全層骨軟骨欠損の羊モデルの確立と評価

サマリー

ここでは、羊の膝における制御された骨軟骨病変を生成する統合プロトコルを提示し、骨および軟骨組織再生研究に適した実験モデルを構築します。プロトコルは、動物福祉への影響と結果のばらつきを最小限に抑える技術を用いて、大腿骨頭に全層骨軟骨欠損を誘発する方法を示しています。

要約

加齢、外傷、遺伝的素因、生活習慣が人間の軟骨の劣化に影響を与えます。一度怪我をすると、日常活動による継続的な侮辱は、変形性関節症のような病的状態を引き起こす可能性があり、これは世界中の障害や社会経済的損失の主な原因です。関節軟骨損傷を治療するすべての整形外科医の主な目標は、病変の範囲を解剖学的に縮小し、軟骨表面を修復し、関節の安定性を回復することでした。動物モデルは治療薬の開発に不可欠ですが、軟骨欠損に関する現行モデルは満足のいくものではありません。羊の骨軟骨病変は、人間の関節環境における軟骨や骨の回復を助ける新しい治療法やバイオマテリアルの試験に貴重なモデルです。この研究は大型動物における急性骨軟骨欠損を誘発するための効率的なプロトコルを確立しました。両内側大腿骨蓋頭に標準化された病変が形成された。片方の膝が無作為にゼラチンメサクリロイル治療を受け、対側の膝が対照群として割り当てられました。手術から6か月後、大腿骨の顆部分が切除され、解離された膝関節は脱石灰され、パラフィンに埋め込まれ、ヘマトキシリンとエオシンで染色された切断が施されました。病変の評価にはスコアが用いられました。この方法により、損傷誘導後の即時の巨視的観察が可能になります。さらに、このモデルは臨床軟骨欠損を効果的に再現し、その病理学の研究や革新的な治療法の開発に貴重なモデルを提供します。

概要

軟骨は骨格系の機械的能力を維持するために不可欠であり、骨格の下顎関節で骨の間に摩擦のない表面を提供し、関節表面の侵食を防ぐ役割を果たします^。軟骨がこれらの過酷な機械的機能を果たす能力は、特に非常に高い水分含有量を持つ細胞外マトリックスの独特な組成と組織に大きく依存しています。水は関節軟骨の構造と機能において重要な役割を果たし、その構成の約70〜80%を占めています。水は圧縮中の荷重を支える主な要素です。組織が圧縮力に耐えられるかどうかは、マトリックス内で水がどのように構造化され、どのように制限されているかに依存します。この組織化は、コラーゲンやプロテオグリカンなどの軟骨の主要な高分子、特にヒアルロン酸結合集合体と水の相互作用によって可能となります^。これらは水の流れを秩序立てて制限する封じ込め構造として機能します。この相互作用により、組織は剛性だけでなく、変形後の回復力や回復力も得られます。遊離水、結合水、高分子マトリックスの相互作用が軟骨の生体力学的挙動の核を構成します^。

関節に到達する物理的・機械的荷重を支え分散する驚くべき能力があるにもかかわらず、損傷した関節軟骨(AC)は軟骨細胞の有糸分裂活性が低く、組織血管形成が不十分であるため、自然修復の可能性が限られています^。関節損傷は通常、組織の95%を占める細胞外マトリックス(ECM)分子やタンパク質の進行性喪失と関連しており、これらは^AC3に生体力学的特徴を与えます。ECM成分の合成と分解のバランスが崩れ、異化代謝的プロセスへとシフトすると、世界的に最も一般的な変性関節症(OA)を引き起こすことがあります。変形性関節症は成人人口の約10〜12%に影響を及ぼし、痛みを引き起こし、可動性を制限し、患者の自律性を著しく低下させます⁴.変形性関節症は、生涯にわたる関節への蓄積的な損傷により高齢者でより多く見られます。しかし、性別、遺伝的素因、肥満、日常生活など、さまざまなリスク要因が臨床疾患の発症に関連して^います。これまで、OA治療の治療法は臨床的症状管理と最も重症例での関節置換術にとどまって^{きました。}OAを効果的に治療するための強固で再現性が高く信頼できる治療戦略がないため、関節軟骨損傷に関連する問題を理解し対処するための革新的なアプローチが研究されています。

