アテローム性動脈硬化性心血管疾患に関連するリポタンパク質サブフラクションの分析におけるポリアクリルアミドゲル電気泳動の応用

サマリー

このプロトコルは、心血管疾患リスク評価のための重要な診断基礎を提供するポリアクリルアミドゲル電気泳動に基づくリポタンパク質サブフラクション分析法を精緻化することを目的としています。LDLを7つの部分画分に分割できます。LDL1 と LDL2 は大きな粒子として特徴付けられ、LDL3 から LDL7 は小さな粒子として特徴付けられます。

要約

低密度リポタンパク質コレステロール (LDL-C) は、アテローム性動脈硬化性心血管疾患 (ASCVD) の発症における重要な要因です。LDL-C レベルの上昇は、アテローム性動脈硬化プラークの形成および心血管イベントのリスクと密接に関連しています。ただし、LDL の不均一性は、アテローム性動脈硬化を促進する能力に大きく影響します。研究によると、低密度リポタンパク質 (LDL) 粒子は、さらに小さな高密度 LDL (sdLDL) と大きな浮力 LDL (lbLDL) に分類できます。このうち、sdLDLは血管内皮に浸透する可能性が高く、酸化修飾活性が強く、特にASCVDに関連しています。メタボリックシンドローム、糖尿病、高トリグリセリド血症の患者では、LDL-C レベルは正常ですが、sdLDL の割合が上昇し、心血管リスクが過小評価されます。したがって、LDL サブフラクションを正確に検出することは、ASCVD リスクを層別化し、介入戦略を最適化するために非常に重要です。

フリーデワルト式や直接測定などの従来のLDL-C検出方法は、総コレステロール値を反映するだけで、サブフラクションを区別することはできません。LDL-C サブフラクションを検出する方法には、超遠心分離 (UC)、高速液体クロマトグラフィー (HPLC)、核磁気共鳴 (NMR) 技術などがあります。ただし、これらの方法には高い技術要件、複雑な操作、または高価な機器があるため、広範な臨床使用には実用的ではありません。

ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)技術は、モレキュラーシーブ効果と電荷差によってリポタンパク質粒子を分離します。この技術は、スーダンブラックなどの特定の染色と組み合わせた非変性勾配ゲルシステムを使用し、高解像度、強力な再現性、操作の容易さを提供します。PAGE テクノロジーを使用したリポタンパク質タイピングは、患者のリポタンパク質レベルのより包括的かつ正確な評価を提供し、臨床治療の決定に役立ちます。この記事では、5つの代表的な結果を紹介しました。サンプルA、B、C、D、Eの平均LDL粒子サイズは275.3 Å、266.6 Å、258.2 Å、257.4 Å、および252.9 Åであり、それぞれ脂質異常症による心血管疾患のリスクが低、限界、軽度、中等度、および重度であることを示しています。

概要

2021 年の世界保健機関の報告書によると、心血管疾患 (CVD) は依然としてヒトの病気の中で主要な死因です。報告書によると、2019 年には世界中で 1,790 万人が CVD で死亡し、世界の死亡者のほぼ 3 分の 1 を占めています¹。CVD の一種である ASCVD は、中国の都市部および農村部の住民の主な死因であり、全死亡の 40% 以上を占めています²。アテローム性動脈硬化症は、従来の危険因子と非伝統的な危険因子の両方によって引き起こされる慢性炎症性血管疾患です³。動脈壁⁴ への脂質沈着、線維組織の増殖および石灰化を特徴とし、最終的に血管壁の肥厚、弾力性の低下、および内腔の狭窄につながります。脂質異常症は ASCVD の最も重要な危険因子であり、LDL-C は ASCVD の病原性危険因子であり、ASCVD の発症に重要な役割を果たしています⁵。数多くの疫学研究、メンデルランダム化研究、およびランダム化比較試験により、血漿 LDL-C レベルが ASCVD のリスクと正の相関があることが一貫して示されています。LDL-C レベルを下げると、ASCVD⁶ のリスクを下げることができます。

