このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。

方法論記事

マウスにおける肺腺癌異種移植モデルの構築とMAPK経路によるXY煎じ薬の効率評価

588 閲覧数

⸱

DOI：

10.3791/68023

⸱

2025年4月25日

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

この記事について

サマリー

この研究は、XY煎じ薬がMAPK経路を調節することにより、肺腺癌に対して治療効果を発揮することを示しています。

要約

肺腺がんは世界中で増加しており、効果的な治療法の探索と開発が促されています。近年、XiaoYi(XY)煎じ薬などの肺腺癌に対する伝統的な漢方薬の治療可能性がますます認識されています。肺腺癌の治療における伝統的な中国医学の作用機序は解明され続けています。この研究では、動物モデルを使用して、肺腺癌の治療におけるXY煎じ薬の治療効果を調査しました。マウスのXY煎じ薬の血液中に入る化学成分を分離し、UHPLC-QE-MSを使用して正イオンモードと負イオンモードの両方で分析しました。その後、この知見を in vivo 実験で検証したところ、腫瘍サイズの縮小、病理学的変化の改善、アポトーシスの増加が実証されました。その結果、XY煎じ薬投与後に血液に吸収された15の成分が同定されました:スタチョース、ケルセチン-3-O-ベータ-グルコピラノシル-7-O-α-ラムノピラノシド;インペリアリン;スピノシンB;ペイミネ;フラボンベース+ 3O、2MeO、O-Hex;ピクロポドフィロトキシン;(2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-ジヒドロキシ-2 [[[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-ヒドロキシ-17-(2-ヒドロキシ-6-メチルヘプト-5-エン-2-イル) 4,4,8,10,14-ペンタメチル-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-ドデカヒドロ-1H シクロペンタ[a]フェナントレン-3-イル]オキシ]-6-(ヒドロキシメチル)オキサン-3-イル]オキシ-6-(ヒドロキシメチル)オキサン-3,4,5-トリオール;トリシン;ジンセノサイドRg1;(20R)-ジンセノサイドRh1;ナツメボシドB;オーキュバン;ジンセノサイドRg3;およびベータ-エレモン酸。動物実験では、XY煎じ薬が腫瘍の成長を阻害し、病理学的変化を改善し、腫瘍細胞のアポトーシスを用量依存的に促進することが実証されました。関与するメカニズムは、MAPK経路におけるp-JNKおよびp-P38タンパク質発現のアップレギュレーション、およびMAPK経路におけるp-ERKタンパク質発現のダウンレギュレーションに関連している可能性があります。結論として、XY煎じ薬はMAPK経路を調節し、肺腺癌に対して治療効果を発揮する可能性があります。

概要

肺がんの発生率は世界中で上昇しています。これは、すべての悪性腫瘍の18%を占め、がん関連の死亡のかなりの数の原因となっています1,2。非小細胞肺がん(NSCLC)は、肺がんの一般的な形態であり、腺がんが主な病理学的3型です。NSCLCはその潜行性の症状のため、進行した段階で診断されることが多く、死亡率は高い4,5。ステージIVのNSCLC患者の5年生存率はわずか5%6であるのに対し、外科的に切除可能な早期NSCLCの5年生存率はわずか50%7です。

現在、肺腺がんの治療には、手術、放射線療法、化学療法、免疫療法、標的療法などがあります。さらに、肺腺癌に対する伝統的な漢方薬(TCM)は、ますます認識され、評価されるようになっています8。TCMには長い歴史があり、さまざまな腫瘍性疾患の治療に使用され、効果的な治療結果が得られています9,10。それは人体を全体として見なしており、治療原理は、内臓の気(気は血液と体液の循環を促進し、NSCLC患者の免疫力の向上と炎症の軽減に貢献する生命エネルギーを指します)の動きを回復して、全体的なバランスを回復し、癌の進行を抑制することに焦点を当てています。

TCMは、低毒性、複数の標的、高効率11で腫瘍性疾患を治療するだけでなく、放射線療法や化学療法による損傷の修復を促進し、それによって生存期間を延ばします12。

液体クロマトグラフィー-質量分析(LC-MS)技術は、液体クロマトグラフィーと質量分析を統合して、複雑な化合物混合物中の成分の分離と検出を実現します13。LC-MS は、高分解能、高感度、高特異性を提供し、伝統的な漢方薬(TCM)煎じ薬中のさまざまな化学成分の分離と同定を可能にします。LC-MSは、経口投与後に血液中に入る活性成分を分離して検出する血清医薬品化学と組み合わせることで14,15、潜在的な薬物作用メカニズムの予測と分析が可能になります。このアプローチは、TCM煎じ薬の化学組成と薬理学的成分を理解するのに役立ち、それらの薬理学的効果と臨床応用に関する詳細な研究に不可欠なデータを提供し、TCM研究16,17に非常に適用できます。