関節炎性関節の修復、再生、関節運動の強化のために、再生医療の進歩が損傷したAC ^6,7の回復に新たな希望として浮上しています。自家軟骨細胞の使用とECM移植および幹細胞の関節内注射を組み合わせることは、^{この分野における}現在の最先端を示しています。これらのアプローチの主な課題は、移植細胞による適切な分化と機能的なECM合成を確保することです。自家軟骨細胞は線維軟骨を形成したり肥大状態に進行し、AC(軟骨)の生理的特徴を再現できない新たな機能障害組織を作り出し、回復が不完全でしばしば後期の劣化を引き起こします¹¹。生体材料は組織再生中の細胞行動を誘導するために用いられ、細胞が新しい自然な機能的な細胞外マトリックスを付着・合成するための一時的な足場を提供します。12,13,14。軟骨工学に理想的な生体材料は、特に軟骨下骨との強固な統合を保証しなければなりません。この界面での失敗は長期的な修復を損なうためです。しかし、骨軟骨足場の軟骨と骨層間の結合が弱く、宿主組織との統合が不十分であることが依然として大きな課題となっています¹⁵。足場は骨軟骨の構造を模倣しようと試みますが、複雑な界面微細構造の再現は依然として困難です。これは、軟骨と骨の再生を同時に支えつつ界面の安定性を維持できる生物学的特性を持つ足場の研究開発の重要性を強調しています¹⁶。軟骨組織の重要な成分であるコラーゲン由来のゼラチンは、細胞結合モチーフや生分解性などの特性を持ち、骨軟骨病変の治療における再生因子と組み合わせることで支持的な生体材料としての可能性を示唆しています。メサクリル無水物で化学修飾してゼラチンメサクリロイル(GelMA)を生成すると、光交橋可能となり、注入およびその場光重合が可能となり、再生医療への応用における機械的安定性^{が向上します。}

骨軟骨病変は再生能力が限られており、臨床的な課題となっています。膝関節損傷の大型動物モデルを用いた前臨床研究は、疾患メカニズムや治療結果に影響を与える変数を体系的に評価できるため、トランスレーショナルリサーチに不可欠です。よく使われる種には豚、ヤギ、犬、馬、羊などがあり、それぞれが実験設計で考慮すべき特有の利点と制限を持っています。さらに、これらすべての種は人間に見られるように、軟骨および骨軟骨欠損の内因性修復が限定的であること^{を示します。}これらのモデルが人間の転帰を予測できるようにするためには、解剖学的、生理学的特徴、生体力学的特性などの関連パラメータを再現しなければなりません¹⁸。比較のために、大腿軟骨のヒト関節軟骨の厚さは1.8から2 mm¹⁹の範囲で、治療が必要な軟骨病変の直径は通常10 mm以上^です。

豚モデルは、関節の大きさ、軟骨の厚さ、耐重要件が人間によく似ているため、軟骨および骨軟骨再生研究に利点を提供します¹⁸。ゲッティンゲン・ミニピッグのようなミニチュア豚の品種は扱いやすく、²¹歳の18〜22ヶ月の間に骨格成熟に達します。軟骨の厚さは1〜2mmの範囲で、6〜8mmの欠損は^18mmまで作られます。骨の特徴、例えば小梁の厚さ、骨の接近速度、コラーゲン繊維の組織は、人間と同等^です。しかし、豚モデルには限界もあります。ミニチュア品種でも膝関節(スティフル関節)が人間より小さいため、大きな実験的欠陥の発生が制限されています。さらに、多くの研究は維持費のため骨格が未成熟な動物を用いており、修復の可能性を過大評価する可能性がある²³。

