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方法論記事

白と褐色の脂肪移植片:黒と黄褐色の短距離(BTBR)肥満マウスにおける生殖、代謝、および腎臓の欠損を矯正するためのアプローチ

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DOI:

10.3791/68759

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2025年9月9日

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Albert Einstein Research and Education Institute, Hospital Israelita Albert Einstein, 2School of Medicine, Faculdade Israelita de Ciências da Saúde Albert Einstein, 3Nephrology Division, Federal University of São Paulo

* These authors contributed equally

この記事について

サマリー

ここでは、糖尿病および肥満のBTBRマウスの腎機能を改善しながら、不妊症、肥満、および高血糖を逆転させる有望な戦略を提供する白と褐色の脂肪組織移植プロトコルを紹介します。

要約

白色脂肪組織 (WAT) と褐色脂肪組織 (BAT) の移植は、外因性薬剤の持続的な投与を必要とせずに代謝障害を逆転させるための有望な治療戦略として浮上しています。WAT はエネルギー恒常性に関与する重要な内分泌器官として機能しますが、BAT は体温調節に重要な熱発生組織です。Black and Tan Brachyuric(BTBR)肥満マウスモデルは、高血糖、インスリン抵抗性、代謝低下、不妊症など、肥満、2型糖尿病(T2DM)、糖尿病性腎疾患(DKD)の主要な特徴を厳密に模倣しています。

以下に示すプロトコルを使用して、BTBR 野生型およびヘテロ接合ドナーに由来する WAT と BAT を BTBR 肥満レシピエントに併用すると、不妊症の逆転、体重増加の減衰、血糖コントロールの正常化、および腎パラメータの改善がもたらされました。特に、腎肥大とアポトーシスが減少し、足細胞数が維持されました。これらの発見は、WAT と BAT の併用移植が T2DM の治療のための代替治療戦略であり、DKD と肥満の軽減に同時に利点をもたらす可能性があることを示唆しています。さらに、このアプローチは、ビバリウムコロニー内の生存可能なBTBR肥満マウスの数を増やすのに役立つ可能性があります。根底にあるメカニズムをさらに調査することで、この介入の臨床的翻訳が容易になる可能性があります。

概要

糖尿病性腎疾患 (DKD)、2 型糖尿病 (T2DM)、および肥満は、相互に関連する多因子疾患を表しており、重大かつ増大する世界的な健康上の課題を引き起こしています。DKD は、腎障害の他の特定可能な原因がない場合に糖尿病 (DM) と慢性腎臓病が共存することとして定義され、DM 患者の約 20-40% が罹患します 1,2。T2DM は、慢性的な高血糖とグルコース、脂質、インスリンの恒常性の破壊を特徴とする全身性代謝障害です。これは世界の主要な死因のトップ 10 にランクされており、現在 5 億人以上が罹患しています3。エネルギー摂取量と消費量の間の慢性的な不均衡によって引き起こされる肥満は、現在、世界の 8 人に 1 人が罹患しており、罹患率と死亡率の両方に大きく寄与しています4。これら 3 つの状態は密接に関連しており、肥満は T2DM を発症するリスクを著しく高め、その結果、DKD のリスクが大幅に高まります 1,4。肥満、T2DM、DKD の世界的な有病率の上昇は、それらの病態生理学的メカニズムをより深く理解し、効果的な治療戦略を開発することが緊急に必要であることを浮き彫りにしています。

