雌C57BL/6Jマウスにおける精神疾患に対する多重統合社会的ストレスモデル

何億人もの人々が精神疾患を抱えて生活しており、不安障害や抑うつ障害が最も一般的です。世界保健機関(WHO)によると、2019年には世界中で2億8,000万人以上、3億100万人以上がうつ病と不安を抱えて生活していました^1。COVID-19のパンデミックにより、不安障害と抑うつ障害の影響を受けた人の数は、わずか1年でそれぞれ26%と28%と大幅に増加しました。罹患者のうち、女性における精神障害の生涯有病^{率は男性の約}2倍であり2、女性はより重篤な症状、より大きな機能障害、非定型的な抑うつ表現型、より頻繁な再発、および薬物に対する反応性の低下を示しています^3,4,5。

精神障害の多くの側面における性差は十分に文書化されています^が6,7,8、ほとんどの前臨床研究は、主に適切な女性動物モデルの欠如のために、主に男性被験者に焦点を当てています^9,10。その結果、女性におけるこれらの障害の病因は、まだ十分に理解されていません。このことは、女性を対象とした動物モデルの開発が急務であることを強調しており、これにより、女性の精神疾患の根底にある神経生物学的メカニズムの調査が容易になります。

雌マウスの社会的ストレスモデルは、反復社会的敗北ストレス(RSDS)パラダイム^11,12,13,14に基づいて開発されるものが増えている。例えば、最近雌マウスで確立された2つのRSDSモデルでは、雌マウスへの雄の尿の適用による男性の攻撃性を人為的に増強することと、雄の攻撃者における視床下部の腹外側細分化の化学遺伝学的活性化が含まれていた11,12,13。しかし、これらの誘発された攻撃的行動は自然に発生しておらず、雌マウス¹⁰に関連するストレッサーを表していない可能性があると主張されている。さらに、マウンティング行動に起因する妊娠は、その後のメカニズム研究を複雑にします。

RSDSに基づく別の修正モデルは、雌マウスが男性間の社会的敗北を視覚的に目撃する代用社会的敗北ストレスパラダイムである¹²。雌-雌の社会的敗北プロトコルは、さまざまなげっ歯類の系統でも開発されています14,15,16。いくつかの懸念にもかかわらず、これらの後者の2つのモデルで使用される社会的ストレス要因は、人間の精神障害¹⁴に病因学的に関連しているようです。理想的なうつ病モデルには、構成物(病因学的)妥当性が必要であり、モデルで使用されるストレス誘発法は、障害の実際の原因を密接に反映している必要があります。

精神疾患の病因は、生物学的、遺伝的、環境的、心理社会的要因が関与する多因子性であると考えられています。実験動物でこれらの危険因子を操作することは、機構研究や薬物スクリーニングの関連モデルを開発するために不可欠です。1つ以上のストレッサーをシミュレートする社会的動物モデルと非社会的動物モデルの両方が、人間の精神障害に関連する中核症状と神経生物学的変化を再現できます。例えば、慢性軽度ストレス(CMS)モデルは、複数の物理的ストレッサー(例えば、濡れた寝具、テールサスペンション、テールクランプ、空腹時)をランダムに交互に組み合わせることにより、安定した効果的な神経病理学的および抑うつ様行動表現型を誘導する17,18,19,20,21,22,23.これらの知見は、複数の危険因子の反復モデリングが、精神疾患を研究するためのパラダイムを構築するための実行可能な戦略であることを示唆している。慢性社会的敗北ストレス(CSDS)モデルは、社会的ストレス要因24,25,26をシミュレートするうつ病の最も広く使用されているパラダイムの1つです。このモデルは、単一のタイプのストレッサーを模倣することに限定されていますが、その病因学的関連性は、トランスレーショナルリサーチの大きな進歩につながっています。例えば、CSDSに基づく研究では、腹側被蓋領域のドーパミン作動性ニューロン上のカリウム(K⁺)チャネルがうつ病に対するレジリエンスを媒介する主要な標的として特定され、レチガビン(エゾガビン)などのKCNQ型K⁺チャネルオープナーが、うつ病様マウスとうつ病患者の両方において有望な抗うつ薬候補として強調されている27,28,29,30,31.その結果、いくつかの独創的な研究が、女性指向の攻撃性を誘発することにより、CSDSパラダイムを女性のうつ病をモデル化するように試みてきました^11,12。上記の証拠は、複数の社会的ストレス要因を反復曝露と統合することが、雌動物の精神医学モデルを開発するための重要な方向性を表しているという考えを支持しています。