ヤギは関節の解剖学、生体力学、軟骨の厚さを人間と似た形で見ることができます専門的な設備を必要としず、扱いやすく、比較的安価^です。ヤギ軟骨の厚さは0.8mmから2.0mmの範囲で、最も報告されている重大欠損の大きさは6mm26です。しかし、品種、サイズ、性別によって軟骨の厚さには大きなばらつきがあり^、結果が一貫性に欠けることがあります軟骨と軟骨下骨の比率や小梁骨構造も人間と比較可能です²⁸。骨格の成熟は比較的遅く、²⁹歳の24か月から36か月の間に起こります。生体力学的観点から見ると、ヤギ膝は人間と同様に関節の圧力や周期的荷重を受け^ますが、歩行時の膝の屈曲はより大きく(ヤギは50°-70°、人間は<30°)、明確な接触領域³⁰が生じます。この差と高いピーク圧が組み合わさり、軟^骨修復の効率低下に寄与する可能性があります。

大型動物モデルの中で、犬はリハビリテーション、関節固定、トレッドミルウォーキング、水泳、制御された荷重負荷運動のトレーニングに耐えられる能力で際立っています¹⁸。関節軟骨の厚さは0.9mmから1.3mmの範囲で、臨界欠損の大きさは約4mmであり、ヒ^{トモデルとの}直接比較は制限されています。骨格成熟は³¹歳の8.5か月から13.7か月の間に起こります。解剖学的には、犬の膝は人間の膝とは異なり、生体力学、荷重パターン、成熟度の違い^が結果の外挿を複雑にしています。これらの解剖学的差異や小さな欠損大きさにもかかわらず、犬モデルはリハビリテーションプロトコルや人間に似た自然軟骨病理の研究において依然として価値があります。しかし、その実験的使用は倫理的配慮により制限^{されています。}

馬モデルは軟骨修復研究における最大の動物モデルであり、自然に加齢や外傷に伴う軟骨病変や変形性関節症を人間に似たものに発症^します。馬は人間と同等の解剖学的および生体力学的特徴を示しており、例えば直立した膝関節、大きな関節サイズ、人間の軟骨に近い2〜3mmの軟骨厚、歩行中の膝の完全な伸展、骨密度も同等^です。骨格の成熟は24か月から48か月の間に起こり、一般的に研究される欠損の大きさは6から20^{mmの範囲です。}制限としては、走行時に馬の窒息関節にかかる高い垂直荷重があり、これによりインプラントが人間よりも大きな力にさらされ、長期的な治癒を妨げます³⁵。さらに、取得および維持コストが高く、専門的な^{施設が必要となります}。

羊は入手しやすさ、穏やかな性格、関節手術への耐性^、取り扱いの容易さから、軟骨修復研究のモデルとして広く使われています。羊の骨格成熟は通常、²⁵歳前後で2〜3歳に達します。さらに、卵の膝は人間の膝関節と解剖学的および生体力学的に類似性を示しています³⁸。内側大腿骨の軟骨厚は0.7mmから1.7mmの範囲で、骨密度や接触圧力も比較可能ですが、³⁹番羊の方が骨容積比が高いです。軟骨の厚さが減少するため、誘発性欠損はしばしば軟骨下骨にまで及ぶため、このモデルは骨軟骨欠損の研究により適しています³²。直径6〜8mmの病変は、通常、大腿骨蓋頭や滑車³²などの部位に形成されます。さらに、羊モデルは同一動物内で処理部位と対照部位を比較できるため、宿主関連の変動を減らし、一貫性と再現性を向上させ、必要な^動物数を最小限に抑えるという二者間研究の利点を提供します。各モデルは人間の生理学や生体力学に異なる類似度を示します。したがって、モデル選択は生物学的関連性、実用的実現可能性、倫理的考慮のバランスを取るべきです。本研究では、季節性無乳期に評価された12か月齢の未産メスの羊を含めました。

本研究は、大型動物における急性骨軟骨欠損を発生させるための効果的なプロトコルを設計することを目指しました。プロトコルでは、再生医療研究に適したモデルを構築するために全層骨軟骨病変を作成することが目的です。さらに、GelMAハイドロゲルの応用は組織治癒のガイドとして、また再生分子や細胞の送達方法として検討されています。このプロトコルは、羊膝関節軟骨に骨軟骨病変を作るための外科的手順を概説しています。これは、再生医療の他の大型動物モデルにおける類似の損傷の誘導を含む、さまざまな組織工学的応用に適応可能です。