BAT 移植は、肥満や T2DM と戦うための有望な治療戦略として浮上しています。この介入は、体重の減少、インスリン抵抗性と脂肪肝の改善、循環アディポネクチン、β3-アドレナリン受容体の発現、および脂肪酸酸化に関与する遺伝子の増加と関連しています5。なお、哺乳類の脂肪組織は、色に基づいて白、茶色、ベージュの3つの主要なタイプに分類できます6。WATは出生後すぐに拡大し始め、全身に広く分布しています。重要な内分泌器官として機能し、循環グルコースと遊離脂肪酸を隔離することにより、過剰なエネルギーをトリグリセリドの形で蓄えます6。対照的に、BATは、エネルギーをATP6として蓄えるのではなく、震えない熱発生を介して熱として放散することにより、体温調節において重要な役割を果たします。BAT活性は、年齢、肥満、糖尿病とともに減少します。成人では、BATは総脂肪組織のごく一部を占め、ヒトでは主に鎖骨上および頸部領域に位置しますが、マウスでは、主に肩甲骨間領域に位置します6。ミトコンドリアが豊富なBATは、かなりの量のグルコースと脂肪酸を消費し、体重増加に対する耐性と関連しています7。新たな証拠は、より痩せて代謝的に有利な表現型を促進する上での BAT の役割を裏付けており、移植による治療への関心が高まっています。

レプチンは、主にWATによって分泌されるホルモンであり、エネルギーバランス、代謝、生殖能力の調節において中心的な役割を果たします8。中枢神経系に作用して視床下部のゴナドトロピン放出ホルモン (GnRH) 分泌を刺激し、その後、下垂体前葉からの黄体形成ホルモン (LH) と卵胞刺激ホルモン (FSH) の放出を促進します9。レプチンはまた、卵巣テカ細胞と顆粒膜細胞に直接作用して、卵胞の発達をサポートします9。

BTBRob/ob (BTBR肥満)マウスモデルは、遺伝的にBTBRと指定されています。Cg-Lep ob/WiscJ(黒と黄褐色、肥満、房状、 材料表を参照)は、レプチン遺伝子(Lep)の自発的な機能喪失のホモ接合体であり、高血糖、耐糖能異常、高インスリン血症、高トリグリセリド血症、創傷治癒障害、代謝低下、低体温症、および低ゴナドトロピン性性腺機能低下症による不妊症など、さまざまな代謝異常および生殖異常を示します。男性は通常、生後 6 週までに T2DM を発症しますが、女性は 8 週間までに発症します10。高血糖は重度かつ進行性であり、空腹時血糖値は 10 週間までに 400 mg/dL を超えます。さらに、BTBR 肥満男性は 8 週目までに時間依存性アルブミン尿を示し、メサンギウム拡張や足細胞尿症などの組織学的に明らかな DKD に進行します。これらの特徴により、BTBR肥満マウスは、ヒトDKD10を厳密に再現する堅牢な前臨床モデルとして確立されています。

レプチン欠乏症の重大な代謝への影響を考慮して、レプチン補充療法や脂肪組織移植など、産婦人科/産科の表現型を逆転させるためのいくつかの戦略が研究されています。ほとんどの研究では、C57BL/6 のバックグラウンドで ob/ob マウスが使用されていますが、代謝がより低下した BTBR 株でこれらの介入を調査した研究は比較的少ないです。C57BL/6 ob/ob マウスでは、WAT 移植がインスリンレベルを正常化し、インスリン感受性を改善し、生殖能力を回復することが示されています8。さらに、痩せたC57BL / 6マウスへのBAT移植は、特に高脂肪食誘発性肥満の文脈において、体重増加を防ぎ、耐糖能とインスリン感受性を改善しながら、インスリン抵抗性を低下させることが実証されています11。さらに、BAT 移植は心臓の血行動態と代謝の健康を改善することが示されました12。有望な結果にもかかわらず、これらの研究にはいくつかの重要な制限があります。ほとんどの研究は、より重度の影響を受けたBTBR ob/ob株と比較して比較的軽度の代謝表現型を示すC57BL / 6 ob / obマウスで実施されています。その結果、これらの所見が、より顕著なインスリン抵抗性、高血糖、肥満、および腎臓病のモデルへの一般化可能性は限られています。さらに、レプチン補充と脂肪組織移植の効果は、BTBR の背景では十分に研究されておらず、文献に重大なギャップがあります。これらの介入の多くは、痩せた動物や短期間で評価されているため、ヒトの代謝性疾患の複雑さと慢性的な性質を適切に捉えられていない可能性があります。インスリン感受性、耐糖能、生殖能力の改善が報告されていますが、根底にあるメカニズムは十分に理解されておらず、これらの発見と臨床現場との翻訳的関連性はまだ不明です。特に、BTBR ob/ob マウスにおける白色脂肪組織移植と褐色脂肪組織移植の複合代謝効果は、ほとんど未解明のままです。

