.2 で 25 mM ホウ酸ナトリウムと 150 mM 塩化ナトリウム) に 1% BSA を添加。 | |||
| Bovine serum albumin fraction V (BSA)との結合プロセス中の洗浄バッファーAuNPs | PAA Lab GmbH(ドイツ) | K41-001 | |
| カゼイン | メルク | 9005-46-3 | |
| クロマトグラフィーペーパーグレード2 | GEヘルスケア | 3002-911 | |
| クリアラミネートフィルム | 3M (文房具店) | ||
| リン酸水素二ナトリウム | メルク | 7558-79-4 | |
| ダブルテープサイド | 文房具店 | ||
| ヤギ 抗マウス IgG 抗体 | MyBiosource(米国) | MBS435013 | |
| 金ナノ粒子(40 nm) | Serve Science Co., Ltd. (タイ) | ||
| ヒトIgGポリクローナル抗体 | メルク | AG711-M | |
| マウスデング熱NS1モノクローナル抗体 | MyBiosource (USA) | MBS834415 | |
| マウスデング熱NS1モノクローナル抗体 | MyBiosource (USA) | MBS834236 | |
| NS1 serotype 2 antigens | MyBiosource (USA) | MBS 568697 | |
| PBS 1X containing 0.1% Tween 20 was used as t | elution buffer | ||
| バッキングカード 10x30 cm | Pacific Biotech Co., Ltd. (Thailand) | ||
| Poly-L-lysine (PLL) | Sigma Aldrich | P4832 | |
| Potassium Chloride | メルク | 104936 | |
| 一リン酸カリウム | メルク | 104877 | |
| 塩化ナトリウム | メルク | 7647-14-5 | |
| 四ホウ酸ナトリウム | シグマ アルドリッチ | 1303-96-4 | |
| ショ糖 | メルク | 57-50-1 | |
| トゥイーン 20 | シグマ アルドリッチ | 9005-64-5 | |
| Instruments | |||
| CytationTM 5 マルチモード リーダー | BioTek | ||
| 携帯電話 | Huawei Y7、iPhone 11、Samsung a20 | ||
| フォトスキャナー | エプソン パーフェクション V30 | ||
| オーブン | Memmert | ||
| ワックスプリンター | Xerox ColorQube 8880-PS | ||
| Software | |||
| Could AutoML Vision Object Detection ドキュメント | Google Cloud | ||
| ImageJ | National Institute of Health, Bethesda, MD, USA | ||
| Inkscape 0.91 ソフトウェア |
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