MAPKシグナル伝達経路は、肺がんの発生、進行、転移、および浸潤において重要な役割を果たしており、Erk、p38、およびJNKは重要なサブファミリーです。TCM煎じ薬は、MAPK経路18のタンパク質の発現に影響を与えることが示されています。XiaoYi(XY)煎じ薬はYiGuan煎じ薬に由来し、長春中医薬大学第一付属病院(図1)で肺腺癌の治療に使用され、正確な臨床効果を示しています。しかし、その治療メカニズムは依然として不明です。

本研究では、超高速液体クロマトグラフィーとQ-Exactive Orbitrap質量分析法(UHPLC-QE-MS)を併用し、肺腺がんに対するXY煎じ薬の治療メカニズムを解明し、その効果を in vivo 研究を通じて検証しました。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

プロトコル

すべての動物処置は、長春伝統中国医学大学の動物倫理委員会によって承認されました(倫理第2024008号)。6週齢のC57BL/6雄マウス(20匹±2g)は、特定の病原体フリー(SPF)条件下で飼育され、一定の温度と湿度で制御された環境で典型的な身体活動パターンを示しました。彼らは食物と水に 自由 にアクセスでき、12時間の明暗サイクルの下で維持されました。この研究で使用した試薬と機器の詳細は、 材料表に記載されています。

1. XY煎じ薬水性抽出物の調製

  1. オタネニンジンC.A.メイ(レンシェン、15 g)、Chinemys reevesii(グレー)(ギバン、30 g)、Trionyx sinensis Wiegmann(Biejia、30 g)を煎じ薬ポットに入れます。1000mLの脱イオン水を加え、室温で30分間浸します。
  2. ステップ1.1の3つのハーブを1時間煮ます。同時に、 Rehmannia glutinosa Libosch(Dihuang、30 g)、 Trichosanthes kirilowii Maximを浸します。(Tianhuafen、30 g)、 Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (ローマ)Stapf(Yiyiren、20 g)、 シャクヤク乳酸花 Pall。(Baishao、30 g)、 Boswellia carterii Birdw。(Ruxiang、7 g)、 Commiphora myrrha Engl.(Moyao、7 g)、 Agrimonia pilosa Ledeb。(Xianhecao、20 g)、 Alpinia oxyphylla Miq。(Yizhiren、20 g)、 Ziziphus jujuba ミル。 スピノサ (Bunge) (Suanzaoren, 30 g), Melia toosendan Sieb.et Zucc.(Chuanlianzi、5 g)、 Fritillaria thunbergii Miq。(Zhebeimu、15 g)、 Anemarrhena asphodeloides Bge。(Zhimu、10 g)、 Platycodon grandiflorum (Jacq。(Jiegeng、10 g)、 Polygala tenuifolia Willd。(Yuanzhi、15 g)、 およびPhragmites communis Trin。(ルゲン、30g)を別の容器に入れて30分間。浸した後、手順1.1から煎じ薬ポットに移します。
  3. ステップ1.1とステップ1.2の18種類のハーブを30分間煮ます。ハーブ液を注ぎ、1000mLの脱イオン水を加え、さらに30分間煮沸します。この煮沸プロセスを3回繰り返して3つのハーブ液を取得し、それらを混ぜ合わせて完全に混合します。
  4. 混合されたハーブ液を400メッシュの布でろ過します。濾液を減圧下で濃縮し、濃縮されたハーブ液を冷却装置に移してさらに処理します。
  5. 濃縮されたハーブ液を凍結乾燥トレイに注ぎ、真空凍結乾燥機の予備冷凍チャンバーに入れます。予備凍結が完了したら、トレイを昇華乾燥チャンバーに移して水分を取り除きます。
  6. 高温で残留水分を取り除きます。凍結乾燥したハーブ抽出物を粉砕機で粉砕し、凍結乾燥した微粉末XY煎じ薬を得ます(図2)。