プロトコル

この研究は研究倫理委員会から承認され、2023年6092250823号の倫理的発表証明書を授与されました。本研究では、12か月のホワイトサフォーク州の雌羊9頭が選ばれました。この欠損は各動物の両内側大腿骨蓋に生じました。空の欠陥が制御装置として使用されました。各動物は片方の膝をGelMA治療に無作為化し、もう一方を対照群として割り当てました。この戦略により、自然な再生能力を評価し、遺伝的要因や骨格の成熟度などの個々の変異の影響を軽減することができました。動物たちは6か月間追跡され、硝子軟骨形成の評価が行われました。

1. 麻酔手技

1. 手術の約24時間前から動物に餌と水を与えないようにしてください。
2. 動物には筋内メペリジン4mg/kgとミダゾラム0.3mg/kgを併用して前投薬します。
3. 使用の1日前に麻酔用ヴェポライザーを充填し、部屋が空いた状態で、職業への曝露リスクを最小限に抑えるために保護用の手袋を着用してください。
4. 各処置前に麻酔回路の漏れを確認し、すべての操作は施設のバイオセーフティガイドラインに従い、通気の良い場所で行ってください。
5. 15分後に18Gのカテーテルで動物をカニューレし、乳酸リンガー溶液を10 mL∙^kg-1∙^h-1の濃度で投与します。
6. 1%プロポフォールを4 mg/kgの用量で静脈内麻酔を投与します。
7. 動物は7.5〜8.0mmのカフ状気管内チューブで挿管し、FiO₂1.0、流量50 mL/kgで酸素を供給する半閉鎖型循環呼吸システムで自然換気を維持します。
8. 部分静脈内麻酔(PIVA)技術を用い、プロポフォールを0.1mg・^kg-1min-1の連続点滴として維持し、適切な外科的麻酔面を得るためにイソフルラン濃度のみを調整します。処置中は麻酔の深さを監視してください。
9. 神経局在装置の誘導を受けて大腿神経および坐骨神経の神経周ブロックを行います。各ブロックごとに2%リドカインを0.2 mL/kg投与します。
   注意:手術は、動物が外科的麻酔下にあることが確認された後にのみ開始すべきです(しっかりとした蹄をつねっても反応がなく、顎の張りもありません)。

2. 生体内での外科的手技

1. 剃った膝は外用消毒剤クロルヘキシジングルコン酸塩で消毒し、手術室で背側デキュビトゥス姿勢に置きます。
2. 動物の膝に触れて関節腔を特定し、切開の正確な位置を特定します。外側大腿上顆の遠位から始まり、脛骨結節の内側で終わる二重湾曲の皮膚切開を行います。
3. 膝蓋腱、膝蓋骨、膝蓋靭帯、関節包の内側部分を特定します。カプセルを切開して内側大腿骨蓋を露出させます。膝の関節関節の最も遠位を視覚化するために膝を過屈させてください。
4. 動物の顆頭付近に約3〜5cmの外科的切開を入れます。皮膚の下の組織層を取り除き、亀頭にアクセスするために切開部を清潔に保ち、汚染を防ぎます。
5. 注射器と針を使って滑液を採取してください。サンプルの一部をEDTAチューブに移して分析し、残りの材料を使ってスメアスライドを準備します。
6. リトラクターを位置させて、顆頭表面を完全に露出させてください。顆頭が露出しているほど、次の段階で損傷を誘発しやすくなります。
   注意:この時は動物の足に注意してください。膝の屈曲や伸展は顆を露出させるのに役立ちます。
7. 内側大腿骨蓋頭の中央に直径8mm、深さ5mmの欠損を、8mmのレテフィンビットを装着した整形外科用ドリルを用いて、適切な位置を確保し、不適切な寸法や形状を防ぎ、関節軟骨の最も遠位の領域に対して0°の角度を保ちます。
   注意:トレパネーションは可能な限り最低速度で行い、ドリルコントロールを優しく操作し、軟骨と軟骨下骨を切断する程度の回転のみを用いてください。また、室温で0.9%NaClを用いた局所冷却も低速でも行ってください。
8. 整形外科用ハンマーとオステオトームを用いて、骨軟骨プラグの外科的摘出を行います。
9. 傷口の延長部分を滅菌ガーゼで洗浄し、病変の内部に血液や組織の破片が残っていないことを確認します。
10. 液体の20%(w/v)GelMA製剤200μLを、0.25%(w/v)リチウムフェニル2,4,6-トリメチルベンゾイルホスフィネート(LAP)を光開始剤として、損傷の内部に表面に達するまで塗布します。
11. GelMAハイドロゲルを395-405nm(総出力9W)の下で、試料から約5cm離れた位置に180秒間フォトクロスリンクします。この条件下で、表面での推定放射照度は~10 mW/cm²となり、総露光エネルギーは約1.8 J/cm²となります。
    注意:紫外線を使う際は保護メガネを必ず着用してください。
12. リトラクターは慎重に外してください。
13. 異なる組織層に独立した縫合糸で病変を閉じ、血清腫の形成を防ぎます。必要な縫合回数は手術切開の範囲によって異なります。
14. 感染を防ぐために、縫合部に滅菌包帯を巻いてください。