LDLは、体内の内因性コレステロールの輸送に関与する主要なリポタンパク質です⁷。血漿LDLは不均一であり、サイズ、密度、化学組成の異なるさまざまな粒子^{で構成されています8。}LbLDL 粒子は密度が低くサイズが大きく、sdLDL 粒子は密度が高くサイズが小さくなります。LDLの不均一性は、そのさまざまな生物学的影響の根底にあります⁹。LbLDL粒子は、直径が大きく(≥25.5 nm)、密度が低く(1.02 g / mL近く)、形態が緩く、LDL1とLDL2で構成されています。LbLDL粒子には、より多くのコレステロールエステルが含まれています。酸化したり、血管内皮に浸透したりする可能性が低いため、比較的安全です。対照的に、sdLDL粒子は、より小さな直径(<25.5 nm)¹⁰、より高い密度(1.06 g / mLに近い)、およびLDL3からLDL7からなる緻密な構造を持っています。SdLDL 粒子には、lbLDL と比較してコレステロール エステルの量は少ないですが、トリグリセリドとアポリポタンパク質 B (ApoB) のレベルは高くなります。それらの物理的特性により、動脈内皮関門を貫通する可能性が高くなります。内皮下では、sdLDL粒子は活性酸素種(ROS)によって酸化され、酸化LDL(ox-LDL)¹¹を形成します。Ox-LDLは、内皮一酸化窒素シンターゼ(eNOS)活性を阻害し、NO産生を減少させ、内皮細胞にVCAM-1 / MCP-1の発現を誘導し、単球の接着と遊走を促進します¹²。遊走する内皮単核細胞はマクロファージに分化し、スカベンジャー受容体を介して無制限にox-LDLを取り込みます。細胞内コレステロールエステルの蓄積は、アテローム性動脈硬化性脂質縞の中核成分である泡細胞に変化します。泡細胞はIL-1βやTNF-αなどの炎症因子を分泌し、酸化ストレスと内皮損傷をさらに拡大し、正のフィードバックループを形成します¹³。内皮細胞の炎症を活性化し、泡細胞の形成を促進し、プラークの進行を促進します。2 つの大規模なコホート研究では、ASCVD^14-15 の潜在的なリスクの予測と評価において、sdLDL-C が LDL-C よりも臨床基準値が高いことが示されています。しかし、従来のLDL-C検出方法では、方法の制限により、リポタンパク質サブフラクションを検査できません。

LDL 粒子 (LDL-P) は、血液の単位体積あたりの LDL 粒子の数を反映し、それぞれが 1 つの ApoB 分子と複数のコレステロール分子を含む LDL 分子の担体として機能します。LDL-Cは、これらの粒子によって運ばれるコレステロールの総質量を表します。LDL-Cレベルは、LDL粒子の数とコレステロール密度の影響を受けますが、実際のリスクを完全には反映していない可能性があります¹⁶。たとえば、メタボリックシンドローム、糖尿病、または高トリグリセリド血症の患者は、LDL-C レベルは正常ですが、LDL-P が異常に上昇している場合があります (粒子が小さく、コレステロール含有量が低いため)。LDL-C レベルが目標を満たしていても、LDL-P が高いと、残留心血管リスクが増加する可能性があります。研究によると、LDL-P は LDL¹⁷ に関連する他のどのパラメーターよりも予測的であることが示されています。リポタンパク質サブフラクションの分析は、ASCVD の病因を理解し、残存リスクを評価し、精密な治療を導くために重要です。近年、国内のガイドラインでも、ASCVD リスク評価または治療モニタリングの指標として LDL サブフラクションが推奨されています¹⁸。

ASCVD は、世界的な主要な死因です。その予防と制御戦略は脂質管理に大きく依存しています。現在、臨床現場における脂質異常症患者のスクリーニングは、主にトリグリセリド (TG)、総コレステロール (TC)、高密度リポタンパク質コレステロール (HDL-C)、LDL-C を含む従来の 4 つの脂質検査に依存しています。さらに、リポタンパク質 (a)、アポリポタンパク質 A1 (ApoA1)、ApoB などの他の脂質マーカーは、主に糖尿病患者、高血圧患者、喫煙者、または LDL-C レベルが制御されているが依然として高いリスクをもたらす人々など、ASCVD¹⁹ の高リスク集団に使用されます。