2. 薬剤含有血清製剤

  1. 生後 6 週間の C57BL/6 雄マウス (20 ± 2 g) を XiaoYi (XY) グループまたは対照グループのいずれかに無作為に割り当てます。
    注:マウスの投与量は、ヒトからマウスへの変換係数を使用して計算されました。
    マウスの等価実験線量 (g/kg) = {ヒト線量 (g/kg) / 体重 (70 kg)} x 9.1
    この計算に基づき、マウスの投与量は2.6g/kgと決定されました。
  2. 凍結乾燥XY煎じ薬粉末0.9152gを秤量し、蒸留水3.2mLに溶解して薬液を調製します。
    注:マウスは経口投与前に12時間絶食しました。.
  3. XY群のマウスに強制経口 投与により XY煎じ薬を投与し、対照群には同量の脱イオン水を投与します。
  4. 経口投与の2時間後、マウスにペントバルビタールナトリウムで麻酔をかけます(施設で承認されたプロトコルに従います)。.ピンセットを使用して眼球を摘出し、血液サンプルを採取し、次に倫理ガイドライン19に従ってCO2窒息とそれに続く子宮頸部脱臼によってマウスを安楽死させます。
  5. 血液サンプルを室温で90分間安定させます。3450 x g (4°C)で15分間遠心分離し、上清を回収します。

3. UHPLC-QE-MS分析

  1. 抽出液500μL(メタノール:水=4:1)にXY煎じ薬凍結乾燥粉末100mgを加えます。十分に混合し、超音波処理し、氷水浴で1時間インキュベートします。
  2. 混合物を-40°Cで1時間保持し、13,800 x g (4°C)で15分間遠心分離します。0.22 μmのフィルターメンブレンで上清をろ過し、各上清100 μLを混ぜ合わせて品質管理(QC)サンプルを作成します。
  3. 血漿サンプルを解凍した後、対照群の血漿サンプル400μLとXY群の血漿サンプル400μLを採取します。各サンプルに40 μLの塩酸(2 mol/L)を加えます。1分間ボルテックスし、混合物を4°Cで15分間放置します。この手順を 4 回繰り返します。
  4. アセトニトリル1.6mLを加え、ボルテックスで5分間渦巻きます。13,800 x g で4°Cで5分間遠心分離します。 上清1,800μLを窒素乾燥にかけます。
  5. 乾燥したサンプルを、10 μg/mLの内部標準液を含む80%メタノール150 μLに5分間ボルテックスして再構成します。13,800 g × g で 4 °C で 5 分間遠心分離し、120 μL の上清を新しいガラスバイアルに移して LC-MS 分析を行います(図 3)。

4. 細胞培養と動物調製

  1. 10%ウシ胎児血清と1%ペニシリン/ストレプトマイシンを添加したダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)を含む培養皿にルイス肺癌細胞1mLを播種します。37°Cの制御条件下で細胞を5%CO2でインキュベートします。
  2. 細胞が80%のコンフルエンスに達したら、0.25%トリプシンを使用して細胞を継代します。細胞の状態が安定するまで継代を続け、その後、細胞濃度を3 x 106細胞/mLに調整します。
  3. 調製した細胞懸濁液0.1mLを雄のC57BL/6マウスの右腋窩に皮下注入し、肺腺がんモデルを確立します。
    注:腫瘍組織は、接種後5日でマウスの腋窩で触診できます。
  4. 5日後、マウスをランダムに5つのグループに分けます(グループあたりn = 6):モデルグループ(M)-治療なし。XY煎じ薬低用量群(XY-L) - 1.3g / kg;XY煎じ薬中用量群(XY-Z) - 2.6g / kg;XY煎じ薬高用量群(XY-H)-5.2g / kg;シスプラチン群(DDP) - シスプラチン20で治療。
  5. XY煎じ薬粉末を200μLの蒸留水に対応する用量で溶解し、強制経口 投与 します。.M基とDDP基は、強制経口 投与により 同量の蒸留水を受け取ります。
  6. シスプラチンを腹腔内注射(3 mg / kg) で DDPグループに3日ごとに投与します。.同じ量の生理食塩水を他のグループに注入します。

5. 腫瘍組織の病理学的解析

  1. 21日後、すべてのマウスをCO2 窒息とそれに続く子宮頸部脱臼(倫理ガイドラインに従う)を使用して安楽死させ、腫瘍組織を切除します21。腫瘍の体積と重量を測定します(図4)。
  2. 切除した腫瘍組織を4%パラホルムアルデヒドで24時間固定します。等級付けされたエタノール溶液を使用して組織を脱水します。
  3. キシレンを使用して脱水組織ブロックを除去し、溶かしたパラフィンワックスに埋め込みます。ワックスがパラフィンブロックに固まるのを待ちます。組織ブロックをミクロトームを使用して厚さ5 μmのスライスに切片化します。
  4. キシレンで組織切片を脱ろうし、続いて等級付けされたエタノール溶液で再水和します。切片をヘマトキシリンで5分間染色し、脱イオン水ですすいでください。
  5. 切片を0.5%エオシン溶液で1分間対比染色します。光学顕微鏡で染色切片を観察し、分析のために画像をキャプチャします。