雌のC57BL/6Jマウスでは、精神障害をモデル化するために10日間の多重統合社会的ストレス(MISS)パラダイムが最近開発され、信頼性のある病因、顔、構成、および予測的妥当性が実証された³²。MISSモデルを確立するために、雌のC57BL/6Jマウスを毎日10日間連続して4つの連続したストレッサーにランダムにさらしました:社会的競争の失敗(チューブテスト)、修正された代用社会的敗北ストレス、避けられない過密ストレス、およびその後の社会的孤立³²。この研究では、MISSパラダイムをモデル化するための詳細なプロトコルを提供します。

すべての実験手順は、徐州医科大学動物管理および使用委員会(承認番号202207S127)によって承認され、実験動物の世話と使用に関する国立衛生研究所のガイドラインに従って実施されました。C57BL/6J雌マウス(対象マウスは7-8週齢、勝者候補は10-14週齢)、C57BL/6J雄マウス(積極的なCD1スクリーニングは7-8週齢)、およびこれらの実験で使用したCD1引退ブリーダーマウスは、市販の供給源から入手した。すべてのマウスは、12時間の明暗サイクルの下で飼育され、餌と水は自由に提供されました³³。ベースラインの行動測定は、MISSパラダイムの開始前に、必ずしもすべてのコホートに対して行われましたが、その後の行動結果が個人の変動性ではなくストレス曝露に起因することを確認しました。完全なプロトコルの概要を図1に、完成した実験セットアップを図2に示します。この研究で使用した試薬と機器の詳細は、材料表に記載されています。

1. 慣れ

1. 環境への慣れ
   1. MISSプロトコル専用の独立した部屋を指定し、12時間の明暗サイクルで一定の温度(23°C±2°C)、湿度(50%-60%)、および光強度(15-20ルクス)を維持します。
      注:特に指定がない限り、モデリング期間全体を通じてこの部屋にハツカネズミを配置します。
   2. スチール製の蓋とコーンコブの寝具を備えた標準的なマウスケージ(L × W × H:37 cm × 16 cm × 12 cm)を準備します。
   3. 7-8週齢のC57BL/6J雌マウスを対象マウスとして用いる。マウスをナイーブグループとMISSグループにランダムに割り当て、ケージごとに5匹のマウスで飼育します。
      注:実験には、同等の年齢と体重の雌マウスを選択します。
   4. 10-14週齢のC57BL/6J雌マウスをwinner screening³⁰の候補として使用します。これらのマウスをケージごとに4匹ずつのグループで飼育し、安定した社会的地位を確立します。
   5. 退役した繁殖マウスのオスをアグレッサー候補として使用します。CD1マウスを個別に飼育して縄張り意識を確立し、戦闘を防ぎます。コホート飼育のC57BL/6J雄マウス(ケージあたり5匹、7〜8週齢)を侵入者として使用して、積極的なCD1スクリーニングを行います。
   6. 購入後7日間、すべてのマウスが輸送ストレスに慣れ、回復するのを待ちます(図1A1)。
   7. すべてのマウスを飼い、食べ物と水を自由に利用できます。
2. チューブへの慣れと取り扱い
   1. 短いアクリルチューブ(図2A、長さ10cm、内径26mm)を雌被験者マウスと勝者候補の各ケージに入れます。マウスがチューブに順応し、3日間チューブを通過することを学ぶのを待ちます。
      注意: チューブの直径は、1匹の成虫のマウスが向きを変えずにスムーズに通過できるように十分である必要があります。
   2. 雌被験者マウスと勝者候補を1日1〜2分間、3日間取り扱って、なじみのない実験者に関連するストレスを軽減します(図1A2)。
   3. 慣れ期間の終わりに、各マウスの尾に赤または黒の油性マーカーを付けます。
      注意: マーキングを定期的に確認し、必要に応じて再塗布してください。

