このプロトコルは、ラットの腎臓を体内外 で正常母 熱機械で灌流し、その後のレシピエントラットへの移植を記述しています。
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この記事について
サマリー
要約
ノーモモミック・マシン・パーフュージョン(NMP)技術は、体 外 臓器評価および介入プラットフォームを提供する有望な臓器保存技術です。臨床的に廃棄された臓器の入手可能性が限られ、大型動物モデルのコストが高いため、小動物NMPモデルは研究の有望な代替案と見なされています。ここでは、ラット腎臓の標準化されたNMPおよび移植プロトコルを確立し、腎臓調達、NMP保存、移植のステップバイステップガイドを提供しました。NMPの詳細とパラメータは記録されました。この手術およびNMP技術により、すべてのラット受容者は無事に生存し、移植後腎移植片の機能は正常なままでした。術後7日目に、NMPの生存率および移植片組織学は静的冷蔵(SCS)と比較して有意な差は認められませんでした。この新しいNMP戦略は、小動物モデルにおいて将来的に臓器保存、評価、介入に関する基礎研究に役立つ可能性があります。さらに、このモデルは治療薬、画像診断技術、灌流関連介入の前臨床試験のためのコスト効率が高くスケーラブルなプラットフォームを提供します。
概要
末期腎臓病(ESKD)は、世界中の医療および医療システムに急速に増加している負担です。1,2,3。透析は多くの国でESKDの主要な治療法ですが、腎移植は依然としてゴールドスタンダードであり、透析1、3、4、5と比較して生活の質が向上し、生存率と予後の向上に寄与します。しかし、ドナー腎臓の不足により腎移植のさらなる普及は制限され、循環死後に提供された移植片(DCD)や拡張基準ドナーからの移植片(ECD)の使用増加を招いています6,7,8。
静的冷蔵(SCS)は現在、臓器保存の標準的な方法ですが、長期間の冷性虚血は移植片機能遅延(DGF)のリスクを高め、特にDCDまたはECDの
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プロトコル
動物プロトコルは、中山大学実験動物センターの動物ケア・利用委員会によって承認されました(番号:SYSU-IACUC-2023-000717)。本研究に参加したすべての動物は、生後7〜8週(250〜300g)のオスのスプラグ・ドーリーラットで、特定病原体フリー(SPF)で、実験動物の安全性の標準要件を満たしていました(補 足表S1の病原体除外リスト参照)。彼らは標準的な食事を与えられ、中山大学の実験動物センターの病原体のない部屋で飼育されました。
実験前にすべての手術器具をオートクレーブ(121°C、30分)で滅菌してください。処置中は使い捨て滅菌消耗品のみを使用し、すべての手術では無菌プロトコルを厳守してください。
1. 基本混沸液の調製
- 2.5gの牛血清アルブミン(BSA)、50mLのRPMI 1640、2%ペニシリン・ストレプトマイシン、0.6mgのクレアチニンを組み合わせて基本的なパーフューゼートを調製します(補足表S2)。
- 5%の重炭酸ナトリウム溶液(0.5-1.2 mL)を加え、pHを~7.3に調整し、塩基過剰(BE、灌流系の酸塩基バランスを測定する重要な指標)を~0に調整し、合計体積は~60....
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結果
この方法により、単離ラットの腎臓は少なくとも3時間は生 体外 正常母熱機灌流に有効です。NMP中、腎臓の灌流抵抗性(図3A、図 3 および 図4 の完全な基礎データセットは 補足表S6に記載)は5.958±1.106 mmHg/(mL/min)と安定的に維持され、確立された灌流システムの安定性を示しています。灌流期間中は腎臓が正常に尿を産生し(図3B)、ナトリウムの排出分率は低く、カリウムの排出率が高い(図3C)。これは灌流期間中に腎臓が良好な生理機能を維持していたことを示しています。
移植後のデータは、確立されたモデルの安全性と安定性も示しています。NMP群は、冷灌流.......
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ディスカッション
NMPはグラフト虚血の期間を短縮し、16,17,18,19,20,32,33のグラフト質の評価と治療を可能にします。しかし、ラットモデルのNMPに対する統一された標準は存在しません。本論文では、NMPおよびその後のラット腎臓移植に関する動物モデルを開発し、腎移植分野におけるNMPの役割を探るための有用なツールとなり得ます。
現在、NMP研究で用いられている動物モデルは主に豚モデルですが、高額なコストのため関連実験の広範な開発は制限されてい.......