6. 腫瘍組織の免疫組織化学的解析

  1. 手順5.2〜5.4で説明されている手順に従って、脱ロウと再水和を行います。
  2. 切片を内因性ペルオキシダーゼブロッカーで室温で15分間インキュベートします。切片をヤギ血清とインキュベートすることにより、非特異的結合をブロックします。
  3. 一次抗体であるKi-67(1:600)およびCaspase-3(1:100)を塗布します。切片を4°Cで一晩インキュベートします。 PBSバッファーで洗浄)し、汎用二次抗体(1:500)を塗布し、37°Cで30分間インキュベートします。
  4. DAB溶液を添加して色反応を発現させます。ヘマトキシリン溶液で切片を対比染色します。
  5. 汚れた部分の脱水、クリア、シーリングを行います。光学顕微鏡でタンパク質の発現を観察し、解析用の画像を取得します。

7. ウェスタンブロット解析

  1. 組織ライザーを使用して腫瘍組織を均質化します。全タンパク質を抽出し、ビシンコニン酸(BCA)アッセイキットを使用してその濃度を測定します( 材料の表を参照)。
  2. タンパク質の定量を行い、続いてSDS-PAGE電気泳動を行い、メンブレン上にタンパク質を転写します。
  3. P38 (1:2000)、p-P38 (1:1000)、ERK (1:20000)、p-ERK (1:500)、JNK (1:2000)、p-JNK (1:5000)、β-actin (1:200) の一次抗体を用いて、メンブレンを 4 °C で一晩インキュベートします ( 材料表を参照)。
  4. 翌日、メンブレンを西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)標識二次抗体と室温で1.5時間インキュベートします。強化化学発光(ECL)システムを使用してタンパク質バンドを検出します。
    注:タンパク質バンド強度は、ImageJソフトウェアを使用して定量化しました。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

結果

XY粉末溶液とXYグループのXY粉末溶液と血清サンプルをUHPLC-QE-MSを使用して分析したところ、十分に分離されたピークが明らかになりました。正イオンモードと負イオンモードの合計イオン化図を 図3に示します。XY煎じ薬の組成は、保持時間、取り込みモード、および質量スペクトルフラグメントに基づいて同定されました。ブランクおよびXY煎じ薬経口投与群の血清をXY粉末溶液の成分と比較することにより、15の血液侵入成分が同定されました(表1)。

腫瘍体積折れ線グラフは、XY煎じ薬による21日間の強制後、マウスの腫瘍体積がM群と比較して減少し、用量依存的な効果を示したことを示しています(図4)。腫瘍の組織病理学は、H&E染色を用いて観察された(図5

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

ディスカッション

がんの発生率は年々上昇しており、臨床的および研究上の大きな関心を集めています22,23。最近の研究では、肺がんの治療における伝統的な中国医学(TCM)の有効性が実証されています24,25,26。例えば、マイメンドン煎じ薬は、NK細胞の数と活性を増強し、それによって肺がんの転移を阻害することが示されています27。同様に、Mahuang Fuzi Xixin煎じ薬は、複数のシグナル伝達経路に影響を与えることにより、肺癌に対する治療効果を達成しています28。この研究では、LC-MS 分析と in vivo 実験を利用して、XY 煎じ薬が肺腺がんに治療効果を発揮する...