2. チューブ競技、勝者スクリーニング、CD1アグレッサースクリーニングのトレーニング

1. チューブ競技のトレーニング
   注: この手順の詳細については、前のレポート^32,34 を参照してください。
   1. 雌被験者マウス、雌勝者候補、透明アクリル管(図2B、長さ30cm、内径26mm)、プラスチックスティック、75%エタノール、ペーパータオルを準備します。テーブル、チューブ、プラスチックスティックを75%エタノールで清掃し、臭いの手がかりを取り除きます。
   2. 各女性被験者のマウスまたは勝者候補の尻尾をそっとつかみ、マウスをテーブルに置きます。環境順応のために、約1分間自由に探索できるようにします。
   3. マウスのテールを持ち、チューブの一方の端に置きます。
      注意: マウスの頭がチューブの端を向いていて、前足がテーブルに触れていることを確認して、ストレスを最小限に抑え、侵入を容易にします。
   4. マウスがチューブに入ったらテールを放し、自発的に通過させます。
      注意: マウスが停止したり、逆転を試みたりした場合は、プラスチック製のスティックを使用してテールにそっと触れます。
   5. マウスをチューブの反対側の端に置き、手順2.1.4を繰り返します。ステップ 2.1.3 から 2.1.5 を 1 サイクルとしてカウントします。
   6. 手順2.1.3と2.1.5を2サイクル繰り返します(図1B1)。
   7. マウスをホームケージに戻します。75%エタノールでチューブを洗浄し、臭い、尿、糞便を取り除きます。
      注意: 次のマウスで使用する前に、チューブが清潔で乾燥していて、残留アルコール臭がないことを確認してください。
   8. すべての雌マウスに対して手順2.1.2〜2.1.7を3日間連続して繰り返し、各マウスがチューブを通過することに慣れることを確認します。
2. 受賞者の選考
   注: この手順の詳細については、前のレポート^32,34 を参照してください。
   1. 女性受賞者候補、チューブ(長さ30cm、内径26mm)、プラスチックスティック、エタノール75%、ペーパータオル、タイマーを用意します。臭いの手がかりを最小限に抑えるために、機器を清掃して乾かします。
   2. スクリーニングの前に、各マウスを1サイクルチューブに通すように再訓練します。チューブに見える中央線を引きます。
   3. 両方のマウスの尾を持ち、チューブの反対側の端に置きます。彼らが中点で入って会うことを許可し、同時に彼らを解放してタイマーを開始します。
      注:各競技で同じケージのマウスを使用してください。
   4. 「勝者」を、相手をチューブから押し出すマウスとして識別します。1ポイントを付与します。「敗者」は0ポイントを受け取ります。
      注意: 勝者が後退するのを防ぐために、プラスチック製の棒を使用してください。両方のマウスが凍りつき、1分以内に後退しない場合は、プラスチックスティックで各マウスの尾にそっと触れて、行動を促します。
   5. マウスの開始位置を逆にして、手順2.2.3-2.2.4を繰り返し、結果を再度スコアリングします(図1B2)。
   6. 両方のマウスを自宅のケージに戻し、75%エタノールでチューブを完全に清掃します。
   7. ラウンドロビン形式を使用して、各マウスを他のすべてのケージメイトと一致させ、各ペアに対して手順2.2.3-2.2.5を繰り返します。
      注:このアプローチにより、包括的で公正なランキングが保証されます。
   8. 合計スコアに基づいてマウスをランク付けします。各ケージ内で最もスコアの高いマウスを、後続の実験の「勝者」として選択します。
3. CD1アグレッサースクリーニング
   注: この手順の詳細については、前のレポート³⁵ を参照してください。
   1. CD1引退ブリーダーマウス、C57BL/6J雄マウス(侵入者)、タイマーを用意する。
   2. C57BL/6JオスマウスをCD1オス(常駐アグレッサー)のホームケージに直接3分間置きます。
      注: 侵入者はセッション中に逃げることはできません。
   3. 最初の攻撃までの遅延、攻撃の数、および攻撃性の指標として 3 分以内の攻撃的な行動の期間を記録します。
   4. 手順2.3.2〜2.3.3を1日1回、毎日異なる侵入マウスを使用して3日間連続して繰り返します(図1B3)。
   5. 次の2つの基準に基づいて、さらなる実験の攻撃者としてCD1マウスを選択します:(1)3つのセッションのうち少なくとも2つで攻撃した必要がある、および(2)各セッションで攻撃待ち時間が1分未満である必要があります。