この研究の目的は、BTBR 肥満マウスにおける WAT と BAT の併用移植のプロトコルを標準化し、生殖能力の回復、腎機能、および組織学的変化に対するその効果を評価することです。第 2 の目的は、ビバリウム内のヘテロ接合体 (BTBR ob/+) および野生型 (BTBR +/+) マウスの損失を減らしながら、BTBR 肥満コロニーの拡大を促進することです。

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プロトコル

すべての実験は、イスラエル・アルバート・アインシュタイン病院(HIAE)の施設動物管理および使用委員会によって承認され、ブラジルのサンパウロ、SP(N°.3309-18およびN°.4900-21)にあるユダヤ研究教育研究所に登録されました。使用する試薬と機器の詳細は 、材料表に記載されています。

注:BTBR肥満マウス(レプチン遺伝子ノックアウト、ホモ接合体、 ob/ob)をT2DM、DKD、および肥満のモデルとして使用しました。生後4〜5週の雌BTBR肥満マウスが脂肪組織移植のレシピエントとして機能しました。ドナー動物は、雌のBTBR ob / + (ヘテロ接合体)または +/+ (野生型)マウス(遺伝子型は確認されていませんが、表現型は痩せていました)。移植時のレシピエントマウスの平均体重は25〜32gの範囲でした。すべての動物は、標準的な条件下で個別に換気されたケージに収容され、餌と水への自由なアクセス、12時間の明暗サイクル、および周囲温度制御が行われました。ケージごとに最大5頭の動物が収容されました。

1.外科的処置

  1. 100%v / vイソフルランの過剰摂取(2.5〜5%)を使用してドナーマウスを安楽死させ、続いて子宮頸部脱臼を行います(図1A)。
  2. 動物を背側臥位(腹を上にして)に置き、下腹部を0.5%アルコール性ジグルコン酸クロルヘキシジンで消毒します。2〜3 cmの正中線腹部切開を行い、鼠径部WATを採取します(図1B)。切除した組織を氷上の3mLチューブに入れます。
  3. 動物を腹側臥位(腹を下にして)に再配置し、肩甲骨の間に1〜2 cmの正中線切開を行い、肩甲骨間BATを採取します(図1C)。10〜14人のドナーからの脂肪組織をプールします。WAT + BATの合計がレシピエントの体重の10〜15%に等しいことを確認してください。
  4. 16 G針と3 mLシリンジを使用して、WATとBATを別々に均質化します(図1D)。
  5. 分析天びんを使用して最終的な脂肪重量を測定し(図1E)、移植するまでサンプルを氷上に保管します。
  6. レシピエントBTBR肥満マウスを100%v / vイソフルランチャンバー(2.5〜5%誘導)で麻酔し、フェイシャルマスク(1.5〜2.5%) を介して 麻酔を維持します。呼吸が3秒ごとに≤1回の呼吸に減少したら、動物を腹側に横たわらせます(図1F)。
  7. 2.0%非アルコールジグルコン酸クロルヘキシジンを使用して背側領域を消毒します(図1G)。
  8. 背側表面の6〜26の部位に16 Gの針を使用して、部位ごとに100〜200 μLの均質化脂肪を注入します。鉗子を使用して分配を補助します。移植後の各注射部位に0.5%クロルヘキシジン溶液を塗布します(図1H)。
  9. 鎮痛のためにトラマドール(40 mg / kg; 50 mg / mL溶液)を筋肉内投与し、回復中の怪我を防ぐために動物を個別に飼育します。
  10. 翌日、注射部位を0.5%クロルヘキシジン溶液で洗浄し、トラマドールの2回目の投与を行います。

figure-protocol-1
図1:脂肪移植手順の概略図。 (A) 密閉された箱に入れられたイソフルランを使用したドナーの安楽死。(B)鼠径部WATの採取。(C)肩甲骨間BATの採取。(D)脂肪の均質化。(E)脂肪計量。(F) レシピエント麻酔。(G)バック無菌。(H) 鉗子支援技術による脂肪注入。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

