この研究では、マウスで歯周炎を誘発するための修正された6-0ナイロンライゲーション法について説明しており、再現性が高く、研究者が歯周病の発生から病理学的結果までを研究するための代替手段を表しています。
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この研究では、マウスで歯周炎を誘発するための修正された6-0ナイロンライゲーション法について説明しており、再現性が高く、研究者が歯周病の発生から病理学的結果までを研究するための代替手段を表しています。
歯周病(PD)は、歯の支持組織に影響を与える炎症性疾患であり、世界中で最も蔓延している疾患の1つです。その重症型である歯周炎は、軟部組織、歯、骨の破壊につながります。歯周炎の動物モデルは、霊長類、イヌ、ミニブタ、マウスを用いて開発されています。これらの中で、結紮糸誘導マウスモデルは、ヒト歯周炎の主要な側面を効果的に再現しながら、疾患の急速な進行、再現性、予測可能性、低コストなどの利点を提供します。合字を用いたマウスモデルは、歯周組織の微生物学的および免疫学的微小環境に関する貴重な洞察を提供し、免疫応答におけるバイオフィルムの重要な役割と全身性疾患との関連を強調しています。この研究では、マウスの歯周炎を誘発するための修正ナイロンライゲーション法を紹介します。この変更には、シルク縫合糸の代わりにナイロン縫合糸を使用し、接触点を通過させるのではなく、近位間接触領域の下に配置することが含まれます。このアプローチは、歯周炎を効果的に誘発しながら、技術を簡素化します。縫合糸留置の詳細な方法論がグラフィカルに示されており、歯周炎の進行は組織学的および組織測定学的分析を通じて示されています。
歯周病(PD)は、歯の支持組織の炎症性疾患であり、世界で最も蔓延している疾患の1つです1。PDの発生率は、世界中で20%〜50%の範囲であると報告されています2。PDにはさまざまな進行の程度があります。歯肉炎と呼ばれる軽度の形態は軟組織のみに影響を及ぼし、歯周炎(PT)と呼ばれるその重度の形態は骨3などの硬組織に影響を及ぼします。PTは炎症性疾患であるため、糖尿病5、心血管疾患6、有害な妊娠結果7や子癇前症などのホルモン相互作用8、炎症性疾患9、さらには眼の変化10や認知症11など、疾患のプロセス4を変える可能性のあるいくつかの危険因子によって修飾できる複雑な免疫応答と見なさなければなりません。
したがって、PTの発症または有病率に関連する病因を理解し、新しいまたはより効果的な治療戦略をテストするため、または全身性疾患とPTまたは歯周微生物叢との間の相関関係を特定するには、動物モデルが必要です12。
効果的な研究方法を選択することは、PTの発症を理解し、研究の質問に適切に答えるために重要です13。長年にわたり、PTの研究のためにさまざまな動物モデルが開発されてきました。ただし、霊長類、犬、ウサギ、ミニチュアブタなどのモデルは、14,15,16を使用するのに高価で複雑です。PTのマウスモデル、特にライゲーション誘導PTモデルには、迅速な開発、再現性、予測可能性、低コストなど、多くの利点があります17,18,19。
PTの誘導には、経口細菌接種、リポ多糖類注射、結紮糸誘導10,20など、いくつかの方法が用いられているが、それぞれに長所と短所がある17、ナイロン結紮糸によって誘導されたPTのマウスモデルは、その開発のためのヒトのメカニズムに類似していた20,21,22,23.PTは、常在する微生物叢の保持を通じて発生し、炎症を引き起こし、組織の喪失につながります。さらに、マウスは、PTの研究のために異なる細胞集団または目的の分子を研究するために遺伝子組み換えすることができます。
歯科用結紮は、歯列矯正用ワイヤー、シルク縫合糸24、25、またはナイロン縫合糸26などの異なる材料を使用して行うことができる。マウスのライゲーションによってPTを誘導するための最も一般的な材料は絹です。この方法論は、Marchesan et al.18、Abe et al.27、Chadwick et al.22など、それぞれ独自の変更を加えたさまざまな著者によって説明されており、これらの方法はすべて、いくつかの研究者によって成功裏に使用されてきました28。ただし、マウスの上臼歯の周りに絹糸を縫合するのは複雑になる可能性があります。Marchesan et al. は、「結紮ホルダー」の使用を提案しました。Abe et al. と Chadwick et al. は、縫合糸を接触点に通して配置しましたが、Chadwick et al. は大臼歯 M1 と M2 の周りに縫合糸を配置しました。