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

開示事項

著者は何も開示していません。

謝辞

この作業は、吉林省科学技術開発計画項目(YDZJ202301ZYTS459)の支援を受けました。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
アセトニトリルCNWテクノロジー1975
2-クロロ-LフェニルアラニンShanghai Hengbo Biotechnology Co., Ltd.103616-89-3
酸化アンモニウム溶液中国国立製薬グループ化学試薬有限公司#2028
抗体-&β;-アクチンアブカム ab8228
抗 Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) 抗体アブカム ab4819
抗 ERK1/ERK2 抗体アブカム ab184699
抗 JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) 抗体アブカムab76572
抗 JNK1/JNK2/JNK3 抗体アブカムab208035
抗 Ki67 抗体細胞シグナル伝達技術GB121141
抗 p38 (リン酸化 T180) 抗体Abcam ab178867
抗 p38 α/MAPK14 抗体Abcamab170099
BCA タンパク質濃度アッセイキットBoster Biological Technology17E17B46
ウシ血清アルブミン (BSA)DAKOBIOFROXX
Broad-spectrum phosphatase inhibitor (100x)Boster Biological TechnologyAR1183
C57bl/6 miceLiaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd. (遼寧省長生バイオテクノロジー株式会社)SCXK2021-0006
クロマトグラフィーカラムWatersACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μm2.1*100 mm
シスプラチン中国国立製薬グループ化学試薬有限公司232120
クエン酸塩(pH 6.0)抗原賦活化溶液武漢白鮮都バイオテクノロジー株式会社B2010
カバースリップ江蘇泰実験装置有限公司10212432C
極低温ステージ武漢Junjie電子有限公司JB-L5
DAB発色性キット江蘇省泰実験装置有限公司
2005289脱色シェーカー北京劉義楽器工場WD-9405A
脱水機武漢Junjie電子有限公司JJ-12J
乾燥オーブン上海Huitai Instrument Manufacturing Co.、Ltd.DHG-9140A
ダルベッコの改変ワシ培地Gibco8121587
EDTA (pH 8.0) 抗原賦活化溶液武漢白耕工莉B2001
EDTA(pH 9.0)抗原賦活化液Wuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2002
電気泳動バッファーNCMバイオテクノロジー20230801
埋め込み機漢Junjie電子有限公司JB-P5
Eosin中国国家製薬グループ化学試薬有限公司
エタノール中国国立製薬グループ化学試薬有限公司
ウシ胎児血清Gibco2166090RP
ギ酸SIGMA64-18-6
GraphPad プリズムソフトウェアGraphPad ソフトウェア, LLCバージョン 9.0.0
ヘマトキシリン中国国立製薬グループ 化学試薬 Co., Ltd.H3136
高速液体クロマトグラフィーAgilent1260 Infinity II Prime
高速冷蔵遠心分離機Thermo Fisher ScientificLegend Micro 17R
高分解能質量分析Thermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
HRP 標識ヤギ 抗マウスセラケア5220-0341
HRP標識ヤギ抗ウサギセラケア5220-0336
HRP標識ヤギ抗ウサギ/マウスユニバーサル二次抗体DAKOK5007
HRP標識ウサギ抗ラットセラケア5220-0364
HRP標識ウサギ抗ヤギセラケア5220-0362
酸中国国家製薬グループ化学試薬(株)H9892
酸化水素中国国立製薬グループ化学試薬有限公司B12555
高感度ECL化学発光キットNCM BiotechP10300
ImageJソフトウェア国立衛生研究所v1.8.0
イメージングシステムニコン(日本)ニコン DS-U3
ルイス肺がん細胞中国国立製薬集団化学試薬有限公司
メッシュクロスBaijie100110779650
金属加熱温度制御機器Baiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
メタノールアラジンM116118
マイクロピペットDlab Scientific Co., Ltd.KE0003087/KA0056573
顕微鏡スライドJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.10212432C
ミクロトーム上海ライカインスツルメンツ株式会社RM2016
Galanz Microwave Electrical Appliances Co.、Ltd.P70D20TL-P4
中性バルサム中国国立製薬グループ化学試薬有限公司
光学顕微鏡ニコン(日本)Nikon Eclipse CI
OvenShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
PAGEゲル迅速調製キットバイオシャープPL566B-5
パラホルムアルデヒド中国国立製薬グループ化学試薬有限公司8.18715
リン酸緩衝生理食塩水 (1x)Gibco8120485
Pre-stained color protein marker (10-180 kDa)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
タンパク質ローディングバッファー(5X)Boster Biological TechnologyAR1112
粉砕機Shangzhiqiao Co.、Ltd.DFT-100A
PVDF (0.45 μm)Cywin Innovation(北京)バイオテクノロジー株式会社SW120-01
高速膜転写ソリューションCywin Innovation(北京)バイオテクノロジー株式会社SW171-02
RIPAライセートBoster Biological Technology Co., Ltd.AR0105
TBSバッファーNCMバイオテック23HA0102
組織浮選ワークステーションJinhua Kedi Instrument Equipment Co.、Ltd.、浙江省。KD-P
膜貫通バッファーNCM Biotech23CA2000
トリプシン (0.25%, 1x)HyCloneJ210045
超音波細胞破壊装置Ningbo Xinyi ultrasonic equipment Co., Ltd.JY92-IIDN
正立光学顕微鏡ニコン(日本)ニコン エクリプス CI
真空凍結乾燥機蘭京(株)HD-LG20D
ボルテックスミキサーKylin-BellXW-80A
キシレン中国国家製薬集団 化学試薬有限公司
年5月8日 水有限公司武212954493511塩過90020104電子レンジ10004160214736

