方法論記事

実験用マウスからの牛乳サンプリングのための効率的な一人用手法

DOI：

10.3791/67669

⸱

2025年3月28日

 , 
1Department of Nutritional Sciences, Rutgers -The State University of New Jersey, 2Rutgers Center for Lipid Research, Rutgers -The State University of New Jersey

この記事について

サマリー

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

この記事では、実験用マウスからミルクを収集するために使用できるデバイスを組み立てる方法について説明します。このデバイスは手頃な価格で持ち運び可能で、訓練を受けた1人で0.1〜0.5mLの牛乳を採取できます。詳細な搾乳プロトコルも含まれています。

要約

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

げっ歯類モデルは、20世紀初頭から生物学で基本的な生理学と生化学的メカニズムを研究するために広く使用されてきました。授乳期および新生児の発達研究では、ミルクの組成と、実験的操作によってミルクがどのように影響を受けるかを決定するために、ミルクをサンプリングする必要があります。小さなげっ歯類から十分な量の生体液を収集することは難しい場合があります。いくつかの研究では、マウスからミルクを得るためのさまざまな技術が実証されています。ただし、これらの手法には、多くの場合、少なくとも2人の訓練を受けた人員が必要であり、場合によっては困難になる可能性があります。

ここでは、2009年に発表された方法に基づいて、修正された牛乳サンプリング技術を示します。この手頃な価格で組み立てが簡単な方法により、1人の訓練を受けた人が、麻酔下のダムから0.1〜0.5mLの牛乳を10分以内に日常的に得ることができます。この方法により、分娩後2日目(PD2)と分娩後10日(PD10)に十分な量の母乳を採取した。牛乳の主要栄養素成分を測定し、既存の文献と比較して、収集方法を検証しました。

PD2では、乳タンパク質は平均70.1 ± 5.2 g/L、乳脂肪は174.4 ± 7.1 g/L、乳糖は12.3 ± 0.6 g/Lであった。PD10では、乳糖とタンパク質はPD2と同程度の濃度にとどまりましたが、乳脂肪は有意に高かった(224.4 ± 17.1 g / L)。また、個々の乳タンパク質の相対的な存在量はPD2とPD10の間で異なることも観察しました。具体的には、αS1-カゼインとホエイ酸性タンパク質は高かったが、PD10ではPD2と比較してβ-カゼインが低かった。全体として、私たちは、一般的に使用される実験装置で簡単に組み立てることができるデバイスを使用して、マウスからのミルクサンプリングのための効率的な一人用技術を示しています。

概要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

比較医学とは、人間と他の動物が解剖学と生理学において類似点を共有しているという考えを指します。したがって、1つの種から学習した情報は、他の種1,2の同様の経路を研究するために使用できます。20世紀初頭以来、げっ歯類、特にマウスとラットは、疾患モデルの開発のための比較的容易な遺伝子操作のために生物医学研究で広く使用されてきました1,2。さらに、それらは比較的小さいです。したがって、コロニーを維持するために必要な資源は、他の非げっ歯類の哺乳類モデルと比較して少ない2。しかし、その小さな体型には課題も伴います。特定の手順は、マウスでは簡単には実行できません。例えば、動静脈差法はラット3,4,5で実行できますが、マウスでは小さな血管が簡単に破裂する可能性があるため、6,7では困難な場合があります。マウスからサンプリングできる組織の量も限られています。例えば、授乳中のマウスでは、内臓脂肪組織のサイズが8,9、場合によってはほとんど検出できない量まで大幅に減少します。さらに、マウスからの生体液のサンプリングも量が限られています。技術によっては、サンプリングされる血液の量が異なる場合がありますが、常に多少制限されており7、実行できる分析の数が制限されています。