2. 移植後の交配

  1. 移植の2週間後、雌のBTBR肥満マウスと雄のBTBR ob / +(ヘテロ接合体)マウスを共育して交配します。

3. 機能評価

  1. 分析天びんを使用して毎週体重を測定します。
  2. 4-7、8-10、14-16、18-20、および24-26の5つの時点でグルコメーターを使用して空腹時血糖を評価します。
  3. 動物を水にアクセスできる代謝ケージに6時間入れて、尿サンプルを採取します。
  4. ELISA法を使用して尿中アルブミンレベルを測定し、6〜8週間で比色ピクリン酸法を使用して尿中クレアチニンレベルを測定します。アルブミン濃度 (μg) をクレアチニン濃度 (mg) で割ることにより、尿中アルブミン対クレアチニン比 (uACR) を計算します。

4. 形態学的解析

  1. 24週齢でレシピエントマウスを100%v / vイソフルラン過剰摂取(2.5〜5%)投与し、その後子宮頸部脱臼して確実に死に至らしめます。
  2. 24週齢で卵巣、腎臓、膵臓を採取します。
  3. 採取した臓器を10%中性緩衝ホルマリンに入れ、室温で24〜48時間固定します。
  4. 固定後、自動組織処理装置を使用して組織を処理し、水分を除去し、組織学的分析のためにパラフィンに埋め込みます。
    1. 組織を次のエタノール溶液にそれぞれ1時間連続して浸漬します:70%、85%、95%(2x)、および100%(2x)。
    2. 組織を新鮮なキシレンに1時間移し、続いてさらに1時間2番目のキシレン浴を行います。
    3. 組織を溶かしたパラフィンワックスに6°Cで1時間浸漬し、次にさらに1時間新鮮なパラフィンに移します。
    4. 溶融パラフィンで満たされた加熱した型の中で組織を配向し、室温で固化させます。
    5. ミクロトームを使用して、各ブロックから4つの非連続の厚さ3.5 μmの切片を切り取ります。リボンを4°Cのウォーターバスに浮かせて平らにしてから、個々のセクションを正電荷を帯びたスライドガラスに取り付けます。余分な水を排出し、スライドを3°Cの加温プレートに60分間置きます。
  5. ヘマトキシリンとエオシン (H&E) 染色を使用して、卵巣の卵胞数と膵島のサイズを評価します。
    1. パラフィン包埋組織スライドを6°Cのオーブンで1時間インキュベートします。スライドを新鮮なキシレンの入った容器に移し、30分間インキュベートしてパラフィンを溶解し、15分後にキシレンを新鮮な溶液に置き換えます。
    2. スライドをキシレン:エタノール混合物、100%エタノール、85%エタノール、および70%エタノールにそれぞれ30秒間連続して浸漬します。
    3. 水道水ですすぎ(10秒)、ハリスヘマトキシリンに染色し(30秒)、95%エタノールに浸します(3秒)。
    4. スライドを70%、85%、100%エタノール、およびキシレン:エタノール混合物にそれぞれ30秒間順次浸漬します。
    5. スライドを新鮮なキシレンに5分間浸漬し、続いてさらに5分間2回目のキシレン浴を浸して、染色を確実に固定します。
    6. 取り付け媒体を使用してカバーガラス付きのスライドを取り付けます。
  6. 腎臓切片の過ヨウ素酸シッフ (PAS) 染色を使用して、糸球体のサイズとメサンギウム マトリックスの拡張を評価します。
    1. スライドを6°Cで1時間インキュベートし、新鮮なキシレンに5分間浸漬して組織切片を脱パラフィン化します。
    2. スライドを99%、95%、70%のエタノールにそれぞれ30秒間順次浸漬します。
    3. 水道水で10秒間すすいでください。
    4. 過ヨウ素酸を10滴塗布し、10分間インキュベートします。
    5. 流水で3分間すすぎ、乾燥させます。
    6. 10滴のシッフ試薬を加え、暗室で15分間インキュベートします。
    7. 流水で3分間すすぎ、乾燥させます。
    8. ハリスヘマトキシリンを10滴加えて対比染色し、3分間インキュベートします。
    9. スライドを流水で3分間すすぎ、乾燥させます。
    10. スライドを70%、85%、100%エタノール、およびキシレン:エタノール混合物にそれぞれ30秒間順次浸漬します。
    11. スライドを新鮮なキシレンに5分間浸漬し、続いてさらに5分間2回目のキシレン浴を浸して染色を固定します。
    12. 取り付け媒体を使用してカバーガラス付きのスライドを取り付けます。
  7. 卵巣および腎臓の濾胞アポトーシス (切断カスパーゼ-3)、および腎臓の足細胞数 (WT-1+ 細胞) を免疫組織化学 (IHC) によって評価します。
    1. スライドを6°Cで1時間インキュベートし、続いてキシレン処理を30分間行います(15分後にキシレンを交換します)。
    2. スライドを100%、90%、70%のエタノールと水に順次浸漬します(各30秒)。
    3. クエン酸緩衝液(pH 6.0)中のスライドを95°Cで12分間加熱し、マイクロ波を使用して抗原部位のマスクを解除することにより、抗原検索を実行します。
    4. 1x洗浄バッファーで15分間すすぎ、5分ごとにバッファーを交換します。