参考文献

  1. Ferlay, J., et al. Cancer statistics for the year 2020: An overview. Int J Cancer. 149 (4), 778-789 (2021).
  2. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  3. Ahn, M. J., et al. Asian Thoracic Oncology Research Group (ATORG) expert consensus statement on MET alterations in NSCLC: Diagnostic and therapeutic considerations. Clin Lung Cancer. 23 (8), 670-685 (2022).
  4. Seguin, L., Durandy, M., Feral, C. C. Lung adenocarcinoma tumor origin: A guide for personalized medicine. Cancers (Basel). 14 (7), 1759(2022).
  5. Nasim, F., Sabath, B. F., Eapen, G. A. Lung cancer. Med Clin North Am. 103 (3), 463-473 (2019).
  6. Miller, K. D., et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2022. CA Cancer J Clin. 72 (5), 409-436 (2022).
  7. Torrente, M., et al. Understanding prognosis and survival outcomes in patients with early-stage non-small-cell lung cancer. Clin Med (Lond). 22 (Suppl 4), 38-40 (2022).
  8. Li, Z., Feiyue, Z., Gaofeng, L. Traditional Chinese medicine and lung cancer--From theory to practice. Biomed Pharmacother. 137, 111381(2021).
  9. Wei, Z., et al. Traditional Chinese medicine has great potential as candidate drugs for lung cancer: A review. J Ethnopharmacol. 300, 115748(2023).
  10. Miao, K., et al. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  11. Wang, K., et al. Anticancer activities of TCM and their active components against tumor metastasis. Biomed Pharmacother. 133, 111044(2021).
  12. Chen, S., et al. Efficacy and safety of TCM combined with chemotherapy for SCLC: A systematic review and meta-analysis. J Cancer Res Clin Oncol. 146 (11), 2913-2935 (2020).
  13. Yu, Y., Yao, C., Guo, D. A. Insight into chemical basis of traditional Chinese medicine based on the state-of-the-art techniques of liquid chromatography-mass spectrometry. Acta Pharm Sin B. 11 (6), 1469-1492 (2021).
  14. Wei, J., et al. Integrated serum pharmacochemistry and network pharmacology approach to explore the effective components and potential mechanisms of Menispermi rhizoma against myocardial ischemia. Front Chem. 10, 869972(2022).
  15. Shao, D., et al. Identification of the active compounds and functional mechanisms of Jinshui Huanxian formula in pulmonary fibrosis by integrating serum pharmacochemistry with network pharmacology. Phytomedicine. 102, 154177(2022).
  16. Han, J., et al. Using network pharmacology to explore the mechanism of panax notoginseng in the treatment of myocardial fibrosis. J Diabetes Res. 2022, 8895950(2022).
  17. Wang, Y., et al. Mechanisms underlying the therapeutic effects of Qingfeiyin in treating acute lung injury based on GEO datasets, network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 145, 105454(2022).
  18. Rubio, K., et al. Non-canonical integrin signaling activates EGFR and RAS-MAPK-ERK signaling in small-cell lung cancer. Theranostics. 13 (8), 2384-2407 (2023).
  19. Guo, T. F., Li, W., Xi, B. Animal welfare and slaughter methods of fur animal. J Econ Anim. 15 (2), 112-119 (2011).
  20. Moar, K., et al. Synergistic anticancer activity of resveratrol with cisplatin and carboplatin in A549 lung adenocarcinoma cells. Int J Clin Exp Pathol. 17 (11), 411-420 (2024).
  21. Li, Z., et al. Exploring tumor-suppressive effect and mechanism of action of Zilongjin Tablets combined with icotinib in Lewis tumor-bearing mice based on EGFR/PI3K/Akt signaling pathway. Chin Tradit Herb Drugs. 56 (2), 529-535 (2025).
  22. Mullard, A. Addressing cancer's grand challenges. Nat Rev Drug Discov. 19 (12), 825-826 (2020).
  23. Williams, P. A., Zaidi, S. K., Sengupta, R. AACR cancer disparities progress report 2022. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 31 (7), 1249-1250 (2022).
  24. Zhao, W., et al. Si Jun Zi decoction inhibits the growth of lung cancer by reducing the expression of PD-L1 through TLR4/MyD88/NF-κB pathway. J Ethnopharmacol. 318 (Pt A), 116948(2024).
  25. Ye, Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the effects and mechanisms of Qinghao Biejia decoction and its active compound artemisinin B against non-small-cell lung cancer. Drug Des Devel Ther. 17, 2461-2479 (2023).
