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研究記事

マウスの急性アルコール関連肝障害に対する青いキツネ胆汁中のタウロウルソデオキシコール酸の効果とメカニズム

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DOI:

10.3791/68763

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2025年10月17日

 ,  , 
1School of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Medicine

この記事について

サマリー

この研究では、マウスのアルコール誘発性肝障害に対する青ギツネ胆汁の肝保護効果を評価しました。TUDCA、UDCA、ビリルビン、TCDCAを含む青ギツネ胆汁は、肝損傷マーカーを減少させ、AGE-RAGE経路、AKT1、およびPPARGを介して作用し、抗炎症作用と抗酸化作用を示しました。

要約

クマの胆汁などの動物の胆汁は、その治療効果のために伝統医学で長い間使用されてきました。青ギツネの胆汁はクマの胆汁と同様に、特定の伝統的な慣習では肝保護特性を持っていると信じられています。この研究では、マウスのアルコール関連肝障害に対する青いキツネ胆汁の成分と効果を調べました。30匹の青いキツネから胆汁を採取し、乾燥粉末に加工しました。アオギツネ胆汁の化学組成は、高速液体クロマトグラフィーおよび超高速液体クロマトグラフィーと四重極飛行時間型質量分析を組み合わせて分析されました。ネットワーク薬理学を使用して、アルコール関連肝障害に関連する潜在的な生理活性化合物、標的、および経路を特定しました。アルコール関連肝障害のマウスモデルは、青狐胆汁粉末を低用量および高用量で投与された昆明マウスを使用して確立されました。血清アラニンアミノトランスフェラーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、および総コレステロール値を測定しました。肝臓組織は、ヘマトキシリンとエオシンの染色とマロンジアルデヒドアッセイによって評価されました。分子ドッキングを実行して、活性化合物とコアターゲットの間の結合親和性を予測しました。青いキツネの胆汁には、タウロウルソデオキシコール酸(TUDCA)、ウルソデオキシコール酸、ビリルビン、タウロケノデオキシコール酸が含まれていることが判明しました。病理組織学的分析により、青狐胆汁粉末の経口投与後の主要臓器に重大な異常や毒性作用は認められませんでした。青いキツネ胆汁のコアターゲットには、タンパク質AKT1、PPARG、IGF1、MMP9、およびCASP3が含まれていました。青いキツネ胆汁治療は、アルコール関連肝障害のマウスモデルにおける血清ALT、AST、コレステロール、およびMDAレベルを低下させました。ネットワーク薬理学と分子ドッキングは、青いキツネ胆汁の肝保護効果が、進行性糖化終末産物シグナル伝達経路の進行性糖化終末産物受容体に関連している可能性があることを示唆しています。全体として、青いキツネ胆汁はクマの胆汁と同様の TUDCA 含有量を持ち、AKT1 や PPARG などのタンパク質を標的としており、アルコール関連肝損傷の管理において潜在的な抗炎症作用と抗酸化作用を示しています。

概要

アルコール関連肝疾患 (ALD) には、無症候性の検査異常から肝硬変を伴う進行性肝疾患、そして最も重篤な形態では多臓器不全を伴う生命を脅かす末期肝疾患に至るまで、さまざまな肝障害が含まれます1。アルコール関連脂肪肝疾患を含む ALD の有病率は、比較的軽度で潜在的に可逆的な形態の ALD1 を表しています。アルコール関連肝炎は炎症を特徴とし、無症候性脂肪性肝炎から急性黄疸を呈し、短期死亡率の高い肝不全に進行する可能性のある急性アルコール性肝炎まで、臨床症状を有する1.アルコールとその代謝産物は、ミトコンドリア脂肪酸のβ酸化の阻害や脂肪生成の刺激など、いくつかのメカニズムを通じて脂質代謝を変化させ、脂質蓄積(脂肪症)を促進します2。エタノールはトランスフェリン受容体 1 の発現をアップレギュレートし、それによって肝臓の鉄取り込みを増加させます2。アルコールとアセトアルデヒドはどちらも肝細胞に直接損傷を与え、酸化ストレスの増加、s-アデノシルメチオニン再生の阻害、損傷関連分子パターン(DAMPS)の放出、門脈循環における細菌エンドトキシンへの曝露、およびタンパク質付加物の形成につながる可能性があります2。ALD の管理は、多数の病原性経路が関与するため、依然として困難です3.調査中の将来の戦略には、経験的プロバイオティクス、成長因子、抗酸化物質、炎症関連因子を標的とするモノクローナル抗体、およびテクノロジーで強化された行動介入が含まれます。ただし、追加の包括的な治療戦略はまだ検討されていません。

