プロトコルは例として骨肉腫のマウス モデルのYiqi Jieduの煎じ薬の煎じ薬の煎じ薬の方式および強制経口の技術の詳しい標準化プロセスを提供する。動物保護について説明し、研究データの信頼性を向上させ、in vivoでの煎じ薬処方の治療効果と分子メカニズムを調査するための効果的な戦略を提供します。
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この記事について
サマリー
要約
煎じ薬は、伝統的な漢方薬で最も一般的に使用されている剤形であり、経口投与によって何千年もの間臨床診療に適用されており、患者の特定の症候群に基づいて迅速な効果、吸収の容易さ、および個別化された治療を特徴としています。煎じ薬の品質は、伝統的な漢方薬の臨床効果に直接関係しています。したがって、主観的要因によって引き起こされる煎じ薬の品質の違いを避けるために、煎じ薬処方の標準化プロセスが重要です。一方、臨床実験の実施には限界があるため、マウスなどのヒトの病気を媒介とする小動物は、漢方薬の煎じ薬を含むさまざまな介入の治療効果と包括的なメカニズムを調査するために医学研究によく使用されます。したがって、経口投与法として重要な経口投与法として、食道の損傷や薬剤のこぼれを防ぐために熟練した強制経口投与技術が特に重要であり、これにより、各モデル動物に均等な量の薬が投与され、正確な実験結果が得られます。さらに、煎じ薬調製剤の標準化された方法と熟練した強制経口投与戦略は、動物福祉を保護し、使用される動物の数を最小限に抑えるために必要です。ここでは、骨肉腫マウスモデルにおけるYiqi Jiedu煎じ薬を用いた煎じ薬処方と強制経口投与技術の詳細な標準化プロセスを報告しました。有効性は腫瘍体積によって評価された。従ってこのプロトコルは動物保護を最大にし、研究データの信頼性を改善し、生体 内の従来の漢方薬のための煎じ薬の方式の治療効果そして分子メカニズムを将来調査するための有効な作戦を提供する。
概要
煎じ薬は、伝統的な漢方薬と液体の薬の最も一般的に使用される剤形です1,2。伝統的な漢方薬の煎じ薬は、ハーブを水に浸した後、水で煎じ、濾過してかすを捨てることによって処理されます。
煎じ薬の処方は、特に伝統的な中国医学における証拠に基づく治療の特徴に沿って、臨床的必要性に基づいて個別化できるため、経口投与によるこの剤形は、何千年もの間臨床診療に適用され、具体的でかけがえのない利点があります3,4.煎じ薬の品質は、臨床効果に直接関係しています。したがって、煎じ薬処方は、有効成分が最大限に抽出され、保護されるように、標準化された煎じ薬法の原則に基づいて調製する必要があります3。一方、煎じ薬対応薬は、臨床診療で使用される生の漢方薬の主な形態です。処方された煎じ薬の品質基準と製造方法は、中国薬局方2の規定に準拠している必要があります。さらに、処方された煎じ薬は、冷たい飲料水に少なくとも30分間浸してから、加熱して特別な医薬品ポットで煎じる必要があります5。研究によると、ほとんどの有効成分は2回煎....
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プロトコル
このプロトコルはサンプルとしてYiqi Jieduの煎じ薬の使用によって骨肉腫モデルマウスの詳しい強制経口の技術を記述する。この実験では、生後4週間の雄の胸腺マウス(BALB/cヌード)を使用し、上海中医薬大学実験動物センターのSPFグレードの飼育室で飼育しました。すべての動物実験は、上海中医薬大学動物管理委員会によって承認され、実験動物倫理綱領(動物倫理承認番号:PZSHUTCM2304060007)に準拠し、実験動物に関する国際的な要件に厳密に従って実施されました。
1. 素材
- 漢方薬(高麗人参42g、 Hedyotis diffusa 52.5g、有刺鉄線スカルキャップハーブ31.5g)、1mLシリンジ、12G/55mm肘強制経口注射針を入手します(図1)。
2.投与量の決定
- 標準体重60kgの成人の1日投与量は、高麗人参12g、 Hedyotis diffusa 15g、とげのある頭蓋骨ハーブ9gで、合計36gの煎じ薬、つまり0.6gの煎じ薬/ kg体重です。体表面積11によると、標準体重60kgの成体と標準体重25gのマウスの等価用量12倍、低用量6倍....