授乳期および新生児の発達研究では、組成と乳量を評価するために牛乳をサンプリングする必要があります。マウスで行われた研究では、乳量が限られているため、サンプルはしばしばいくつかのダムからプールされ、適切な量が得られます10。多くの研究は、単一のマウス11,12,13から十分な分析量の牛乳を収集するための技術を示しています。しかし、これらの方法には、通常、2人の訓練を受けた人員が必要であり11,12、12:1つは手動でミルクを搾り出しながら動物を保持し、もう1つはピペットでミルクを収集する。または、実験室ではすぐに入手できない機器やツールが必要です。ここでは、DePeters と Hovey14 によって考案された手法の修正を示します。この手順で使用するデバイスは、実験室で利用可能な機器で簡単に組み立てたり、一般的なベンダーから簡単に購入したりできます。このデバイスを使用すると、1人の人間が10分以内に0.1〜0.5 mLのマウスミルクを日常的に入手でき、ほとんどの分析に使用できます。分娩後2日目(PD2、初期授乳期)と分娩後10日目(PD10、授乳期のピーク時)に牛乳を採取し、牛乳の主要栄養素を測定して方法を検証しました。

プロトコル

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

すべての動物の世話と実験の手順は連邦政府のガイドラインに従い、ラトガース大学の施設動物管理および使用委員会から承認を受けました。雌マウス(C57BL/6背景)を8週齢で交配した。彼らは標準的なブリーダーのチャウ を自由に 与えられ、定期的な12:12時間の明暗サイクルの下で保たれました。配達日は配達後1日目(PD1)としてカウントされました。PD2(授乳期初期)およびPD10(授乳期ピーク)では、以下に述べる方法で牛乳を採取した。

1. 搾乳装置の組み立て

  1. 5/32インチの内径(ID)ポリ塩化ビニル(PVC)チューブの一端を真空ポンプに取り付け、テープを使用してアタッチメントを固定します(図1Aのラベル付き)。
    注:真空ポンプは、実験室で利用可能な任意の適切なポンプまたは中央真空(「ハウスバキューム」と呼ばれることもあります)で置き換えることができます。
  2. 5/32 " ID PVCチューブのもう一方の端を1/8 " ID PVCチューブにバーブストレートコネクタを介して取り付けます。
  3. 1/8 '' ID PVCチューブのもう一方の端を、コネクタ(図1Aのbとラベル付け)を介して18G皮下注射針に取り付けます。
  4. P200ピペットチップの端を~0.2cmカットして、大きな開口部を作ります。P200ピペットの先端をセプタムストッパーの開口部に挿入して、先端が上を向くようにします(図1B)。
    注:動物間でピペットチップを交換してください。
  5. セプタムストッパーを滅菌収集チューブに取り付けます。18Gの皮下注射針で中隔ストッパーに穴を開けます。
  6. 真空ポンプをオンにし、指(実験用手袋で覆われている)をピペットの先端開口部に当てて、吸引圧力を確認します。
    注意: 正しく組み立てられていれば、穏やかな吸引を感じるはずです。収集チューブ、18 G皮下注射針、およびP200ピペットチップは滅菌する必要があります。

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図 1: 搾乳装置。 (A)18 G の皮下注射針に PVC チューブを介して真空ポンプが取り付けられた搾乳装置。針は、微量遠心分離機の収集チューブに取り付けられたセプタムストッパーを通過します。乳頭から母乳を吸うために使用される逆さのP-200ピペットチップは、セプタムストッパーの開口部から挿入されます。(B)搾乳装置の断面図。(C)記載された方法を使用して搾乳されているダム。(D)授乳期のピーク時に母牛から採取した代表的なアリコート(0.3mL)の牛乳。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

2.子犬からのダムの分離

  1. 搾乳の日には、母犬を子犬から分離して、腺に母乳が蓄積できるようにします。
  2. 巣の中で子犬を暖かく保ちます。
  3. 授乳初期に牛乳を採取する場合は、2時間の分離を行ってください(例:この研究ではPD2)。
  4. 授乳のピーク時に母乳を採取する場合は、30〜45分間の分離を行ってください(例:この研究ではPD10)。

3.ダムの麻酔

  1. ダムを搾乳する準備ができたら、ケタミン/キシラジン溶液(腹腔内、I.P.)を腹腔の片側、乳頭の4番目 と5番目の ペアの間の注射します。.
    注:投与される麻酔薬の量は、ダムの重量(ラトガース大学IACUCプロトコルによると、80〜100 mg / kgケタミン、5〜12 mg / kgキシラジン)によって計算されます。この用量はマウスを45〜60分間鎮静させ、ミルクの収集に十分な時間を提供します。
  2. 足をしっかりと握り、傷つけずに麻酔を確認し、動物の感覚と痛みの知覚をテストします。適切な麻酔は、いかなる種類の動きも示さないことによって示されます。
  3. 麻酔下での乾燥を防ぐために、獣医用眼科用軟膏をダムの目に塗布します。.