研究が進むにつれて、特に早期警告の有効性と残存リスクの説明において、従来の脂質検査の限界がますます明らかになってきています。かなりの数の ASCVD 患者は、最初に正常な脂質レベルと診断され、LDL-C は一次警告には効果がありません。疫学データによると、急性冠症候群患者の約20%が入院時にLDL-Cレベルが正常範囲(<3.4mmol/L)内であり、従来の脂質検査では高リスクの人を見逃す可能性があることが示唆されています。さらに、LDL-C 目標を達成した後でも、ASCVD 患者は依然として高い残存心血管リスクに直面する可能性があります。これらの患者では、残存冠動脈イベントのほとんどは、LDL-C レベルの低下では説明できません。したがって、定期的な脂質検査では lbLDL-C と sdLDL-C を区別できないため、単純な LDL-C 検査では ASCVD の診断と治療の臨床ニーズを完全に満たさない可能性があります。

複数の研究により、リポタンパク質サブフラクションと ASCVD の間に明確な相関関係があることが確認されています。リポタンパク質亜画分検査の異常な結果は、脂質レベルが正常な個人における ASCVD の一次予防に対する警告として機能し、隠れた高リスク グループの特定に役立ちます。LDL-C レベルがすでに目標範囲内にある ASCVD の二次予防では、リポタンパク質サブフラクション検査が残存リスクを評価し、さらなる治療の指針となります²⁰。したがって、新規LDLサブフラクションの検出は、従来の脂質検査と比較して、脂質異常症およびASCVDの予防と治療のための新しい標的を提供することが期待されます。

私たちの研究室の検出および分析システムは、主にPAGEを使用して、リポタンパク質サブフラクションのサイズと電荷に基づいて分離します。リポタンパク質粒子は、PAGEによるポリアクリルアミドマトリックス中の分子ふるいにより、主にサイズによって分離されます。小分子は高速に移動し、大分子は立体閉塞によって妨げられ、ゆっくりと移動します。そして、分子が運ぶ電荷が多ければ多いほど、移動は速くなります。この方法により、リポタンパク質を12のサブフラクションにすばやく分割できます。LDLは7つのサブフラクションに分けられ、LDL1からLDL7としてラベル付けされます。それらはすべて、異なるサイズ、密度、物理化学的特性、代謝挙動、およびアテローム性動脈硬化の可能性を持っています。LDL1 と LDL2 は lbLDL に分類され、LDL3 から LDL7 は sdLDL に分類されます。リポタンパク質サブフラクション検出技術には、UC、HPLC、NMRなどがあります。ただし、高い機器要件、複雑な操作、および時間の消費により、臨床応用は比較的限られています²¹。PAGE 法は LDL のさまざまな部分画分を効率的に分離するため、他の技術と比較してよりユーザーフレンドリーになります。使用される機器は費用対効果が高く、持ち運びに便利なため、臨床ルーチン検査室での広範な使用により適しています。この研究は、臨床上の意思決定をサポートするために、血清サンプル中の LDL サブフラクション分析のための迅速で費用対効果の高い方法として PAGE を検証することを目的としています。

プロトコル

この研究のすべてのサンプルは、広東省人民病院の倫理審査委員会によって評価および承認されています (承認番号: KY2025-435-01)。すべての参加者は、実験前に書面によるインフォームドコンセントに署名しました。