3. 術後ケア

1. 麻酔回復中は、心拍数(70-90拍/分)、呼吸数(12-20呼吸/分)、体温(39°Cから40.5°C)、毛細血管の充填時間が1〜2秒の正常な粘膜などのバイタルサインを監視してください。顔面動脈と大腿動脈を定期的に触診し、脈拍がわかりやすいかどうかを確認しましょう。
   注意:麻酔回復は静かで清潔、暖かく、パッドが敷かれた環境で行われ、照明が最小限で騒音も少ない環境で行うべきです。
2. 局所ペニシリン(ベンザチンペニシリンG:1,250,000 IU;プロカインペニシリンG:1,250,000 IU;ジヒドロストレプトマイシン硫酸塩:1.25 g、尿素:2.50 g)を用いて、手術部位のドレッシングを1日10日間行います。
3. 麻酔から目覚めた直後、動物が四足歩行の姿勢を維持し、手術部位に体重をかけ、不快感の兆候が見られないようにしてください。
4. 術後の鎮痛は、メロキシカム(24時間ごとに0.4 mg/kg)とトラマドール(12時間ごとに2 mg/kg)を5日間服用しました。追加の救急用トラマドールが、特定の顔の動作ユニット(眼窩引き締め、肉体反応、耳の位置、頭部位置など)に基づく検証済みツールであるSheep Grimace^{Scale 41}を用いて、羊の術後の痛みや苦痛を評価するためのツールとして特定されました。

4. 組織学分析

1. 手術から6か月後に安楽死を行います。安楽死薬を投与する前に深層鎮静を得るために、動物に静脈内投与前投与でケタミン(10 mg/kg)およびキシラジン(1 mg/kg)を投与し、臨床手技で推奨される用量より意図的に高い用量を用い、深篤鎮静の迅速な開始を確保し、安楽死プロトコルで支持されています。その後、プロポフォールを投与して麻酔昏睡を誘発します。その後、呼吸および心血管停止が起こり、すべての保護反射が消失するまで、2 mEq/kgで塩化カリウムを静脈内投与します。
2. 遠位大腿骨骨端を切開して顆頭の部分を除去します。剥離した膝関節を10%中性緩衝ホルマリンで固定し、34°Cの5%EDTA(エチレンジアミネテトラ酢酸)で脱鈣し、EDTA溶液を3日ごとに交換します。
3. 材料をパラフィンに埋め込み、4μmの区画に切断します。スライドからパラフィンを65°Cのキシレンに3×5分浸して取り除きます。エタノールに10〜20回浸けて(99%、95%、70%)、その後5分間脱イオン水で水分補給^します。
4. ヘマトキシリンおよびエオシン(H&E)染色の場合は、ハリスヘマトキシリンで断片を染色し、エオシンでカウンターステインを施し、自動スライド走査顕微鏡で20×倍率でスキャンし、リンク先のソフトウェアで解析します。
5. 変形性関節症研究協会国際(OARSI)の組織病理学イニシアティブ⁴³に従って病変を評価する:スコア0は軟骨が正常であることを示し、スコア1は軟骨の損失なしの表性細動を反映し、スコア2は、表層のすぐ下層に到達する垂直の裂け目にあたり、表面層の部分的な喪失を伴います。スコア3は、石灰化軟骨にまで及ぶ垂直の裂け目や浸食を示し、関節面の25%未満に影響を及ぼします。スコア4、5、6は、石灰化軟骨に到達する垂直の裂け目や侵食を表し、それぞれ関節面の25〜50%、50〜75%、75%以上に及びます。
   注:本研究では、石灰化軟骨に垂直の裂け目や浸食があり、関節面の25%以上に及ぶ病変に4点が割り当てられました。