3. モデリング

注:このステップには、チューブテストでの社会的競争の失敗、修正された代理社会的敗北ストレス、および避けられない過密ストレスへのランダムな曝露が含まれ、その後、10日間連続して社会的孤立が続きます。

1. 社会競争の失敗
   注: 詳細については、前のレポート^32,34 を参照してください。
   1. 雌被験者マウス、選別された「勝者」マウス、チューブ(長さ30 cm、内径26 mm)、プラスチックスティック、75%エタノール、ペーパータオル、およびタイマーを準備します。
   2. 雌被験者マウスを個別に(ケージごとに1匹)再収容し、ナイーブマウスをグループ(ケージあたり5匹)に収容します。
      注:モデリングの開始時に、ナイーブマウスを新しいグループケージに移動します。モデリング期間中は、新しいケージに変更する必要はありません。
   3. テーブル、チューブ、プラスチックスティックを75%エタノールで清掃し、臭いの手がかりを取り除きます。
   4. マウスを自宅のケージから慎重に取り出します。MISSマウスと「勝者」マウスをチューブの両端に配置して、前方に歩いて中間点で会うようにします。MISSマウスは「勝者」によってチューブから押し出されます。
      注:「勝者」のより大きなサイズ、より高い体重、および支配的な社会的地位により、実験的なMISSマウスはほぼ常にチューブ競争に負けます。マウスが30秒以上動かない場合は、プラスチック製の棒で勝者の尾にそっと触れて、押すように促します。
   5. 2匹のマウスの位置を切り替えて、手順3.1.4を繰り返します。ステップ 3.1.4 と 3.1.5 を 1 サイクルとしてカウントします。
   6. MISSマウスと「勝者」マウスを自宅のケージに戻します。テーブル、チューブ、プラスチックスティックを清掃して臭いを取り除きます。
   7. 斬新な勝者マウスを導入し、同じMISSマウスで手順3.1.4〜3.1.5を繰り返します。したがって、各MISSマウスは、2サイクル連続してチューブの競合に失敗しました(図1C1、 図2E)。
   8. すべてのMISSマウスに対して手順3.1.4〜3.1.7を10日間連続して繰り返します。
2. 修正された代理の社会的敗北ストレス
   1. スクリーニングされた攻撃的なCD1引退ブリーダーマウス(単独で飼育)、雄のC57BL/6Jマウス、雌のMISSマウス、および穴あきアクリルカバーを準備します(図2C;L × W × H: 8 cm × 8 cm × 5.5 cm) 穴あり (天板に 5 × 5、側壁に 3 × 5、各穴の直径 0.5 cm)。
   2. 雌のMISSマウスをCD1アグレッサーのケージの中に入れ、穴あきアクリルカバーの下に閉じ込めて、攻撃的な相互作用を代理観察できるようにします。
      注意: CD1またはMISSマウスのいずれかでアクリルカバーが転倒する可能性を監視します。CD1ケージ内のトウモロコシの穂軸の敷料を減らすと、転倒を防ぐことができます。
   3. オスのC57BL/6J侵入マウスをケージに入れ、CD1マウスに10分間物理的に攻撃します。雌のMISSマウスは、穴あきカバー(図1C2、 図2F)を通じて相互作用を観察します。
      注:侵入者のマウスが重傷を負った場合は、すぐにセッションを終了し、動物を治療してください。小さなトウモロコシの穂軸ペレットを使用すると、戦闘中の寝具の変位が増幅され、MISSマウスの没入型体験が向上します。
   4. 10分後、オスの侵入者を取り除き、メスのMISSマウスにCD1マウスへの感覚曝露をさらに5分間待ちます。.
   5. 手順3.2.3〜3.2.4を、異なる男性の侵入者に対してさらに2回繰り返します。
   6. MISSマウスをホームケージに戻します。男性の侵入者の怪我を監視して治療します。
   7. 穴あきアクリルカバーを掃除し、こぼれた寝具を掃き出します。
   8. 新しいCD1の引退したブリーダーを使用して、手順3.2.2-3.2.5を10日間連続して繰り返します。
3. 避けられない過密ストレス
   1. 雌のMISSマウス、白い不透明なスリーブを準備します(図2D;L × W × H:14 cm × 10 cm × 20 cm)、トウモロコシの穂軸寝具、75%エタノール、ペーパータオル、タイマー付きの標準的なマウスケージ。
   2. 不透明なスリーブを寝具付きの標準的なケージの中に入れます。
   3. 12〜15匹の雌マウス(すべてのMISSマウスまたは他の雌マウスと混合)を毎日30分間スリーブに導入します(図1C3、 図2G)。
      注意: マウスのサイズに応じて数を調整して、踏みつけずに密集するようにします。必要に応じて、スリーブを透明な穴あき蓋で覆うことで脱出を防ぎます。
   4. マウスを自宅のケージに戻し、75%エタノールでスリーブを清掃します。
   5. ステップ 3.3.3 を 10 日間連続して繰り返します。
4. 社会的孤立
   1. 雌のMISSマウスとトウモロコシの穂軸の寝具を備えた標準的なマウスケージを準備します。
   2. ハウスMISSマウスは、10日間のモデリング期間の残りの期間、社会的競争の失敗、代用敗北ストレス、または過密ストレスを受けていない場合に個別に観察します(図1C4、 図2H)。
      注:ナイーブマウスは、尾部によって一時的なケージに穏やかに移され、その後、ストレスにさらされることなく自宅のケージに戻されます。 MISSマウスのように、餌と水を自由自在に提供します。