1. キットの準備

1. ゲルバッファーの調製
   1. 30%アクリルアミド(ACR)の調製:アクリルアミド30gを秤量し、脱イオン水80mLを加え、撹拌して溶解させ、100mLに調整します。使用するまで4°Cで暗所で保管してください。
   2. 1%ビスアクリルアミド(BIS)の調製:ビスアクリルアミド1gを秤量し、80mLの脱イオン水を加え、撹拌して溶解し、100mLに調整します。使用するまで4°Cで暗所で保管してください。
   3. 25%スクロースの調製:スクロース25gを秤量し、70mLの脱イオン水を加え、かき混ぜて溶解し、100mLに調整して4°Cで保存します。
   4. 10%過硫酸アンモニウム(APS)の調製:0.1gの過硫酸アンモニウムを1mLの脱イオン水に溶かし、すぐに使用してください。
   5. 1M Tris(pH = 6.8)の調製:121.14 gのトリスヒドロキシメチルアミノメタンを秤量し、800 mLの脱イオン水を加えて撹拌して溶解し、pH値を6.8に調整してから、最大1000 mLにします。
   6. 1M Tris(pH = 8.6)の調製:121.14 gのトリスヒドロキシメチルアミノメタンを秤量し、800 mLの脱イオン水を加えて撹拌して溶解し、pH値を8.6に調整してから、最大1000 mLにします。
      注意: アクリルアミドを取り扱うときは、ブチルゴム手袋、安全ゴーグル、防護服を着用し、ヒュームフード内で操作してください。皮膚に接触した場合は、すぐに石鹸と水で洗い、医師の診察を受けてください。吸入の場合は、新鮮な空気に移動してください。
2. 分離ゲルの調製
   1. きれいなガラス管を取り、下層をシールフィルムで密封します。
   2. 8.29 mLの30%ACR、17.76 mLの1%BIS、10 mLの25%スクロース、1 mLの10%APS、10 mLの1M Tris(pH = 8.6)、0.1 mLのテトラメチルエチレンジアミン(TEMED)、および32.85 mLの脱イオン水をクリーンビーカーに順番に加えます。よく混ぜて母液80mL(ポリアクリルアミド濃度3.3%)を作り、根あたり1.2mLでガラス管に加えます。室温で60分間重合し、液体を精製水で密封して、液体表面が平らになるようにします。
3. 濃縮接着剤の調製
   1. 4.07 mLの30%ACR、3.05 mLの1%BIS、5 mLの25%スクロース、0.5 mLの10%APS、5 mLの1M Tris(pH = 6.8)、0.05 mLのTEMED、および32.33 mLの脱イオン水をきれいなビーカーに順番に加え、よく混合して50 mLの母液(ポリアクリルアミド濃度3.05%)を得る、 根あたり0.2mLでガラス管に加えます。室温で60分間重合し、液体を精製水で密封して、液体表面が平らになるようにします。
4. 保存液の調製
   1. トリス6.4g、スクロース75g、グリセリン2.5mL、PC-300(抗菌防腐剤)0.3mLを秤量し、脱イオン水800mLを加え、撹拌して溶解させ、PH値を6.8に調整し、最後に1000mLに希釈します。Tris-HClの濃度は約52mMです。
5. スーダン黒染色液の調製
   1. 0.03 gのスーダンブラックを秤量し、2 mLのエチレングリコール、6 mLの無水エタノール、および2 mLのジメチルスルホキシドの混合物に溶解します。ろ過後、バイアルあたり1mLに分けます。
      注意: スーダンブラックおよびジメチルスルホキシドを取り扱うときは、直接接触しないようにニトリル手袋と保護ゴーグルを着用してください。操作は換気された環境で行う必要があります。暴露後は直ちに皮膚と目を水で洗い流し、必要に応じて医師の診察を受けてください。
6. インナーパッキン
   1. キット構成要件に応じた完全な梱包。

2. キット構成

1. 製品にプレハブカラム、防腐液、スーダン黒染色液が含まれていることを確認してください。プレハブの柱には、アクリルアミド、ビサクリルアミド、スクロース、過硫酸アンモニウム、トリス、およびテトラメチルエチレンジアミンが含まれている必要があります。プレハブ柱の長さは75±0.5mm、内径は5.5±0.02mm、外径は7.0±0.02mmです。防腐剤溶液には、トリス、ショ糖、グリセリン、および防腐剤が含まれている必要があります。スーダンブラック染色液には、スーダンブラック、エチレングリコール、無水エタノール、ジメチルスルホキシドが含まれている必要があります。プレハブ柱の数量に応じて梱包仕様が異なることを確認してください。試薬1食分にはプレハブカラムが1つ必要です。異なるバッチの試薬キットを組み合わせると、実験結果に影響を与える可能性があるため、組み合わせないでください。

3. サンプル調製

1. 患者の準備: 血液サンプルを採取している間、患者が空腹状態であることを確認してください。
2. 血清分離ゲルサンプリングチューブを使用し、標準操作手順に従ってサンプル収集を実行します。溶血を避けるために、採血後できるだけ早く血液を分離する必要があります。
3. 分離後の血清サンプルは、室温でできるだけ早くテストします。すぐに検査できない場合は、サンプルを2〜8°Cで最大7日間、または-20°Cで最大30日間保管してください。
4. サンプルを室温に戻し、特に凍結および解凍したサンプルの場合は、使用前に完全に混合してください。凍結融解を繰り返すことは、サンプルの完全性を損なう可能性があるため、許可されていません。脂肪血症と溶血の両方のサンプルが検査結果に影響を与える可能性があります。軽度の脂肪血症または溶血サンプルの場合は、室温で14,462 x g で15分間高速遠心分離することをお勧めします。脂肪血症サンプルの場合は、ピペットを使用して透明層全体を底から吸引します。溶血サンプルの場合は、上清を採取します。次に、新しい遠心分離管に移して染色します。ただし、脂肪血症や溶血が非常にひどい場合は、再度採血することをお勧めします。