新たな証拠は、動物の胆汁がその抗炎症作用と抗酸化作用により、アルコール関連肝疾患 (ALD) の管理に治療の可能性を秘めている可能性があることを示唆しています 4,5。動物の胆汁は、伝統的な漢方薬 (TCM) の重要な成分です 6。中医学では、動物の胆汁は肝臓と胆嚢の機能を強化し、痛み、発熱、咳、炎症を和らげるために使用されます。肝硬変を含む肝疾患の管理に使用されています6。動物の胆汁は抗炎症作用と抗酸化作用を持ち6、炎症と酸化ストレスはALDの病因において中心的な役割を果たします7。胆汁酸の補給は、脂肪肝を改善することも報告されています8。現在、クマ胆汁は最も広く使用されている胆汁由来薬であり、ウルソデオキシコール酸 (UDCA) とタウロコール酸 (TUDCA) が主な有効成分です 6,9。特に、TUDCAは、羊、牛、鶏、ヘビなどの他の動物の胆汁には含まれていません6。TUDCA は、急性肝障害の治療における治療の可能性を実証しています10。現在、TUDCAは、クマの胆汁排出(動物福祉の懸念を引き起こす)、化学合成(コストがかかる)、または鶏の胆汁粉末のクマ胆汁相当物への生体内変換(本物のクマの胆汁と同等ではない)によって得られます11,12。ホッキョクギツネとしても知られる青いギツネ (Alopex lagopus) は、主に毛皮のために飼育下で飼育されています。中国は世界3大毛皮衣料品輸出国の1つであり、収穫された青いキツネの内臓は通常廃棄されます13。これは、胆嚢を潜在的な医療資源として評価する機会となります。青いキツネとクマはどちらも肉食動物であり、消化生理機能、代謝、食事に類似点があり、胆汁の組成と効果も類似している可能性があることを示唆しています。しかし、この可能性はまだ探られていない。

したがって、この研究は、ALD のモデルにおける青ギツネ胆汁の薬理作用と根底にあるメカニズムを調べることを目的としました。この発見は、クマの胆汁代替品を開発するための新たな研究手段を提供し、青ギツネ胆嚢を医療資源として利用するための科学的根拠を確立し、産業廃棄物を価値ある製品に変換し、将来の治療法開発に情報を提供する可能性があります。

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プロトコル

研究プロトコルは、黒竜江中医薬大学の動物実験倫理委員会によって審査され、承認されました (承認 #2023021101)。すべての動物実験は、ARRIVEガイドライン(Animal Research:Reporting of In Vivo Experiments)ガイドライン、および実験動物のケアと使用に関する関連する国および機関のガイドラインに従って実施されました。この研究は動物実験を含んでいたため、インフォームドコンセントは適用されませんでした。すべての動物の繁殖と毛皮の収穫手順は、野生動物の繁殖管理に関する中国の技術規則を厳格に遵守しました。この研究は、中国の黒竜江中医薬大学の動物実験倫理委員会によって承認されました (承認 #2023021101)。

青いキツネの胆汁サンプルの前処理
青いキツネの胆汁の資源は 材料表に記載されています。合計30匹の青いキツネ(Vulpes lagopus)を電気ショックで安楽死させた後、毛皮を採取して胆嚢を採取した。青いキツネの胆嚢は楕円形で、上部が狭く、下部が腫れています。その外面は暗褐色で、目に見えるひだがあり、カプセル膜は薄いです。胆汁はすぐに 1 mL の滅菌使い捨て注射器を使用して吸引され、色は濃い黒または濃い緑色に見えました。次に、胆嚢を37°Cで48時間乾燥させて、乾燥した青いキツネ胆汁粉末を得ました(図1)。得られた胆汁粉末は黄褐色の色合いを示し、光沢がありもろい質感を示しました。胆嚢あたりの乾燥胆汁粉末の平均収量は、約0.82±0.30gでした。サンプル調製のために、青いキツネ(上記のように)またはクマ( 材料 表を参照)のいずれかからの乾燥胆汁粉末250 mgを1 mLの70%クロマトグラフィーグレードメタノールに溶解しました。溶液を超音波処理(40 kHz、300 W)し、0.22 μmの膜でろ過し、最終容量50 mL(すなわち、5 mg / mL)に希釈し、その後の分析のためにさらに0.5 mg / mLの作業濃度に希釈しました。実験ワークフロー全体を補 足図1にまとめます。