4.ミルクコレクション

  1. 麻酔をかけたダムを彼女の背中にしっかりとした作業面に置きます。搾乳前に、滅菌アルコール調製ワイプで乳房部分を優しく拭き、その部分をきれいにします。
  2. 注射を受けていない腹腔の側面にある乳頭の4番目 と5番目の ペアの間に1〜2単位のオキシトシン(i.p.)を投与します。.
    注:オキシトシンは、すぐに吸収され、半減期が短い小分子です14,15。搾乳は注射後1分以内に開始する必要があります。
  3. 利き手ではない手で彼女の首の部分をそっと首筋にすることで、ダムを保持します。
  4. 乳腺組織の基部から乳頭の先端まで、乳のビーズが見えるまで乳腺組織を絞って、乳頭から手動で搾乳します。
  5. 電源ボタンのスイッチを入れて、バキュームデバイスの電源を入れます。
  6. 搾乳を開始するには、倒立した P200 ピペットチップを乳頭にそっと取り付けます。優しく引っ張る動作を使用して、ミルクを引き抜きます(図1C)。
  7. 十分な量のミルクが集まるまで、すべての乳頭で手順4.4〜4.6を繰り返します。
    注意:搾乳中、牛乳が誤って真空ラインの18 G皮下注射針またはPVCチューブに引き込まれることがあります。これは、次の乳牛を搾乳する前に針またはPVCチューブを交換することで簡単に改善できます。

5. 採乳後のダムの回復

  1. 麻酔をかけたダムを子犬と一緒にケージに戻し、暖かく保ちます。彼女が意識を取り戻すまで動物を監視してください。
    注:母犬は、子犬に戻る前に別のケージで一人で目を覚ますことが許されている場合、再び授乳を拒否する可能性があります。これは、授乳初期(PD2)に母乳採取が行われる場合によく見られます。
  2. 彼女が目を覚まし始めたときに完全に回復するために、ダムを彼女の子犬から遠ざけます。これは正常な動作です。
    注:母犬は定期的に子犬に戻り、数時間後には完全に授乳に戻るのを観察しています。

6. 牛乳分析

  1. 市販の乳糖アッセイキット( 材料の表を参照)を使用して、牛乳の乳糖を測定します。牛乳を滅菌水で75倍に希釈し、キットのプロトコルに従ってアッセイを行います。
  2. 他の出版物で示されているクリーマトクリット法を使用して乳脂肪を測定します16,17。
  3. ウシ血清アルブミンを標準19としてBradfordタンパク質アッセイ18を実施することにより、乳タンパク質を推定します。アッセイを行う前に、牛乳を 4,000 × g で 4 °C で 15 分間遠心分離します。 ピペッティングでインフラナクトを抽出し、アッセイの前に滅菌水で1:10に希釈します。
  4. ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)を行います。プレキャストされた4%–12% Bis-Trisゲル上で10 μgのタンパク質を、製造元の指示に従って分離します。タンパク質をポリフッ化ビニリデン(PVDF)メンブレンに移し、Coomassie Blue R-250で染色します。

結果

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

この手法を使用して、21日間の授乳中のさまざまな時期に十分な牛乳をサンプリングすることに成功しました。分娩日を分娩後1日目(PD1)と捉え、本研究ではPD2(早期授乳期)とPD10(授乳ピーク時)の牛乳をそれぞれn=4でサンプリングしました。各ダムから0.1〜0.5 mLの牛乳を快適に入手しました(図1D)。この方法を検証するために、これらの牛乳サンプルの総主要栄養素組成を測定し、スチューデントの t検定を使用して、授乳初期とピーク時に収集された牛乳の違いを比較しました。