異なる厚さのナイロン縫合糸は、異なる動物モデル29,30,31のPT開発に使用されてきた。Lima et al.31 は 5-0 ナイロン縫合糸を使用しました。以前の研究では、6-0 ナイロン縫合糸を使用し、同様の結果が得られました 28。
マルチフィラメント縫合糸と比較して、ナイロン縫合糸は非吸収性のモノフィラメント合成であり、炎症性組織反応が低い32;さらに、ナイロン縫合糸はまた、微生物の蓄積33,34を許容し、フソバクテリウム核とポルフィロモナ中間体35,36の接着の証拠があり、ナイロン縫合糸12,14,17,19,24,27,35,37の通性嫌気性細菌も付着している (表1)。
これらの特性により、炎症反応は主に物質の蓄積ではなく細菌の蓄積に集中することができるかもしれません。さらに、ナイロンはシルク38よりも引張強度などの機械的特性が優れています。
そこで、本研究では、M2付近の歯間接触領域の下に6-0ナイロン縫合糸を配置したことで、マウスに進行期の歯周炎の発症を誘発した。このアプローチにより、通常のピンセットで結紮糸を配置でき、結果は一貫しています。30日後、PTの進行は組織学的および組織学的分析によって確認することができます。
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実験動物に関するすべての手続きは、メキシコの公式規格NOM-062-ZOO-1999に準じた「実験動物に関する生物医学研究のための倫理的枠組み」に厳格に準拠して実施されました。この研究は、プロトコル CE/FESI/072024/1765 に基づいて、Facultad de Estudios Superiores Iztacala (FES-Iztacala) の倫理委員会によって承認されました。マウスは、FES-Iztacala動物施設の病原体のない環境で、餌と水に自由にアクセスできる動物室に収容されました。このプロトコルは、Abeら27によって以前に記載された方法の修正である。6週齢から8週齢の雌BALB/cマウス(体重16g)を対照群(CTL)群と歯周炎群(PT)に分けた。歯周炎は、0日目に6-0ナイロン縫合糸を留置することで誘発され、持続的な細菌の付着を促進し、重篤な慢性疾患の進行を引き起こしました。30日後、すべてのマウスを安楽死させ(施設で承認されたプロトコルに従って)、組織学的分析を通じて組織の損傷と付着喪失(AL)を評価しました(図1)。使用した試薬や機器の詳細は 、資料表に記載されています。
1.麻酔の準備
2.動物のポジショニング
3. 合字の配置
4. 動物の回復
5. 合字チェック
6.組織学
7. データ分析
8. 統計分析
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この方法論により、誘導マウスは2週目以降に歯周炎(PT)を発症することができます。マウスを毎週監視して、結紮糸の存在を確認しました。安楽死は30日目に行われました。すべてのグループの臨床的特徴が評価されました。対照群は、色や辺縁歯肉の構造などの正常な特性を経時的に維持しました。CTL群と比較して、PT群の組織には炎症、出血、歯周ポケット形成が認められ、これらは誘導マウスの歯肉縁部に認められました(図5)。
この疾患の進行は、両群のM2の歯周組織のALの組織学的および組織測定学的分析を行うことによって確認されました。CTLグループは、健康な組織と類似した組織学的特徴を示しました:辺縁および溝歯肉の上皮、歯肉線維(図6A、CTL青矢印)、接合部上皮、および歯槽稜(図6A、CTL緑矢印)。結合組織繊維は正常な位置と高さにありました。シャーピーの繊維は、歯槽骨と根セメント質に挿入されたときに無傷でした。また、根の...