本研究では、動物実験に用いた青キツネ胆汁粉末の用量範囲は、以前の毒性評価および薬理学的研究に基づいて5〜10 g/kgであり、これらの濃度で有意な副作用は観察されませんでした14,15。胆汁粉末の調製中に、胆嚢を37°Cで48時間乾燥させた。ただし、乾燥時間は地域の湿度やサンプル量によって異なる場合があるため、水分含有量をチェックして完全に脱水する必要があります。溶解については、クロマトグラフィーグレードのメタノール中の濃度 5 mg/mL が HPLC および UPLC-Q-TOF-MS 分析に最適です。不完全な溶解や粒子状の残留物は分析精度に影響を与える可能性があり、追加の超音波処理またはろ過が必要になります。既知の制限は、青いキツネの季節的、食事、および個々の生理学的差異による胆汁組成の変動であり、TUDCAやUDCAなどの活性化合物の相対的な存在量に影響を与える可能性があります16。したがって、一貫した成分プロファイルを確保するために、薬理学的使用前にクロマトグラフィープロファイリングによるバッチバリデーションを推奨します。

ネットワーク薬理学的分析
ブルーフォックス胆汁の化学組成は、高速液体クロマトグラフィー( 材料表を参照)および超高速液体クロマトグラフィーと四重極飛行時間型質量分析(UPLC-Q-TOF-MS)を組み合わせて分析しました。HPLC は、SB-C18 カラム(4.6 mm x 150 mm、5 μm)を使用し、移動相を 0.03 M リン酸二水素ナトリウム(リン酸を使用して pH を 4.4 に調整)を相 A、メタノール( 材料 表を参照)を相 B として使用して実施しました(表 1)。検出波長は 210 nm、移動相流量は 1.0 mL/min、カラム温度は 40 °C でした。 注入量は 10 μL でした。UPLCTM HSS T3 カラムを使用して UPLC-Q-TOF/MS 分析を実施しました( 材料表を参照)。移動相は、アセトニトリル(A)-0.1%ギ酸水溶液(B、 材料表を参照)から構成されました。グラジエント溶出プログラムは、4 mL/分の流速で 0-25.0 分、98%-2% A、および 25.0-28.0 分、2%-2% A でした。カラム温度は 35 °C に維持しました。 質量分析は、エレクトロスプレーイオン化源(ESI)源を使用して、溶媒ガス流量650 L / h、溶媒ガス温度350 °C、コーンガス流量50 L / h、イオン源温度120 °C、キャピラリー電圧2.8 kV(正イオンモード)および2.0 kV(負イオンモード)、 コーン電圧は25V、衝突エネルギーは6eVです。スペクトルは0.02秒間隔で0.2秒ごとに収集されました。ロイシン-エンケファリン( 材料表;[M+H]+=556.2771)を、濃度40 fmol/μL、流量15 μL/minの基準校正液として使用した17。

化学組成分析とターゲット予測
青キツネ胆汁の有効成分は、内部標準としてオーロコール酸とタウロウルソデオキシコール酸ナトリウム( 材料表を参照)を使用して、HPLCおよびUPLC-Q-TOF / MSを使用して同定されました18。同定された化合物の構造式は、PubChemデータベース(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)から取得されました。潜在的な生理活性標的を探索するために、青ギツネ胆汁の有効成分をPharmMapperデータベース(http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/)で照会し、関連する遺伝子標的を特定しました。

アルコール性肝障害とアルコール誘発性肝障害をキーワードとして、GeneCards(https://www.genecards.org/)およびOMIM(https://omim.org/)データベースから疾患関連遺伝子を取得しました。GeneCardsデータベースでは、ターゲットは関連性スコアに従ってスクリーニングされ、しきい値は≥20に設定されました。この一般的に使用される経験的カットオフにより、感度と特異性のバランスが確保され、関連性の低い遺伝子やノイズの多い遺伝子を除外しながら、潜在的に関連する遺伝子のほとんどを保持し (再現率が高い) します (高精度)。対照的に、OMIMデータベースでは、強力な遺伝的証拠を持つターゲットをキャプチャし、それによってGeneCardsの計算関連性スコアを補完するため、追加のフィルタリングは適用されませんでした。得られたターゲットデータをマージして複製し、ALDに関連するターゲットを特定しました。有効成分ターゲットと疾患ターゲットは、Venny 2.1.0(https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html)を用いて可視化して比較した。交差点は、ALDに対する青ギツネ胆汁の潜在的な標的として特定され、STRINGデータベース(http://version10.string-db.org/)にインポートされました。STRINGデータベースでは、相互作用ネットワークはデフォルトのパラメータ(中信頼度スコア≥0.4)で構築され、可視化の明瞭さを向上させるためにフリーノードが非表示になりました。遊離ノードを隠してタンパク質間相互作用(PPI)ネットワーク図を生成し、Cytoscapeソフトウェア(バージョン3.9.1)を使用して視覚化しました。トポロジカル解析を行って度値を算出し、Database for Annotation, Visualization, and Integrated Discovery (DAVID, https://david.ncifcrf.gov/) を用いて、次数値が最も高い6つのターゲットをp < 0.05の有意性閾値で特定しました。経路濃縮解析には、京都遺伝子ゲノム百科事典(KEGG)データベースを使用しました。