4. 操作手順

1. 準備
   1. テストするプレハブの柱とサンプルを取り出します。ピペットを使用して、プレハブカラムのサンプルポートから残留保存液を吸引します。プレハブカラムとサンプルを室温でバランスを取り、14.3 g の電気泳動バッファー粉末を 800 mL の脱イオン水で溶解します。
2. 染める
   1. きれいな遠心分離管を取り、番号を付けます。チューブの数は採血管の順序と一致しています。50 μLサンプルと10 μLのスーダン黒染色液の比率で遠心分離管を加え、よく混合し、室温で30分間放置して染色します。
      注:スーダンブラックの染色原理は、その親油性に基づいています。細胞内で中性脂肪、リン脂質、ステロイドなどの脂質物質と特定の発色反応を誘発し、茶色がかった黒色または濃い黒色の粒子を生成する可能性があります。このシステムでは、次のプロトコルを使用した単一因子実験計画を使用して、染色時間と投与量を最適化しました。3つのLDL-C血清サンプル(高濃度、中濃度、低濃度)を選択し、対応する染色量をそれぞれ5 μl、10 μl、15 μl、および20 μlで設定します。染色時間は、10分、15分、20分、25分、30分、35分、45分、60分に設定されています。電気泳動実験を行い、電気泳動バンドのグレースケール分析を行い、染色効果を検証します。最適な条件は、染色時間30分±5分で10μlの染色量であると決定されます。染色量と時間が短いと、リポタンパク質コレステロールがかすかに染色されます。最適な条件でバランスが取れていますが、染色量と染色時間を増やす必要はありません。
3. イオノフォル分離
   1. プレバランスカラムを電気泳動タンクのゴムソケットに挿入します。ゲルカラムのサンプルポートは、ゴム栓から約2cm離れています。しっかりと閉まり、漏れがないことを確認してください。サンプルゲルカラムの数がいっぱいでない場合は、穴のないゴム栓で空きスペースを埋めます。
   2. 次に、電気泳動バッファーを上部タンクと下部タンクに注ぎます。プレハブ柱の口にある気泡を取り除きます。25 μL の染色サンプルをプレハブカラムのサンプルポートに加えます。
   3. 蓋をして電源スイッチを接続し、電気泳動分離用の電圧(U=100V)、電流(I=3mA/管)、電力(P=120W)、時間(T=70分)のパラメータを設定します。
      メモ:電圧、電力、および時間は固定パラメータです。電流は、テストサンプルの数に応じて設定する必要があります(例:サンプルチューブ10本、I = 3 mA x チューブ10本= 30 mA)。
   4. 電気泳動が完了したら、電源を切り、蓋を外し、電気泳動装置の上部に電気泳動バッファーを注ぎます。ゲルカラムを順番に取り出して固定フレームに置き、上面に余分な電気泳動バッファーを注ぎ、走査分析システムで分析します。
4. 走査解析
   メモ:アナライザーのタイプはDY-03で、スキャンソフトウェアはKBL 3.3.9 GDです。
   1. スキャンアナライザーの電源スイッチをオンにし、デスクトップシステムソフトウェアをダブルクリックして、[ コレクション] をクリックしてソフトウェアインターフェイスに入ります。ソフトウェアインターフェイスで [サンプルトレイのエクスポート] をクリックし、サンプリング端をデバイスの内部に向けてゲルカラムをサンプルラックに配置します。ゲルカラムが対応する番号の付いた位置に配置されていることを確認します。ポジション 25 と 26 は、品質管理テスト専用に指定されています。
   2. ソフトウェアインターフェイスの [サンプルトレイのインポート ]をクリックして、サンプルトレイをデバイスにインポートします。[ スキャン] をクリックして、サンプル スキャン イメージを取得します。このデバイスにはオートフォーカスシステムが組み込まれています。スキャンモジュールとゲルチューブの間の焦点を自動的に調整し、鮮明なイメージングを保証します。ソフトウェアは、電気記憶図の初期位置(VLDL)と終了位置(HDL)を自動的に識別します。これらの位置で明らかなピークが検出されると、ソフトウェアはスペクトル分析のために指定された分析領域をロックオンします。
   3. 患者の情報を入力してバーコードをスキャンした後、ソフトウェアインターフェイスで[ 分析と処理 ]をクリックすると、システムが自動的に分析してテストレポートを生成します。[ LIS のアップロード] をクリックして、テスト レポートを LIS システムに転送します。
   4. スキャンと分析の後、プレハブ柱を取り出し、医療廃棄物の仕様に従って処理します。