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開示事項
著者には開示すべき利益相反はありません。
謝辞
この研究は中国国家自然科学基金(一般プログラム、助成金番号82470778)からの資金援助を受けました。中国国家自然科学基金(青年科学基金プロジェクト、助成金番号82201961);広東省自然科学基金(一般プログラム、助成番号2024A1515011447)、および広東省臓器提供・移植免疫学重点研究所(助成金番号2023B1212060020)、中山大学 - ARM腎臓再生・再建共同研究室(助成金番号:SYSU-50000-20240428-0001)。
著者らは、中山大学実験動物センターに実験動物、施設、機器を提供していただき感謝申し上げます。 図1 と 図2 は FigDrawで作成されました。Graphpad Prismはデータグラフ作成サービスを提供し、Biossci(湖北)バイオテクノロジーズ有限公司はパラフィンの断片および病理染色を担当しました。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| アルコール(75%) | ムシヤン | JJ-75-1 | |
| 輸血装置 | 佛山有展科技有限公司 | YZDW-15-5 | |
| 牛血清アルブミン(BSA) | アラジン・サイエンティフィック社。 | B265991-100g | |
| セルストレーナー(70 & mu;m) | コーニング生命科学(武江)有限公司 | 352350 | |
| 遠心分離機チューブ(1.5 mL) | コーニング生命科学(武江)有限公司 | MCT-150-C- 1 | |
| 遠心分離機チューブ(15 mL) | ExCellの略歴 | CS015-0001 | |
| 綿球 | 河南旞安集團有限公司 | 小型サイズ | |
| 綿棒 | 佛山順徳康正衛生資材有限公司 | KZ3-12 | |
| クレアチニン | 上海元業バイオテクノロジー有限公司 | S20198-100g | |
| 二重円針ナイロン縫合(11-0) | 寧波医療針株式会社 | SYZ-11-0 | |
| 電子スケール | センスン | EHA17 | |
| フルードディスペンサー | 志宇医療 | YZ-00-0231 | |
| ガーゼ | ジッター | C11001-001 | |
| ヒートパッド | 広州徳威生物技術有限公司 | DK0032 | |
| ヘパリンナトリウム注射(12500 U、2 mL) | 成都赫帕屯製薬有限公司 | H51021209 | |
| 赤外線温度計 | デリ | DL333380 | |
| 注射用シリンジ(1 mL) | ウィナー・メディカル(ヒューマン)株式会社 | ZT-ZS 1ml | |
| 注射注射器(10 mL) | ウィナー・メディカル(ヒューマン)株式会社 | ZT-ZS 10ml | |
| 注射用シリンジ(20 mL) | ウィナー・メディカル(ヒューマン)株式会社 | ZT-ZS 20ml | |
| イソフルラン | RWDライフサイエンス株式会社 | R510-22-10 | |
| i-STAT 1 血液分析機 | アボット | 04P75-03(米国) | |
| i-STAT CG4+カートリッジ | アボット | 03P85-25 | |
| i-STAT CHEM8+カートリッジ | アボット | 09P31-25 | |
| 液体延長チューブ | 江西洪大医療機器グループ有限公司 | ZJ983 | |
| マイクロ1ラット酸素供給装置 | 東莞科偉医療機器有限公司 | マイクロモーション | |
| マイクロポンプ | エドキャプテン | SYS-3011 | |
| ニードルフィルター(0.22 & μ;m) | メルク・ミリポール | SLGPR33RB | |
| オルガン保存ソリューション | 長江製薬グループ | HCA II | |
| オキシゲネーター | オーゲルズ | オズ-3-02HWO | |
| ペニシリン・ストレプトマイシン(10,000 U/mL) | サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック社 | 15140122 | |
| 蠕動ポンプ | カモエル流体技術(上海)有限公司 | LLS Plus V2 | |
| 蠕動ポンプチューブ | 佛山有展科技有限公司 | LG-1-14 | |
| ペトリ皿 | BKMAM | BKM001 | |
| 圧力センサー | エドワーズ・ライフサイエンス・コーポレーション | ジプト-A-01-EDW | |
| 圧力センサー受信機 | シンギュラリティ・メディカル | CB-202309001 | |
| RPMI 1640(1回、500 mL) | コーニング生命科学(武江)有限公司 | R10-040-CV | |
| 生理食塩水 | YXH薬局 | A1001346 | |
| SDラット | 中山大学実験動物センター | NA | |
| シェーバー | ビヨタイム | FS600 | |
| シングルアングルニードルナイロン縫合(3-0) | 寧波医療針株式会社 | DJZ-3-0 | |
| 単一円針ナイロン縫合(8-0) | 寧波医療針株式会社 | DYZ-8-0 | |
| 小動物麻酔装置 | RWDライフサイエンス株式会社 | R500 | |
| 小動物多臓器灌流装置 | ライフ Perfusor 医療 | PU-100 | 金属製の皿、水浴、ヒーティングポンプ、温度センサーを含めてください |
| 小動物手術キット | ビヨタイム | FS500 | |
| 炭酸水素ナトリウム溶液(NaHCO3、5%) | 東莞プジー医療技術有限公司 | H20064480 | |
| 無菌手術用シート | 恒高テクノロジー | SKR-BY-DD0001 | |
| 無菌水 | 海王略歴 | H35021140 | |
| ストレートハンドの点滴カテーテル(24 G) | 佛山有展科技有限公司 | 20230816-1 | |
| 外科手術顕微鏡 | マージダー | MSD203 | |
| テープ | ミネソタ鉱業製造会社。有限会社 | 1527C-0 | |
| ティーコネクター | 佛山有展科技有限公司 | WGST-10 | |
| Y型留置型静脈カテーテル針(24 G) | 江西鳳林 | YZDW-7-5 | |
| Y型留置静脈カテーテル針(26 G) | 江西鳳林 | YZDW-7-6 |
参考文献
- Collins, A. J., et al. Excerpts from the US Renal Data System 2009 Annual Data Report. Am J Kidney Dis. 55 (1 Suppl 1), A6-A7 A1-A420 (2010).
- Skorecki, K., Chertow, G. M., Marsden, P. A., Taal, M. W., Yu, A. S. L. Brenner & Rector's The Kidney. , 10th ed, Elsevier. Philadelphia, PA. (2016).
- Thurlow....
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