分子ドッキング
分子ドッキングを実行して、コア標的タンパク質と青ギツネ胆汁の生理活性成分との間の相互作用を評価しました。コア標的タンパク質の三次元構造は、構造バイオインフォマティクス研究共同研究(RCSB)タンパク質データバンク(https://www.rcsb.org/)から取得し、胆汁成分の構造はPubChemデータベース(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)から取得しました。ドッキングシミュレーションは、分子動作環境(MOE)ソフトウェア(バージョン2022.02)を使用して実施されました。AKT1については、結晶構造(PDB ID:4EKL)をダウンロードし、MOEでの前処理には、水分子と元のリガンドの除去、生理的pH(7.0)でのプロトン化による水素添加、エネルギーの最小化が含まれていました。リガンド構造(TUDCA、UDCA、TCDCA、TCA、およびビリルビン)をPubChemから取得し、ドッキング前にエネルギーを最小限に抑えました。ドッキングプロセス中に、複数のリガンドコンフォメーションが生成され、各コンフォメーションはさまざまな空間方向で受容体の結合ポケットに配置されました。ドッキングは、初期配置にロンドン dG、スコアリング関数としてアフィニティー dG を使用して、誘導フィット プロトコルを使用して実行されました。各リガンドに対して30のコンフォメーションが生成され、力場の最適化によって最終的なポーズが改良されました。他のすべてのパラメータは、それ以上の微調整を行わずに MOE のデフォルトに設定されました。各リガンドコンフォメーションと受容体の間の親和性は、ソフトウェアのスコアリング関数を使用して評価されました。ドッキング結果は、自由エネルギーの結合によって評価され、代表的な結合モードとして、最大のクラスターで最も負のエネルギーのコンフォメーションが選択されました。最も強い親和性と最適なコンフォメーションを持つ結合モードを視覚化のために選択しました。-4.25 kcal/mol未満の親和性値はリガンド-ターゲット結合を示し、-5.0 kcal/mol未満の値は中程度の結合を示し、-7.0 kcal/mol未満の値は強い結合親和性を示します 19。

ALDのマウスモデル
この研究では、30匹の特定の病原体を含まない(SPF)昆明マウス(18〜22 g、生後6〜8週、オス15頭、メス15頭)を購入しました。動物は、相対湿度が60%±10%の25±2°Cの管理された条件下で飼育され、食物と水に 自由 にアクセスできました。実験の前に、マウスを1週間順応させました。

ALDモデルは次のように確立されました。70% v/v エタノール溶液は、70.21 mL の無水エタノールをメスフラスコに測定し、超純水を最終容量 100 mL まで添加することによって調製されました。溶液を磁気スターラーで1分間撹拌し、相分離が観察されないまで5分間放置した。強制経口投与量は 2 mL/kg 体重で、1 日 1 回、連続 7 日間投与されました。7日目の朝、最後の強制経口投与の4時間後に、さらなる分析のために血液サンプルと肝組織を採取しました。肝障害の典型的な指標を評価することにより、モデルの確立を確認しました。アラニンアミノトランスフェラーゼ (ALT)、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ (AST)、総コレステロール (T-CHO)、およびマロンジアルデヒド (MDA) の血清レベルが測定されました。さらに、肝細胞の形態、細胞質空胞化、壊死、および炎症細胞浸潤を評価するために、ヘマトキシリンおよびエオシン (H&E) 染色を使用した肝組織病理学的検査を受けました。マウスはランダムに5つのグループに割り当てられました(グループあたりn = 6):ブランク対照グループには2 mL / kgの蒸留水が投与されました。モデル群には、治療なしで 2 mL/kg 70% エタノールが投与されました。陽性対照群には、0.4 g/kg の肝保護錠剤が投与されました ( 材料表を参照)。高用量の青狐胆汁粉末群には、10 g/kg の青狐胆汁粉末が投与されました。低用量のブルーフォックス胆汁粉末群には、5 g/kg の青狐胆汁粉末が投与されました。ブランク対照を除くすべてのグループに、アルコール性肝障害を誘発するために、70% エタノール (2 mL/kg) を 1 日 1 回連続 7 日間経口投与しました。エタノール投与の4時間後、7日目にそれぞれの治療(肝保護錠または青狐胆汁粉末)を投与し、その後の実験を実施しました。ブランク対照群は、実験全体を通して蒸留水を受け取りました。