乳糖濃度の平均は、PD2で12.3±0.6 g/L、PD10で12.0 ± 0.9 g/Lであることがわかりました(表1)。乳脂肪率はPD2で26.0±1.0%、PD10で33.4±2.5%でした。脂肪濃度はPD2で174.4±7.1 g/L、PD10では224.4 ± 17.1 g/Lと有意に高かった(表1)。平均タンパク質含有量は、PD2で70.1±5.2 g / L、PD10で75.1±2.6 g / Lでした(表1)。PD2とPD10の間で総乳タンパク質含有量に差はなかったが、個々の乳タンパク質の相対的な存在量は異なっていた。具体的には、αS1-カゼインとホエイ酸性タンパク質は、PD2牛乳よりもPD10牛乳の方が高かった(p < 0.05)、β-カゼイン(p < 0.05)はPD10よりもPD2に多く存在しました(図2)。

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図2:乳タンパク質分析。 (A)PD2およびPD10で採取した牛乳のクマシーブルー染色PAGE分析。タンパク質の同定は、前述した14のように行った。(B)個々のタンパク質シグナルをImageJで解析し、染色した全タンパク質に正規化しました。結果は、標準誤差バーと個々のデータポイントを点として平均として表しました。PD2およびPD10上の各タンパク質の平均存在量を、両側のスチューデント t検定を用いて比較した。*p < 0.05、n = 4。略語:PAGE =ポリアクリルアミドゲル電気泳動;PDn = 配信後 n この 図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

平均SEMのp値
乳糖
(g/L)		PD2の12.30.60.75
PD10の12.00.9
脂肪
(g/L)		PD2の174.47.10.04
PD10の224.417.1
蛋白質
(g/L)		PD2の70.15.20.42
PD10の75.12.6

表1:PD2およびPD10で収集された牛乳の主要栄養素組成。 平均の平均誤差と標準誤差(SEM)として表される結果を分析して、両側のスチューデント のt検定n = 4を使用して、授乳日がミルク組成に及ぼす影響を調べました。

ディスカッション

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

私たちは、組み立てが簡単で持ち運び可能な装置を使用して、1人で実行できる改良型搾乳技術を実証しました。伝統的に、げっ歯類のミルクは、毛細管10、17、ガラスパスツールピペット12、またはマイクロピペット11を使用して収集されます。これらの方法では、1人がダムを拘束して手動で搾乳し、もう1人がミルクを採取する必要があります。これは、特に週末や休日に牛乳のサンプリングが行われる場合、困難な場合があります。これらの方法で採取した牛乳は、滅菌保存チューブに移さなければなりません。げっ歯類のミルクは脂肪が比較的多く(ここや他の研究で示されているように20,21)、したがって粘性があるため、ミルクを移すプロセスはミルクの量の損失をもたらす可能性が高く、分析の量が制限されます。ここで説明するデバイスは、実験室で入手可能なツールを使用して5分以内に組み立てることができます。1人で簡単に使用でき、10分以内に十分な量の牛乳をサンプリングできます。この方法に関連する連続的で穏やかな吸引アプローチは、ミルクが常に収集チューブに直接引っ張られるため、移送によるサンプル損失の問題を軽減します。PD2 の早い段階で牛乳を採取する場合は、サンプル損失を最小限に抑えることが特に重要です10.さらに、同じデバイスとプロトコルを使用して、別のマウス系統(FVB/Nバックグラウンド)からミルクを成功裏に収集したことから、この方法はマウス系統間でも同様に機能する可能性が高いことが示唆されています。

この研究では、授乳の段階によって分離の時間が異なる可能性があることも観察しました。以前の研究では、十分なミルク量を得るためには、母犬をミルク収集の少なくとも2時間前から最大16時間まで子犬から分離する必要があると報告されています11,13。この方法を採用した場合、授乳初期(PD2)に2時間、授乳ピーク時(PD10)にわずか30〜45分間、母犬を子犬から分離するだけで、十分な量の母乳を得るのに十分であることがわかりました。ダムが麻酔から回復するまでにはさらに時間がかかるため、分離の期間を最小限に抑えると、サンプリング時間が短縮されるだけでなく、ダムとその子犬に与える可能性のある影響も軽減されます。