  26. Zhang, J., et al. Ze-Qi decoction inhibits non-small cell lung cancer growth and metastasis by modulating the PI3K/Akt/p53 signaling pathway. J Tradit Complement Med. 13 (5), 417-429 (2023).
  27. Zhang, Z., et al. Maimendong decoction inhibits lung cancer metastasis by increasing the proportion and killing activity of NK cells. J Ethnopharmacol. 338 (Pt 3), 119127(2025).
  28. Zhang, W., et al. Explore the mechanism and substance basis of Mahuang FuziXixin decoction for the treatment of lung cancer based on network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 151 (Pt A), 106293(2022).
  29. Lee, J. Y., et al. Picropodophyllotoxin inhibits cell growth and induces apoptosis in gefitinib-resistant non-small lung cancer cells by dual-targeting EGFR and MET. Biomol Ther (Seoul). 31 (2), 200-209 (2023).
  30. Li, J. X., et al. Metabolomics and integrated network pharmacology analysis reveal Tricin as the active anticancer component of Weijing decoction by suppression of PRKCA and sphingolipid signaling. Pharmacol Res. 171, 105574(2021).
  31. Hong, J., Gwon, D., Jang, C. Y. Ginsenoside Rg1 suppresses cancer cell proliferation through perturbing mitotic progression. J Ginseng Res. 46 (3), 481-488 (2022).
  32. Wei, H., et al. Shuangshen granules attenuate lung metastasis by modulating bone marrow differentiation through mTOR signaling inhibition. J Ethnopharmacol. 281, 113305(2021).
  33. Nakhjavani, M., et al. Anti-Angiogenic properties of Ginsenoside Rg3. Molecules. 25 (21), 4905(2020).
  34. Liu, Z., et al. Insights into the antitumor mechanism of ginsenosides Rg3. Mol Biol Rep. 48 (3), 2639-2652 (2021).
  35. Huang, G., et al. Stachyose-induced apoptosis of Caco-2 cells via the caspase-dependent mitochondrial pathway. Food Funct. 6 (3), 765-771 (2015).
  36. Lin, Q., et al. Mechanistic and therapeutic study of novel antitumor function of natural compound imperialine for treating non-small cell lung cancer. J Ethnopharmacol. 247, 112283(2020).
  37. Zhang, T., et al. Peimine-induced apoptosis and inhibition of migration by regulating reactive oxygen species-mediated MAPK/STAT3/NF-κB and Wnt/β-catenin signaling pathways in gastric cancer MKN-45 cells. Drug Dev Res. 83 (7), 1683-1696 (2022).
  38. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  39. Zhang, P., et al. Jujuboside B suppresses angiogenesis and tumor growth via blocking VEGFR2 signaling pathway. Heliyon. 9 (6), e17072(2023).
  40. Guo, L., et al. Jujuboside B inhibits the proliferation of breast cancer cell lines by inducing apoptosis and autophagy. Front Pharmacol. 12, 668887(2021).
  41. Shao, M., et al. Aucubin exerts anticancer activity in breast cancer and regulates intestinal microbiota. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 4534411(2022).
  42. Yang, Z., et al. Jujuboside B reverses CUMS-promoted tumor progression via blocking PI3K/Akt and MAPK/ERK and dephosphorylating CREB signaling. J Immunol Res. 2022, 5211368(2022).
  43. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  44. Shan, X., et al. Ginsenoside Rg3-induced EGFR/MAPK pathway deactivation inhibits melanoma cell proliferation by decreasing FUT4/LeY expression. Int J Oncol. 46 (4), 1667-1676 (2015).
  45. Wang, J., et al. Low toxicity ginsenoside Rg1-carbon nanodots as a potential therapeutic agent for human non-small cell lung cancer. Colloids Surf B Biointerfaces. 246, 114392(2025).
  46. Colic, E., Patel, P. U., Kent, O. A. Aberrant MAPK signaling offers therapeutic potential for treatment of ovarian carcinoma. Onco Targets Ther. 15, 1331-1346 (2022).
  47. Bahar, M. E., Kim, H. J., Kim, D. R. Targeting the RAS/RAF/MAPK pathway for cancer therapy: From mechanism to clinical studies. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 455(2023).
  48. Sugiura, R., Satoh, R., Takasaki, T. ERK: A double-edged sword in cancer. ERK-dependent apoptosis as a potential therapeutic strategy for cancer. Cells. 10 (10), 2509(2021).
  49. Ullah, R., et al. RAF-MEK-ERK pathway in cancer evolution and treatment. Semin Cancer Biol. 85, 123-154 (2022).
  50. Romany, A., et al. Analysis of the ERK pathway cysteinome for targeted covalent inhibition of RAF and MEK kinases. J Chem Inf Model. 63 (8), 2483-2494 (2023).