血清トランスアミナーゼ(ALTおよびAST)および総コレステロールキット(T-CHO)の測定
血液サンプルを1,000 x g で4°Cで15分間遠心分離し、血清を得た。サンプルは分析まで-20°Cで保存しました。製造元の指示に従って、市販のキットを使用して、ALT、AST、およびT-CHOレベルを測定しました( 材料表を参照)。

体重モニタリング
エタノール投与を7日間連続した後、7日目に治療を行い、朝の投与から4時間後に実験を行いました。体重は観察期間中、1日2回記録されました。非空腹時体重は、投与後 1、2、3、5、7、10、および 14 日目に電子分析天びんを使用して測定されました。

組織サンプル処理
投与後14日目に、体重と残りの食物摂取量を記録しました。その後、動物は午後に水に自由にアクセスできるように絶食されました。翌日(12〜16時間の絶食期間の後)、頸部脱臼による安楽死の前に空腹時体重を測定しました。肉眼的な病理学的検査は、心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓、副腎、脳、胃、腸、精巣、前立腺、卵巣、子宮を含むがこれらに限定されない主要臓器の形態学的変化を評価するために実施されました。心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓、胃、腸からの組織サンプルをブランク対照群 (CN) と低用量の青狐胆汁群 (LH) から無作為に採取し、4% パラホルムアルデヒドに固定し、パラフィンに包埋し、切片化し、組織病理学的評価のためにヘマトキシリンとエオシン (H&E) で染色しました。組織切片を検査し、顕微鏡下で画像化しました。

H&E染色
肝臓検体をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に4%パラホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに包埋し、切片化した。切片をキシレンIおよびIIで脱パラフィンし、エタノール濃度(100%、95%、85%、および75%)の降順で再水和し、水で洗浄し、分化し、再度洗浄し、ブルーイング溶液を使用してブルードしました。すすぎ後、切片を85%および95%エタノールでそれぞれ5分間脱水し、エオシンで5分間染色し、無水エタノールI、II、およびIII(各5分)で脱水しました。最後に、切片をキシレンIおよびII(各5分)でクリアし、中性ガムでマウントしました。画像は光学顕微鏡(100倍)を使用して取得しました。

肝組織中のマロンジアルデヒド(MDA)の測定
肝臓検体を組織グラインダーを使用して 9 容量の生理食塩水で均質化しました。ホモジネートを700 x g で4°Cで10分間遠心分離した。 MDAアッセイは、製造元の指示に従って、市販のキット( 材料表を参照)を使用して上清に対して実行されました。

統計分析
データは、標準偏差 (SD) ±平均値として表示されます。グループ比較は、分散分析 (ANOVA) とそれに続く最小有意差 (LSD) 事後検定を使用して実行されました。両側の p 値 <0.05 は統計的に有意であると考えられました。

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結果

青ギツネ胆汁中の活性化合物の同定
青いギツネとクマはどちらも肉食動物であり、同様の消化生理機能と代謝を共有しています20。したがって、それらの胆汁は同等の組成を持っている可能性があります。上記のクロマトグラフィー条件を使用して、各化合物を十分に分離しました(図 2)。この実験では、TUDCA標準21 の保持時間を使用して、青いキツネ胆汁中のTUDCAを同定しました(図2)。約10分、12分、および21分の保持時間でのピークはTUDCAとして同定され、一貫した保持時間を示し(表2)、青いキツネ胆汁中のTUDCAの存在を裏付けました。青ギツネ胆汁とクマ胆汁は、一貫した保持時間(相対標準偏差(RSD)<2%))と同様の成分比率を持つ10のピークを共有していました。

UPLC-Q-TOF/MS を使...