    5. 内因性ペルオキシダーゼを過酸化水素でブロックして、バックグラウンド染色を回避し、ウシ血清アルブミン(BSA)を使用して非特異的結合を防ぎます。
      注:切断されたカスパーゼ-3染色では、内因性ペルオキシダーゼ活性を7分間30秒間ブロックします。WT-1染色の場合は、5分間ブロックします。
    6. 4.7.4 のように洗浄を繰り返します。
    7. 切断されたカスパーゼ-3(アポトーシス)およびWT-1(足細胞)に対する一次抗体10 μLを適用します。暗い加湿チャンバーで°Cで一晩インキュベートします。
    8. 4.7.4 のように洗浄を繰り返します。
    9. 10 μLの西洋わさびペルオキシダーゼ(HRP)結合二次抗体を室温で暗所で1.5時間適用します。
    10. 4.7.4 のように洗浄を繰り返します。
    11. 10 μLのDAB(3,3'-ジアミノベンジジン)を発色原として適用してHRP活性を視覚化し、茶色の沈殿物を生成します。
      注:切断されたカスパーゼ-3染色の場合は、DABと1分間30秒間インキュベートします。WT-1染色の場合は、45秒間インキュベートします。
    12. 4.7.4 のように洗浄を繰り返します。
    13. ハリスヘマトキシリンによる対比染色切片を、希望の強度に応じて30秒から1分間。
    14. 水道水で1〜2分間、または水が透明になるまですすぎます。
    15. スライドを70%、85%、95%、および100%エタノール(各30秒)およびキシレン:エタノール混合物(30秒)に順次浸漬します。
    16. スライドを新鮮なキシレン溶液に5分間入れ、さらに5分間2番目のキシレン浴に移します。
    17. 取り付け媒体を使用してカバーガラス付きのスライドを取り付けます。
  8. 倒立光学顕微鏡を使用して、40倍の倍率で染色切片を分析します。自動画像解析ソフトウェアを使用して、各臓器の関心領域(ROI)を選択します。
    1. 卵巣 (H&E): セクションごとに卵胞の種類を数えて分類します。
    2. 膵臓 (H&E): ROI ツールを使用して膵島を選択し、各膵島の輪郭を手動でトレースします。ROIが定義されると、ソフトウェアは面積を平方マイクロメートル(μm2)で自動的に計算します。
    3. 腎臓(H&E): ROI ツールを選択して、各糸球体房の外縁を手動でトレースすることで、糸球体領域を定量化します。面積 の測定 機能を使用して、その面積をμm2で取得します。トレース後、ソフトウェアは自動的に面積をμm2で計算します。
    4. 腎臓 (PAS)
      1. メサンギウムマトリックスを定量化するには、 閾値 ツールを使用して、糸球体内のPAS陽性(マゼンタ/ピンク)領域を特定して選択します。必要に応じて色と強度のしきい値を調整して、 PAS 染色領域を正確に選択し、プレビューウィンドウを使用して選択を絞り込みます。選択した PAS 領域を ROI として定義します。トレース後、ソフトウェアは自動的に面積をμm2で計算します。
      2. 糸球体全体の面積に対するPAS陽性面積の割合を計算することにより、メサンギウムマトリックス拡張を正規化します。
    5. 卵巣と腎臓(切断されたカスパーゼ-3のIHC)
      1. 濾胞または糸球体の構造に対応するROIを選択します。カラーマスクを適用して、色相、彩度、強度のしきい値を調整して、DAB陽性(茶色)染色を識別します。 プレビュー 機能を使用して、DAB信号を正確に選択し、しきい値設定を調整して、ヘマトキシリン(青)対比染色と非特異的バックグラウンドを除外します。
      2. 目的のしきい値を定義したら、選択をROIとして設定し、DAB正の面積(μm2)を測定します。DAB陽性領域をROI総領域で割り、100を掛けて、染色領域の割合を計算します。
    6. 腎臓(WT-1+のIHC):糸球体ごとに褐色に染色された核を数えて、足細胞数を推定します。
      注: セクションあたりの卵胞数 (平均 ± SD) は、BTBR 肥満 (7.7 ± 3.11)、移植 (5.8 ± 3.24)、BTBR 痩せ (4.6 ± 5.62) でした。セクションあたりの膵島数 (平均 ± SD) は、BTBR 肥満 (18.3 ± 8.42)、移植 (9.7 ± 5.45)、BTBR 痩せ (6.8 ± 1.72) でした。糸球体面積とメサンギウムマトリックス拡張の測定のために、動物あたり30の糸球体を評価します。データは、必要に応じて、平均±標準偏差 (SD) または平均の標準誤差 (SEM) として表されました。正規性は、Shapiro-Wilk 検定を使用して評価されました。正規分布群間の比較には、Tukey の事後検定による一元配置分散分析が適用されました。反復測定は、二元配置分散分析または混合効果モデルを使用して分析され、必要に応じてガイザー-グリーンハウス補正が行われました。非正規分布データの場合、Sidakの多重比較によるKruskal-Wallis検定が使用されました。適切な統計ソフトウェアを使用してすべての分析を実行し、統計的有意性を p < 0.05に設定します(詳細については 、 材料表 を参照)。