結果

骨軟骨欠損誘導

本研究は、大型動物における急性骨軟骨欠損を誘発するための効率的なプロトコルの開発を目指しました。これらの損傷は手術中に機械的に生じ、直径約8mm、深さ約5mmの病変が形成されました(図1)。国際軟骨再生・関節保存学会のスコアを考慮すると、このタイプの損傷は軟骨損傷が軟骨下骨に到達するグレード4病変に分類されます。

適切なトレフィンのアライメントと正確な深さ制御は、モデルの再現性に不可欠なステップです。本研究では、すべての穿孔が0°(直角)で行われ、非対称軟骨および軟骨下骨の除去リスクを低減しました。大腿骨の最も遠位、解剖中心に合わせた部分を選択することで、異常部位の変動が減り、動物間の標準化が促進されます。さらに、トレフィンは周囲の深度マーキングを用い、穿孔時に到達する深度を正確に監視し、欠陥特性の一貫性を確保しました。

ディスカッション

軟骨治療における軟骨分化やECM成熟の不十分さを克服するためには、治療戦略の評価に非臨床研究が不可欠です。損傷軟骨組織の非臨床モデルの方法は、これまでに^{様々な技術を}用いて報告されています。しかし、文献には大型動物の膝における急性骨軟骨損傷の誘発に関する詳細な報告や標準化された手順が不足しており、研究ごとに大きなばらつきが生じています。ここで提示するプロトコルは、大型動物の骨軟骨組織における局所損傷を再現可能かつ信頼性の高い方法で誘導する方法を説明しています。