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ディスカッション

2018年の世界保健機関(WHO)のアルコールと健康に関する世界現状報告書によると、中国の一人当たりのアルコール消費量は2005年の4.1リットルから2016年には7.2リットルに増加し、76%増加した。慢性的なアルコール摂取によって引き起こされる ALD は、依然として肝臓関連の罹患率と死亡率の主な病因です22。マウスで四塩化炭素(CCl4)誘発性肝障害モデルを確立し、青いキツネの胆汁がAST、ALT、T-CHO、およびMDAレベルを有意に低下させることを観察しました23。一貫して、現在の研究の薬理学的実験は、青いキツネ胆汁がマウスの ALD に対して治療効果を発揮することを実証しました。

この研究では、青狐胆汁粉末を濃度 27.4%、用量 40 mL/kg で 1 日 2 回、14 日間投与した急性毒性評価により、良好な安全性プロファイルが明らかになりました。重大な死亡率、重度の毒性、または長期...

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開示事項

著者は利益相反を宣言しません。

謝辞

この研究は、中国青少年科学基金の国家自然科学基金(NO.82204562)の支援を受けました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
0.03Mリン酸二水素ナトリウム該当なし該当なしHPLC移動相A
水中のギ酸0.1%フィッシャーサイエンティフィック、米国該当なしUPLC 用移動相
0.22 & ミュー;Mメンブレンフィルター該当なし該当なしサンプルろ過
4%パラホルムアルデヒド該当なし該当なし組織固定
アセトニトリル、クロマトグラフィーグレードフィッシャーサイエンティフィック、米国該当なしUPLC 用移動相
ALT、AST、T-CHO キットShanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.、中国該当なし血清生化学分析
分析天びん該当なし該当なし動物の体重測定
オーロコール酸中国食品医薬品管理研究所該当なしHPLC/MSの内部標準
クマ胆汁粉末中国食品医薬品管理研究所、北京該当なし参考資料
ビリルビン指定なし該当なし胆汁中の活性化合物が同定された
青いキツネSuihua Fox Farm, 黒竜江省, 中国該当なし胆汁の供給源
青いキツネ胆汁粉末社内準備該当なし成分分析用サンプル
C18 HPLCカラムAgilent Technologies、米国ZORBAX SB-C18 (4.6×150 mm、5 & ミュー;m)HPLC分離
サイトスケープhttps://cytoscape.org/バージョン 3.9.1ネットワークの可視化とトポロジー解析
デビッドNIHのhttps://david.ncifcrf.gov/GO/KEGG濃縮分析
ジーンカードワイツマン研究所https://www.genecards.org/疾患関連遺伝子検索
ヘマトキシリンとエオシン (H&E)該当なし該当なし組織学的染色
HPLCシステムAgilent Technologies、米国1200 インフィニティ胆汁の組成分析
昆明マウス(SPF、18–22g)遼寧長生バイオテクノロジー株式会社SCXK (遼) 2020-0010アルコール性肝障害モデル
ロイシン-エンケファリンSigma, アメリカ該当なしMS校正標準(40 fmol/&μ;L)
MDA検出キットShanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.、中国該当なし肝臓の酸化ストレス測定
メタノール、クロマトグラフィーグレードフィッシャーサイエンティフィック、米国該当なしサンプル前処理用溶媒
萌えケミカルコンピューティンググループ環境省 2022年02月分子ドッキング解析
オミムNIHのhttps://omim.org/疾患関連遺伝子検索
光学顕微鏡該当なし該当なし組織学的観察
ファームマッパーECUSTのhttp://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/活性化合物ターゲットの予測
燐酸該当なし該当なし移動相のpH調整
パブケムNCBIのhttps://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/化合物構造検索
RCSBプロテインデータバンクhttps://www.pdbus.org/該当なしタンパク質3D構造ソース
冷蔵遠心分離機該当なし該当なし血清と組織の分離
タウロウルソデオキシコール酸ナトリウム(TUDCA)中国食品医薬品管理研究所該当なしHPLC/MSの内部標準
糸EMBLのhttp://version10.string-db.org/タンパク質間相互作用解析
ユニプロットEMBL-EBIhttps://www.uniprot.org/ターゲットの標準化
UPLC-Q-TOF-MSシステムWaters, 米国UPLC HSS T3 (100×2.1 mm、1.8 & ムー;m)コンポーネントの識別
ヴェニーCSICのhttps://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.htmlターゲット交差点の視覚化

参考文献

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