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結果

移植脂肪の量とプロトコルの有効性
プロトコルの標準化後、2 つの脂肪移植量 (ドナー体重に対して 5-9.9% および 10-15%) の有効性が評価され、少なくとも 1 回の妊娠を達成して生存可能な子孫を生み出すと定義されました。5〜9.9%のグループは23.8%の成功率を示しましたが、10〜15%のグループは52.2%を達成し、プロトコルの有効性が2.2倍に増加しました (図2A)。組織組成に関しては、 図2B は、BAT含有量が高いほど有効性が比例して増加し、BATが注入された総脂肪の25%を占めると100%に達しました。

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ディスカッション

この研究は、WAT と BAT の併用移植が、T2DM、DKD、および肥満の前臨床モデルにおいて、アポトーシスを減らし、足細胞数を維持することにより、高血糖の制御、体重増加と膵島細胞肥大の予防、女性の不妊症の回復、腎機能の改善のための効果的な治療アプローチであることを示しています。

以前の研究では、グルコース恒常性とインスリン感受性を調節する戦略としてWATおよびBAT移植が調査されてきましたが11、心機能の改善12,13、肥満の予防5,8、生殖能力の回復8、またはDKDの改善14、最も使用されたマウスモデルは、B6などのT2DM、DKD、お...