さらに、PD2という早い時期にミルクを採取すると、母犬の分離と回復までの時間が長いため、その後の子犬の成長に悪影響を及ぼし、給餌が不十分な期間につながる可能性があることがわかった。これは、授乳期のピーク時 (PD10) に牛乳をサンプリングしたときには観察されませんでした。したがって、研究者が 21 日間の授乳期間中のさまざまな時点でミルクをサンプリングすることに関心がある場合は、別の一連のダムから早期授乳ミルクをサンプリングすることをお勧めします。ただし、母乳の収集は、縦断的研究のために、授乳のピーク時と後期に同じダムで複数回実行できます。

あるいは、研究者はダムの回復時間を最小限に抑えるために他の麻酔薬を選択することもできます。例えば、イソフルラン吸入は、動物が通常、イソフルラン22の中止時に迅速に回復するので、回復時間を短縮するのに役立つかもしれない。この麻酔の選択は多くの人によって行われていますが 13,23、イソフルランの吸入は収集された牛乳の量に悪影響を与える可能性があると報告されています13。さらに、イソフルラン吸入には、投与量の正確な制御を確実にするための適切な装置が必要です。ケタミン/キシラジンやイソフルランなどの麻酔薬が授乳期や母乳組成に及ぼす影響、およびそれらの母乳への移行の可能性に関する研究は限られています24,25,26。したがって、異なる麻酔の選択肢を使用して研究を比較する際には、データの解釈を慎重に行うことをお勧めします。別の選択肢は、他の研究者14,27,28,29によって説明されているように、麻酔なしでミルクをサンプリングすることです。ただし、この手順はダムに過度のストレスを与える可能性があり、動物を拘束するために追加の人が必要になる可能性があります。

また、この研究では、牛乳サンプルを使用して主要栄養素アッセイを行うことができ、余剰分はオミクス解析などのさらなる手順のために残ることが示されました。乳糖、タンパク質、および脂肪のレベルを測定し、公表されたデータと比較して、記載された方法を検証しました。牛乳の乳糖濃度は牛乳成分の~1.2%を占めており、これは他の研究で報告されている対照食のマウスの濃度と似ています30,31,32。マウスミルクは、以前に報告されたように、26%から33%の範囲の脂肪の割合が高いことが確認されました20,30。ここで報告された総タンパク質濃度は、Chenらによって報告されたものと類似していました.30.30 他の研究で報告されたものよりも低かった31,32。授乳初期からピーク時までの変化については、乳糖とタンパク質のレベルは比較的一定であることがわかりましたが、乳脂肪率は泌乳初期からピークまで増加しています。これはRagueneau32と一致しませんが、不一致はサンプルサイズの違いによるものかもしれません。授乳初期とピーク時の全タンパク質濃度はほぼ同じでしたが、個々のタンパク質量(αS1-カゼイン、β-カゼイン、ホエイ酸性タンパク質)は変動しており、これはおそらく異なる発達段階における新生児のニーズの変化を反映していることがわかりました。

この手法では牛乳生産量の定量化はできませんが、これは1947年にFalconerによって提案されたパフォーマンス指数(IOP)を使用して計算できます33。牛乳の生産量は、同腹児の数とサンプリングの日に大きく依存します。この指標は、同腹児数の違いを考慮した牛乳生産量の測定値として使用できます。たとえば、PD10(ミルクサンプリングのためにダムが分離されている場合)で全リターを計量できます。次に、ダムのIOPは、そのダムの同腹児の重量をPD10の同じサイズの同腹児の平均重量で割ることによって計算されます。結論として、比較的安価で容易に入手できる装置を用いて、実験用マウスからのミルクサンプリングのための効率的な一人用技術を実証する。この手法により、ほとんどの分析で十分な量の牛乳を一貫して収集できます。