4. 行動テスト

注:行動実験は、マウスのうつ病様および不安様の行動を評価するために、モデリング後1週間以内に実施されます。各テストの前に、雌マウスを行動試験室(15〜20ルクス照明)に移動し、1時間の慣れを行います。各テストの後、マウスは元の住居施設に戻されます。

1. ショ糖選好試験
   注:詳細については、以前のレポート^36、37、38を参照してください。
   1. 雌被験者マウス、ボールペンチューブ付き飲料ボトル(50 mL)、鋼線トップ付き標準マウスケージ、スクロース、電子スケール、メスシリンダー、攪拌ロッド、計量紙、水、ノート、ペンを準備します。
   2. すべての女性被験者マウス(ナイーブマウスとMISSマウス)を個別に収容します。
   3. ボトルに飲料水(容量の~2/3)を入れます。
      注:実験を開始する前に、ボトルから漏れがないことを確認してください。
   4. 各マウスに2本の水で満たされたボトルを並べて置き、2日間の慣れさせます。
   5. 1%ショ糖水(水99mLあたり1gのスクロース)を調製します。
   6. テストの開始時に、1本のボトルの水を1%ショ糖溶液と交換します。両方のボトルの初期重量を記録します。
   7. 12時間後、ボトルの重量を再度記録し、位置のずれを避けるためにボトルの位置を切り替えます。
   8. 24時間後、最終的な重量を記録し、ショ糖の好みを次のように計算します:ショ糖の好み(%)=(ショ糖摂取量/総水分摂取量)× 100
   9. テストの最後に、マウスを通常の水筒で自宅のケージに戻します。
   10. すべてのボトルとボールペンチューブを水で完全に洗浄します。
2. テールサスペンション試験
   注:このテスト³² は、実験デザインに応じて、マウスの同じまたは別のコホートで実施されてもよい。この研究では、ショ糖選好試験の3日後に実施されました。
   1. 雌被験者マウス、尾部懸垂試験箱(高さ55cm×幅60cm×深さ12cm)、粘着テープ、ストップウォッチ、アルコール75%、ペーパータオルを用意します。
   2. ビデオ追跡システム³⁹を設定します。アクティブゾーンを定義し、録音を開始します。
   3. テストボックスを75%エタノールで清掃します。
   4. マウスの尻尾の端から~2cmのところにそっとテープを貼り、逆さまに吊り下げて、頭が箱の底から~25cm離れていることを確認します。
      注意: スイングを最小限に抑え、不必要なストレスを避けてください。
   5. 追跡ソフトウェアを使用して行動を記録する³⁵ 6 分分析には、最後の 4 分間の不動時間を使用します。
      注:不動とは、体が受動的にぶら下がっている状態で動きがないことと定義されます。マウスが転倒または上昇した場合のデータを除外します。