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歯周炎のいくつかの動物モデルは、微生物学的応答や免疫応答などのさまざまな側面を評価するために使用されており、ヒトの疾患といくつかの類似点があります43。これらの知見は、バイオフィルムの役割、免疫応答、全身疾患との相互作用など、歯周病の枠組みの証拠を提供する44,45。
歯周炎の動物モデルには、さまざまな複雑さと類似点があります。例えば、ヒト以外の霊長類、イヌ、またはミニブタは、ヒトの歯周病に最も類似している19が、それらを取り扱い維持するための費用と必要条件がこれらのモデルを非現実的にしている。さらに、歯周炎のマウスモデルは安価で扱いやすいです。さらに、マウスは、目的の特定の分子または細胞を生成するために遺伝子改変することができ46、その方法論は十分に確立さ...
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著者らは、この論文の出版に関して利益相反がないことを宣言します。
この研究は、メキシコ科学技術評議会(COMECYT)の助成金番号[FICDTEM-2021-072]および研究プロジェクトと技術革新のための支援プログラム(PAPIIT)-UNAM、助成金番号[IN-217021]によって部分的に資金提供されました。このビデオの制作に役立った施設については、Endoperiodontología、FES Iztacala、UNAMの専門プログラム、およびこのビデオの制作に協力してくれたRosalba Yañez Ortiz(DDS)に感謝します。一部のフィギュアはBiorenderプログラム(契約番号ME282NWCI1)で作成されました。
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| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 0.9%NaCl溶液 | PiSA | リンス上顎 | |
| 6-0ナイロン縫合糸 | Atramat、Internacional Farmacéutica | PE1946-N | リガチャ配置 |
| Amscope 3.7 デジタル カメラ用 | Amscope | x64、4.11.21973.20230107 | 収集 |
| EDTAソリューション | シグマ–アルドリッチ | E5134 | 灰 |
| 細かいはさみ | ジェネリック | 6-0ナイロン縫合糸を切るには | |
| 細かい組織鉗子 | ジェネリック | 6-0ナイロン縫合糸 | |
| ガーゼパッド | ジェネリック | 体温を維持するには | |
| GraphPadプリズム | GraphPadプリズム | バージョン8.3.0 | データ分析 |
| ヒプロメロース | ジェネリック | 眼潤滑剤注射 | |
| 水 | サ | 酔液の希釈 | |
| タミン | 麻酔、ピサ | 酔 | |
| 心分離管 | Cellpro | 801501 | 脱灰中に組織を封じ込める |
| マイクロポア | 3M | 1533 | の顕 |
| 微鏡デジタルカメラ | Amscope を | MU1603 | 学 |
| マイクロチューブ | Axygen | MCT-150-C | 麻酔薬希釈を保存 |
| 光学顕微鏡 | UNICO | Serie G380 | 組織学 |
| 口腔用弾性剤 | TP Orthodintics, Inc | 青鼻 | を開いたままにしておくには |
| パラホルムアルデヒド溶液シ | グマ–アルドリッチ | 158127 | 組織固定 |
| パラプラスト | ライカ | 39601006 | 組織学 |
| 手術用顕微鏡 | Carl Zeiss GmbH ベルリン | 6-0 ナイロン縫合糸 | |
| 超微細インスリン注射器 6mm U-100、0.3 mL | BD | 326385 | 酔液を注入する |
| ユニバーサル輪ゴム | 汎用 | 鼻を開いたままにしておくには | |
| 作業台 | ジェネリック | マウスをサポートする木製ベース | |
| キシラジン | ポルチン、ピサ | 麻酔前 |
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