開示事項

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

著者には、開示すべき利益相反はありません。

謝辞

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

この研究は、NJAES Hatch Project 14190 と NIH R21HD 108496 の支援を受けました。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
1 mL極低温バイアルコーニング430658早期のミルクコレクションに適しています
1 mLシリンジExel26048
2 mL 微量遠心分離機収集チューブフィッシャーサイエンティフィック02-681-344ピークおよびレイトミルクコレクションに適しています
18 G 皮下注射針BD PrecisionGlide305195
27 G 皮下注射針BDPrecisionGlide305109
アルコール調製ワイプHoneywell154818
Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent ConcentrateBio-Rad5000006
Bovine Serum AlbuminSigma-AldrichA2153
Immobilon -P PVDF MembraneImmobilonIPVH00010
KetamineDechra1000001250Veternarian Officeから購入 
実験室のラベルテープVWRインターナショナル89097
乳糖アッセイキットシグマ-アルドリッチMAK487
ミニ有刺鉄線ポリプロピレン継手コールパーマー機器会社6365-90
マウスダイエットラボダイエット5015
NuPAGEビストリスミニタンパク質ゲル、4–12%InvitrogenNP0335BOX
Optixcare Eye LubeAventixN/A医事務所から購入 
オキシトシンビメダ1OXY015医事務所から購入 
P200ピペットチップギルソンF1733001
PVCチューブ:1/8 '' IDVWRインターナショナルMFLX07407-75 
PVCチューブ:5/32 '' IDVWRインターナショナルMFLX07407-77
セプタムストッパーケムグラスライフサイエンスCG-3022-91
真空ポンプドラモンドサイエンティフィック株式会社P-103635
XylazineAkorn Animal HealthNDC 59399-110-20獣医事務所経由で購入 
獣獣