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結果
in vivoでの骨肉腫の増殖に対するYiqi Jiedu煎じ薬の阻害効果は、143B骨肉腫細胞を胸腺マウスの脛骨に注入することによって調製された脛骨内異種移植骨肉腫マウスモデルで決定されました。Yiqi Jiedu煎じ薬は、Yiqi Jiedu煎じ薬群のマウスに、143B注射の2日目から28日間強制経口投与した。生理食塩水を対照群のマウスに投与した。すべてのマウスを28日後に安楽死させた。結果は、Yiqi Jiedu煎じ薬群の腫瘍体積が対照群と比較して有意に減少していることを示しました(図5)。
図1:煎じ薬の消耗品。 煎じ薬は、(A
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ディスカッション
伝統的な漢方薬で処方されたハーブの臨床効果は、投与量と剤形に大きく関連しています。したがって、標準化された煎じ薬戦略および熟練した投与プロセスの確立は、臨床診療において、ならびに実験結果の信頼性を向上させるためにも必要である。
この研究では、まず、伝統的な漢方薬の臨床診療で使用される漢方薬の標準化された煎じ薬の詳細な戦略を提供し、科学的に煎じ薬を煎じるための人々の指導を容易にし、煎じ薬の品質と漢方薬の臨床効果を実質的に改善します。したがって、標準化が達成されれば、臨床診療における漢方薬の有効性の正確性と一貫性が向上します。
強制経口投与法は、前臨床試験における経口摂取法として広く適用されており、マウス、ラット、ウサギなどのさまざまな実験動物に適用でき、投与の容易さ、正確な投与量管理、薬物投与の臨床経路を模倣する能力などのいくつかの利点があります13。しかし、麻酔なしで誤った姿勢で固定すると、動物は苦戦し、研究者の健康を脅かし、実験の信頼性を低下させる可能性があります。したがって、.......
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開示事項
著者らは、開示するものは何もないと宣言しています。
謝辞
現在の研究は、(1)国家自然科学基金(81973877および82174408)、(2)中国国家重点研究開発プログラム(2020YFE0201600)、(3)上海最優先研究センター建設プロジェクト(2022ZZ01009)、(4)上海共同イノベーションセンター病院中医薬準備の産業変革、および(5)上海中医薬大学の予算内の研究プロジェクト(2021LK047)からの助成金によってサポートされています。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 143B細胞株 | ATCC | CRL-8303 | 骨肉腫細胞株 |
| 麻酔器 | 深センRWDライフテクノロジー株式会社 | R500IP | 麻酔マウスの機器 |
| 自動セルカウンター | 上海シモ生物技術株式会社 | IC1000 | カウント細胞 |
| BALB/c 無霊性マウス | 上海SLAC実験動物株式会社 | 男性 | の動物の |
| とげのある頭蓋骨のハーブ | 上海Yanghetang伝統的な漢方薬タブレット株式会社 | 20230606 | 煎じ薬用医薬品 |
| 基底膜マトリックス | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow vevage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | 胃灌流装置 |
| ガーゼ | ハイシハイヌオグループ株式会社 | LC45 | 煎じ薬フィルター |
| 高麗人参 | 上海Wanshicheng Pharmaceutical Co.、Ltd. | 20220704-2 | 煎じ薬用医薬品 |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. (上海陽河堂伝統漢方薬タブレット株式会社) | 2023071107 | 煎じ薬用医薬品 |
| イソフルラン | 深センRWDライフテクノロジー株式会社 | VETEASY | 麻酔マウス |
| マイクロボリュームシリンジ | 上海高鳩産業貿易株式会社 | 0-50 &L | 脛骨に精密な細胞 |
| 注入する リン酸緩衝生理食塩水 | Beyotime Biotechnology | ST447 | 洗浄 ヒト骨肉腫細胞 |
| 輪ゴム | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | 計量カップ固定ガーゼ |
| シリンジ (1mL) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | 胃 | 灌流装置 |
| トリプシン(0.25%)のSBM0040 | YueNian Biotechnology Co.、Ltd | 25200056、細胞のGibco | トリプシン治療 |
参考文献
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12(2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specifi....
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再版と許可