  51. Ghosh, A. K., et al. Covalent inhibition in drug discovery. ChemMedChem. 14 (9), 889-906 (2019).
  52. Kaoud, T. S., et al. Modulating multi-functional ERK complexes by covalent targeting of a recruitment site in vivo. Nat Commun. 10 (1), 5232(2019).
  53. Qian, X., et al. Qingyihuaji formula promotes apoptosis and autophagy through inhibition of MAPK/ERK and PI3K/Akt/mTOR signaling pathway on pancreatic cancer in vivo and in vitro. J Ethnopharmacol. 307, 116198(2023).
  54. Yue, S. J., et al. A ferulic acid derivative FXS-3 inhibits proliferation and metastasis of human lung cancer A549 cells via positive JNK signaling pathway and negative ERK/p38, AKT/mTOR and MEK/ERK signaling pathways. Molecules. 24 (11), 2165(2019).
  55. Ozgun, G. S., et al. Piperine induces cellular stresses, apoptosis, and cytotoxicity via JNK signaling and has concentration-dependently additive or synergistic effects with sorafenib in hepatocellular carcinoma: An in vitro study. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. , (2024).
  56. Martínez-Limón, A., et al. The p38 pathway: From biology to cancer therapy. Int J Mol Sci. 21 (6), 1913(2020).
  57. Xie, C. Q., et al. Triptolide exerts pro-apoptotic and cell cycle arrest activity on drug-resistant human lung cancer A549/Taxol cells via modulation of MAPK and PI3K/Akt signaling pathways. Oncol Lett. 12 (5), 3586-3590 (2016).
  58. Luo, Y. H., et al. Anticancer effects of baicalein on cervical carcinoma cells through down-regulation of the ERK/p38/MAPK pathway. J Biol Regul Homeost Agents. 35 (3), 945-952 (2021).
  59. Lan, H. Y., et al. Aidi injection induces apoptosis of hepatocellular carcinoma cells through the mitochondrial pathway. J Ethnopharmacol. 274, 114073(2021).
  60. Remnant, L., et al. The intrinsically disorderly story of Ki-67. Open Biol. 11 (8), 210120(2021).
  61. Ma, W., et al. Breast cancer Ki67 expression prediction by DCE-MRI radiomics features. Clin Radiol. 73 (10), 909.e1-909.e5 (2018).
  62. Ahmed, S. T., et al. Proliferative index (Ki67) for prediction in breast duct carcinomas. Asian Pac J Cancer Prev. 19 (4), 955-959 (2018).
  63. Sobecki, M., et al. Cell-cycle regulation accounts for variability in Ki-67 expression levels. Cancer Res. 77 (10), 2722-2734 (2017).
  64. Gown, A. M. The biomarker Ki-67: Promise, potential, and problems in breast cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 31 (7), 478-484 (2023).
  65. Piri, R., et al. Ki-67/MIB-1 as a prognostic marker in cervical cancer - A systematic review with meta-analysis. Asian Pac J Cancer Prev. 16 (16), 6997-7002 (2015).
  66. Pelosi, G., et al. Ki-67 antigen in lung neuroendocrine tumors: Unraveling a role in clinical practice. J Thorac Oncol. 9 (3), 273-284 (2014).
  67. Li, H., et al. A correlation research of Ki67 index, CT features, and risk stratification in gastrointestinal stromal tumor. Cancer Med. 7 (9), 4467-4474 (2018).
  68. Asadi, M., et al. Caspase-3: Structure, function, and biotechnological aspects. Biotechnol Appl Biochem. 69 (4), 1633-1645 (2022).
  69. Eskandari, E., Eaves, C. J. Paradoxical roles of caspase-3 in regulating cell survival, proliferation, and tumorigenesis. J Cell Biol. 221 (6), e202201159(2022).
  70. Jiao, C., et al. Caspase-3/GSDME mediated pyroptosis: A potential pathway for sepsis. Int Immunopharmacol. 124 (Pt B), 111022(2023).
  71. Zhou, M., et al. Caspase-3 regulates the migration, invasion and metastasis of colon cancer cells. Int J Cancer. 143 (4), 921-930 (2018).
  72. Ke, H., et al. Effect of weimaining on apoptosis and Caspase-3 expression in a breast cancer mouse model. J Ethnopharmacol. 264, 113363(2021).
  73. Xu, H., et al. The natural product dehydrocurvularin induces apoptosis of gastric cancer cells by activating PARP-1 and caspase-3. Apoptosis. 28 (3-4), 525-538 (2023).
  74. Huang, Y. L., et al. Expression levels of Caspase-3 and gasdermin E and their involvement in the occurrence and prognosis of lung cancer. Cancer Rep (Hoboken). 5 (9), e1561(2022).

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

再版と許可

タグ

UHPLC QE MS

この記事は公開されました

動画は近日公開

お問い合わせ
図書館への推薦

プライバシー

利用規約

ポリシー

著作権 © 2026 MyJoVE Corporation. 無断転載を禁じます。