参考文献

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ericsson, A. C., Crim, M. J., Franklin, C. L. A brief history of animal modeling. Mo Med. 110 (3), 201-205 (2013).
  2. Bryda, E. C. The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Mo Med. 110 (3), 207-211 (2013).
  3. Watford, M., Erbelding, E. J., Smith, E. M. Glutamine metabolism in rat small intestine: Response to lactation. Biochem Soc Trans. 14 (6), 1058-1059 (1986).
  4. Robinson, A. M., Williamson, D. H. Comparison of glucose metabolism in the lactating mammary gland of the rat in vivo and in vitro. Effects of starvation, prolactin or insulin deficiency. Biochem J. 164 (1), 153-159 (1977).
  5. Kowalski, T. J., Wu, G., Watford, M. Rat adipose tissue amino acid metabolism in vivo as assessed by microdialysis and arteriovenous techniques. Am J Physiol. 273 (3 Pt 1), E613-E622 (1997).
  6. Ashcroft, S. P., et al. Protocol to assess arteriovenous differences across the liver and hindlimb muscles in mice following treadmill exercise. STAR Protoc. 4 (1), 101985(2023).
  7. Hallemeesch, M. M., Ten Have, G. A., Deutz, N. E. Metabolic flux measurements across portal drained viscera, liver, kidney and hindquarter in mice. Lab Animal. 35 (1), 101-110 (2001).
  8. Le, H., Nguyen, M., Manso, H. E. C., Wang, M. D., Watford, M. Adipocytes are the only site of glutamine synthetase expression within the lactating mouse mammary gland. Curr Dev Nutr. 8 (6), 102168(2024).
  9. Giordano, A., Smorlesi, A., Frontini, A., Barbatelli, G., Cinti, S. White, brown and pink adipocytes: The extraordinary plasticity of the adipose organ. Eur J Endocrinol. 170 (5), R159-R171 (2014).
  10. Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. Milk yield and composition in mice: Effects of litter size and lactation number. Comp Biochem Physiol A Comp Physiol. 84 (1), 127-133 (1986).
  11. Willingham, K., et al. Milk collection methods for mice and reeves' muntjac deer. J Vis Exp. (89), e51007(2014).
  12. Muranishi, Y., et al. Method for collecting mouse milk without exogenous oxytocin stimulation. Biotechniques. 60 (1), 47-49 (2016).
  13. Gómez-Gallego, C., et al. A method to collect high volumes of milk from mice (mus musculus). Anales de Veterinaria de Murcia. 29, 55-61 (2014).
  14. DePeters, E. J., Hovey, R. C. Methods for collecting milk from mice. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).
  15. Oxytocin- oxytocin injection. , https://dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/fda/fdaDrugXsl.cfm?setid=a9b62187-4141-487c-a9da-f42ad7f9b408&type=display (2019).
  16. Lucas, A., Gibbs, J. A., Lyster, R. L., Baum, J. D. Creamatocrit: Simple clinical technique for estimating fat concentration and energy value of human milk. Br Med J. 1 (6119), 1018-1020 (1978).
  17. Paul, H. A., Hallam, M. C., Reimer, R. A. Milk collection in the rat using capillary tubes and estimation of milk fat content by creamatocrit. J Vis Exp. (106), e53476(2015).
  18. Ernst, O., Zor, T. Linearization of the Bradford protein assay. J Vis Exp. (38), e1918(1918).
  19. Hueso, D., Fontecha, J., Gomez-Cortes, P. Comparative study of the most commonly used methods for total protein determination in milk of different species and their ultrafiltration products. Front Nutr. 9, 925565(2022).
  20. Anderson, S. M., Rudolph, M. C., Mcmanaman, J. L., Neville, M. C. Key stages in mammary gland development. Secretory activation in the mammary gland: It's not just about milk protein synthesis. Breast Cancer Res. 9 (1), 204(2007).
  21. Meier, H., Hoag, W. G., Mcburney, J. J. Chemical characterization of inbred-strain mouse milk. I. Gross composition and amino acid analysis. J Nutr. 85 (3), 305-308 (1965).
  22. Hohlbaum, K., et al. Severity classification of repeated isoflurane anesthesia in c57bl/6jrj mice-assessing the degree of distress. PLoS One. 12 (6), e0179588(2017).
  23. Weaver, S. R., et al. Serotonin deficiency rescues lactation on day 1 in mice fed a high fat diet. PLoS One. 11 (9), e0162432(2016).
  24. Statement on resuming breastfeeding after anesthesia. , Committee on Obstetric Anesthesia. https://www.asahq.org/standards-and-practice-parameters/statement-on-resuming-breastfeeding-after-anesthesia (2009).
  25. Lee, J. J., Rubin, A. P. Breast feeding and anaesthesia. Anaesthesia. 48 (7), 616-625 (1993).
  26. Reece-Stremtan, S., Campos, M., Kokajko, L. Academy of Breastfeeding, M. Abm clinical protocol #15: Analgesia and anesthesia for the breastfeeding mother, revised 2017. Breastfeed Med. 12 (9), 500-506 (2017).
  27. Oosting, A., Verkade, H. J., Kegler, D., Van De Heijning, B. J., Van Der Beek, E. M. Rapid and selective manipulation of milk fatty acid composition in mice through the maternal diet during lactation. J Nutr Sci. 4, e19(2015).
  28. Silverman, J., Stone, D. W., Powers, J. D. The lipid composition of milk from mice fed high or low fat diets. Lab Animal. 26 (2), 127-131 (1992).
  29. Rodgers, C. T. Practical aspects of milk collection in the rat. Lab Animal. 29 (4), 450-455 (1995).
  30. Chen, Y., et al. Effect of high-fat diet on secreted milk transcriptome in midlactation mice. Physiol Genomics. 49 (12), 747-762 (2017).
  31. Kucia, M., et al. High-protein diet during gestation and lactation affects mammary gland mrna abundance, milk composition and pre-weaning litter growth in mice. Animal. 5 (2), 268-277 (2011).
  32. Ragueneau, S. Early development in mice. Iv: Quantity and gross composition of milk in five inbred strains. Physiol Behav. 40 (4), 431-435 (1987).
  33. Falconer, D. S. Milk production in mice. J Agric Sci. 37 (3), 224-235 (1947).

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