   6. テープを慎重にはがし、マウスをホームケージに戻します。
3. オープンフィールドテスト
   注: 詳細については、前のレポート^40,41 を参照してください。
   1. 雌被験者マウス、野外試験箱(40cm×40cm×40cm)、75%エタノール、ペーパータオルを調製します。
   2. ビデオ追跡システムを設定します。アリーナを4つ×4つのサブエリアに仮想的に分割します。中央の 4 つのユニットを中央ゾーンとして定義し、残りのユニットを周辺ゾーンとして定義します。
   3. テストボックスを75%エタノールで清掃します。
   4. 対象のマウスをボックスの中央にそっと置き、頭を同じ方向に向けてください。5分間探索します。
      注意: 取り扱いのストレスを軽減するために、移動にはパレットを使用してください。
   5. ビデオ追跡システムを使用して、中央ゾーンでの総移動距離と滞在時間を記録します。
   6. テストの最後に、マウスをホームケージに戻し、装置を清掃します。
4. 高架プラス迷路テスト
   注: 詳細については、前のレポート³² を参照してください。
   1. 雌の被験者マウス、高架プラス迷路、75%エタノール、ペーパータオルを準備します。
      注:迷路は2本の垂直滑走路(床から50 cm)で構成されており、それぞれに2本のアーム(長さ30 cm×幅5 cm)があります。1つのセットには高さ15cmの壁(閉じた腕)があり、もう1つのセットは開いています。中央の面積は5cm×5cmです。
   2. ビデオ追跡システムを設定し、開いた腕、閉じた腕、および中央領域を定義します。
   3. 75%エタノールで迷路を掃除します。
   4. マウスを迷路の中央にそっと置き、開いた腕を向けます。5分間無料で探索できます。
      注意: パレットを使用して、配置中のストレスを最小限に抑えます。
   5. トラッキングシステムを使用して、各アームで費やした時間を記録します。
      注: マウスが迷路から落ちた場合は、そのデータを除外します。
   6. マウスをホームケージに戻し、迷路を徹底的に掃除します。

MISS曝露が抑うつ様行動変化を誘発するかどうかを調べるために、MISSパラダイムにさらされた雌のC57BL/6Jマウス(n = 16/グループ;サンプルサイズは検出力解析により決定、補足ファイル1および補足ファイル2を参照)を用いて評価した。これは、うつ病-無快感症と行動的絶望の中核症状をそれぞれ評価するショ糖選好試験と尾懸濁試験を用いて評価された(図3A-F).ナイーブコントロールマウスと比較して、ミスに曝露されたマウスは、水摂取量に対応する変化なしに、ショ糖選好の有意な減少を示しました(図3C-D)。また、MISS群のマウスは、尾部懸垂試験で不動時間が長くなり(図3F)、行動の絶望感が高まったことが示されました。