革新的な治療を臨床実践に導入するためには、ブラジル保健規制庁(ANVISA)によると、先進治療薬品の開発に非臨床研究が不可欠です(番号506/2021)。これらの研究はGMP基準に従って実施され、安全性、生物分布、薬理動態学、薬力学、その他トランスレーショナルリサーチに重要なパラメータの評価に寄与しなければなりません⁴⁵。損傷した関節軟骨の治療ツール開発を目的とした...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
25 ポリカプロネ縫合糸、No.2-0	エティコン		軟部組織の一般的な閉鎖用の縫合糸は、関節包および皮下細胞組織の縫合に使用されました。
抗体抗ββ-チューブリン	インビトロジェン	PA516863	細胞骨格の微小管を構成する2つのサブユニット(&α;/&β;)に対する抗体です
麻酔装置	HBホスピタル		吸入麻酔装置
アクシオスキャンZ1	ツァイス、ミュンヘン、ドイツ		顕微鏡
ベンザチンペニシリンG	ウーロフィノ		抗生物質
カテーテル18 G	ソリドール		静脈内カテーテル
セファレキシン	ビルバック		抗菌療法
クロルヘキシジンジグルコン酸水溶液	リオク&イアキュート;ミカ		皮膚消毒に使われる消毒剤
カフ式気管内チューブ7.5–8.0mm	ソリドール		カフ式気管内チューブ
ダピ	シグマ	D9542	蛍光染料
ダルベッコ改良イーグル・ミディアム	ギブコ	12100-046	細胞培養培地
ジヒドロストレプトマイシン硫酸塩	ウーロフィノ		抗生物質
EDTAチューブ	ベクトン・ディキンソン	362788	収集チューブ
イオシン	ネオン	1795	細胞の形態を可視化するために使われる染料、染色など;細胞質。
エチレンジアミネテトラアセティック酸	シグマ	E5134	骨組織の徐々な脱灰を促進します
胎児用牛血清	ギブコ	12657-029	増殖因子を用いた細胞培養の補助
ホルマリン	シグマ・オルドリッチ	47608	組織形態を保存する
GelMA凍干	ティッシュラボ	GLMA-LYO-1	フォトクロスリンク可能なハイドロゲル
ハリス・ヘマトキシリン	ラボルクリン	620503	細胞の形態を観察し、核を染色するために使われる染料。
イソフルラノ	クリスト&アキュート;リア		麻酔維持
ケタミン 10%	ベニル		安楽死の手続き
乳酸リンガー溶液	フレゼニウス・カビ		流体療法
L-グルタミン 200 mM	ギブコ	25030-081	細胞培養のための必須アミノ酸
塩酸リドカイン	クリスト&アキュート;リア		局所麻酔
ライブ/デッドの生存能力/シトトキシシティキット	インビトロジェン	L3224	細胞の生存可能性を評価する蛍光アッセイキット
メロキシカム	オウロ・フィーノ		術後期間中の抗炎症および鎮痛
ミダゾラム塩酸塩	クリスト&アキュート;リア		麻酔前薬
モノニロン縫合糸、No.3-0	エティコン		皮膚閉鎖に用いられる縫合線
NaCl 0.9%	クリスタリア		生理食塩水溶液
ニューロ局在化装置	ニューロロカリザドール DL 250 デルタライフ		局所麻酔は神経局在装置と末梢神経電気刺激装置によって誘導されます。
整形外科ドリル	カニューレート式ミニ整形外科用ドリル(繊細) - クロームメッキマンドレル - マキタブランド		整形外科手術に使われます。
整形外科用ハンマー	エドロ	ハマー・ニューフィールド(10-3155)	一般的な特徴:全長20cm、重量560gr;素材:高品質なステンレス鋼;使用:外傷科および整形外科で制御された衝撃を必要とする手術に適応。認証:製品はISO(国際標準化機構)13485:2016などの品質認証を取得しており、欧州の適合および適正製造基準も含まれています。
ランボット・オステオトーム	エドロ	ランボット・オステオトーム(10-0749)	ランボット・オステオトーム(6 mm x 17 cm / 6 3/4インチ)は、主に整形外科手術や骨操作を伴う脳神経外科手術で使用される高精度外科器具です。 幅6mmの先端を持ち、繊細な切断、再成形、緻密な軟骨および軟骨下骨の除去に理想的です。
ペニシリン・ストレプトマイシン	ギブコ	15140-122	細胞培養で広く使われている広域スペクトル抗生物質
ペチジン塩酸塩およびnbsp;	クリスト&アキュート;リア		麻酔前薬
塩化カリウム 19.1%	サムテック		安楽死の手続き
プロカインペニシリンG	ウーロフィノ		抗生物質
プロポフォール	クリスト&アキュート;リア		麻酔誘導と維持
リンガー乳酸	クリスト&アキュート;リア		流体療法
半閉鎖型円呼吸システム	HBホスピタル		麻酔のための呼吸回路
滅菌クレープ包帯	クレマー		無菌のクレープ包帯で、手術を受ける四肢の遠位端を覆うために使われます。
スティムプレックスD、22ガロン×2インチ。(50mm)延長セット付き絶縁針、30&デグ;ベベル(STIMD2250/30)	ブラウン		神経周麻酔
トラマドール塩酸塩	クリスト&アキュート;リア		術後鎮痛
トレフィンドリル	ボーントレフィンドリル、直径mmおよびndash;モデル:コントラアングル、ブランド:外科的WF		骨収集トレフィンドリル 8.0mm;外科用鋼で生産されました。骨移植手術で使用されます。組織学的解析や自己移植のために骨ブロックを除去する役割を担います。
キシラジン 10%	ベニル		安楽死の手続き