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開示事項

著者は利益相反を宣言しません。

謝辞

実験外科訓練センター(CETEC)とユダヤ研究教育研究所(IIEP)の技術チームの支援に感謝します。この研究は、CAPES(Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior/Coordination for the Improvement of Higher Education Personnel)からS.Bへの修士研究フェローシップ助成金、CAPES(Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior/Coordination for the Improvement of Higher Education Personnel)からM.L.Fへの直接博士号研究フェローシップ助成金によって支援されました。 FAPESP (Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo/São Paulo Research Foundation; no. 2024/08173-6) から M.O.M. への修士研究フェローシップ助成金、および FAPESP (FUNDAÇÃO DE Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo/São Paulo Research Foundation; no. 2019/12636-3) から M.T.A.B-R. への科学イニシエーション フェローシップ助成金。この研究は、FAPESP (Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo/São Paulo Research Foundation; no. 2017/23195-2 および no. 2021/02216-7) および EFSD (European Foundation for the Study of São Paulo) から É.B.R. への助成金によっても支援されました。著者は、この原稿で人工知能(AI)によって生成された作品を使用していないことを宣言します。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
0.5%アルコール度数クロルヘキシジン・ジグルコン酸溶液リオク&イアキューテ;雲母SKU 1068253
16ゲージの針ベクトン・ディキンソンSKU 305198
2.0%非アルコールクロルヘキシジンジグルコン酸溶液リオク&イアキューテ;雲母SKU 1113045
3mLシリンジベクトン・ディキンソンSKU 309657
Accu-Checkのストリップとndash;パルマロッシュ4015630981960
アルシアンブルーPASキットイージーパスSKU EP-11-20019
牛血清アルブミン(BSA)シグマ・オルドリッチA4612
CellSeensソフトウェアオリンポスセルセンス
クエン酸緩衝液pH 6.0:クエン酸一水和物+水酸化ナトリウムシグマ・オルドリッチC1909 + 28-3010
切断されたカスパーゼ3抗体細胞シグナル伝達技術9661
コバスC 111アナライザーロッシュ4528778001
クレアチニンKラボテスト96-300
エンビジョン FLEX DAB+ クロモジェンアジレント・ダコK3468
EnVision FLEX /HRP検出試薬アジレント・ダコSM802
FLEXペルオキシダーゼ遮断試薬を想像してくださいアジレント・ダコSM801
EnVision FLEX基板バッファアジレント・ダコSM803
EnVision FLEXはバッファを20倍にしていましたアジレント・ダコK800721-2
イオシンアジレント・ダコCS701
GloMax ディスカバーマイクロプレートリーダープロメガGM3000
グルコメーターアキュチェック - Performaロッシュイー 4015630980512
GraphPad Prism 8ソフトウェア(統計ソフトウェア)DotmaticsによるGraphPadです-
100% v/v イソフォリン(イソフルラン)クリスト&アキュート;リア-
ヘマトキシリンアジレント・ダコCS700
IX51光顕微鏡オリンポスIX51
単一マウス用のメタボリックケージテクニプラスト3600M021
マウントメディア - エンテランシグマ・オルドリッチ100869
マウスアルブミンELISAキットアブカムAb207620
マウス系統:BTBR。CG-Lepob/WiscJJAXラボラトリーズ4824
周期酸シフ(PAS)キットイージーパスEP-11-20014
RM255 ミクロトームライカ・バイオシステムズ14050237960
TP1020 ティッシュプロセッサーライカ・バイオシステムズTP-1020
トラマドール 50 mg/mLグラムル;ネンタール4022444
WT-1抗体サンタクルーズSC-192

参考文献

  1. Zhao, M., Cao, Y., Ma, L. New insights in the treatment of DKD: recent advances and future prospects. BMC Nephrol. 26 (1), 72(2025).
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