MISS曝露が不安様行動にもつながるかどうかを評価するために、マウスを野外でテストし、プラス迷路パラダイムを高めました。ミスに曝露されたマウスは、ナイーブコントロールと比較して、オープンフィールドの中央ゾーン(図4A-C)と高架プラス迷路のオープンアーム(図4D、E)で過ごす時間が大幅に少なかった。

まとめると、これらの知見は、MISSパラダイムへの曝露が雌マウスにおいて抑うつ様行動と不安様行動の両方を誘発することを示している。

図1:MISSモデルの概略図。 (A)馴化:実験マウスを7日間輸送ストレスから回復させた後、3日間チューブを馴染ませて取り扱いました。(B)訓練とスクリーニング:(B1)チューブトレーニング実験マウスを、チューブを通過するように訓練しました、1日2サイクル、3日間連続して。(B2クラス中級)受賞者の選考手順の概略図。(B3)積極的なCD1引退ブリーダースクリーニング手順の概略図。(C)3つのストレッサーへの無作為化された曝露とそれに続く10日間連続した社会的孤立からなるモデリングフェーズ:(C1)チューブ競争の失敗。(C2)代用社会的な敗北ストレス。(C3)避けられない過密ストレス。(C4)社会的孤立。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図2:MISSパラダイムの実験装置(A)慣れに用いた長さ10cmのアクリルチューブ(内径26mm)。(B)チューブ競技に使用した長さ30cmのアクリルチューブ(内径26mm)。(C)代用社会的敗北ストレスのための穴あきカバー(L × W × H:8 × 8 × 5.5 cm)。(D)過密ストレスに使用されるアクリルスリーブ。(E)チューブ競技の手順の代表的な画像。(F)代用社会的敗北ストレス設定の写真。(G) 過密ストレス設定のトップダウンビュー。(H)社会的に孤立した状態で飼育されているマウスの写真。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図3:雌のC57BL/6JマウスにおけるMISS曝露による抑うつ様行動。(B)ショ糖選好試験の概略図。(C)ナイーブ対ショ糖の好み。MISSばく露マウス(対応のないスチューデントのt検定、t30 = 3.108、**P < 0.01、n = 16匹/群)。(D)ショ糖選好試験における総水分摂取量(対応のないスチューデントのt検定、t30 = 0.8669、P > 0.05、n = 16匹/群)。(E)テールサスペンションテストの概略図。(F)尾部懸垂試験における不動時間(対応のないスチューデントのt検定、t30 = 2.589、*P < 0.05、n = 16匹/群)。エラーバーはSEMを表します。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図4:雌のC57BL/6JマウスにおけるMISSばく露による不安様行動 の誘導 (A)オープンフィールド試験におけるナイーブマウスとMISばく露マウスの代表的な活動軌跡。(B)中央ゾーンで過ごした時間(対応のないスチューデントのt検定、t30 = 2.365、*P < 0.05、n = 1グループあたり16匹のマウス)。(C)総移動距離(対応のないスチューデントのt検定、t30 = 1.467、 P > 0.05、n = 1グループあたり16匹のマウス)。(D)高架プラス迷路テストの代表的な軌道。(E) 両手を広げて過ごした時間 (対応のないスチューデントの t 検定、t30 = 2.786、**P < 0.01; n = 16 匹のマウス/群)。エラーバーはSEMを表します。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

補足ファイル1:ショ糖選好検定の分散検定の正規性と均質性。SPSSを使用して実施されたShapiro-Wilk検定(表A)とLeveneの検定(表B)の結果により、データが対応のないスチューデントのt検定に必要な仮定を満たしていることが確認されました。結果は、データが正規分布し、分散の均一性を示したことを示しており、パラメトリック検定の使用を検証しています。 このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。

補足ファイル2:ショ糖選好試験のサンプルサイズ推定。(A)サンプルサイズは、オンラインサンプルサイズ計算機(https://www.trialstats.com/statbox/index.htm/samplesize/estimation?sid=4)を使用して計算しました。(B)実験データに基づいて、グループごとに最低15匹のマウスが適切な統計的検出力を達成すると推定されました。 このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。

著者は、競合する利益を宣言しません。