5. 品質管理

1. 毎日のサンプルテストの前に、2つのレベルの品質管理テストを実行します。品質管理試験の操作手順は、サンプルテストの操作手順と同じです。タイプAの基準は、268Åを超える平均粒子径です。タイプBの基準は、265Å未満の平均粒子径です。
   注:結果分析:タイプA、平均LDL粒子サイズは>268 Å、LDL1とLDL2がより多くを占め、CVDのリスクが低いことを示しています。タイプ中間体(タイプINT)では、平均LDL粒子サイズは265〜268 Åであり、LDL3とLDL7の割合が臨界値を上回っていることを示しています。タイプB、平均LDL粒子サイズは<265Åであり、LDL3からLDL7がより多くを占め、CVDのリスクが高いことを示しています。

6. 技術的な改善

1. 正確な診断結果を確保するには、次の技術的改善を実装する必要があります。
   1. 事前検査: 採血前に患者が完全に絶食していることを確認してください。ヘパリン抗凝固血漿の代わりに血清またはEDTA抗凝固血漿を使用してください。ピペットの取り込みが正確であることを確認してください。重度の乳び状または溶血性サンプルは避けてください。
   2. 検査中:標準プロトコルに従って、電圧(U = 100 V)、電流(I = 3 mA/チューブ)、電力(P = 120 W)、時間(T = 70分)の電気泳動パラメータを設定します。写真の撮影やスキャンに影響を与える可能性のあるガラス管の汚染を防ぐために、滅菌手袋を着用してください。
   3. 検査後:レポートを発行するときは、異常なクロマトグラムに干渉の可能性がないか確認し、誤った診断結論が得られないように再分析を実行します。
      1. 正常なクロマトグラム:VLDL の初期位置と HDL の終了位置では、どちらも明確なピークを持っています(代表的な結果のセクションを参照)。
      2. 異常クロマトグラム:VLDL の初期位置または HDL の終端位置には、ピークが 1 つないか、複数あります。

結果

この研究は、PAGE を使用して参加者の血清中のリポタンパク質サブフラクションを検出する方法を発明することを目的としています。目標は、LDL-Cサブフラクションが主に大きな粒子(LDL1およびLDL2)であるか、小さな粒子(LDL3からLDL7)であるかを判断することです。スーダンブラックで染色した後、ポリアクリルアミドゲル中の電気泳動装置によってサンプルを分離します。次に、リポタンパク質をゲルチューブ内の個別のバンドに分離し、走査分析システムを使用してサブフラクション分析を実行します。

この分析装置は、電気泳動スキャングレースケール画像からピーク形状とピーク面積を計算します。ピーク移動距離と加重ピーク面積を使用して、各サンプルの平均LDL粒子サイズを推定します。当社のシステムは、各リポタンパク質サブフラクションの相対的な割合を提供します。実験室では、総コレステロール濃度を手動で入力して、リポタンパク質サブフラクションの絶対含有量を取得できます。私たちのシステムでは、LDLサブフラクションは、保持係数(Rf)で表される移動距離に基づいて分類されます。LDLサブフラクションは、超低密...

ディスカッション

アテローム性動脈硬化症の発症における心血管危険因子としての sdLDL の役割は研究によって確認されていますが、現在、LDL サブフラクションを特定する確立された方法はありません。過去数十年にわたり、LDL サブフラクションの検出方法の開発において大きな進歩が見られました。UC はゴールド スタンダードと見なされています。密度の違いに基づいてLDLサブフラクションを分離し、sdLDLとlbLDLを高分解能で区別できます。ただし、この方法では高価な超遠心分離機と長い遠心分離時間が必要であり、不安定な粒子成分を損傷する可能性があります。LDL-Pを定量化できないことに加えて、UCの精度は、オペレーターのスキルに応じて、実験室ごとに異なります²²。HPLCは、リポタンパク質分離後にHPLCデバイスを使用してLDLサブフラクションを同定および検出することができます²³。HPLC技術は再現性と精度が高いため、大量のサンプルを分析するのに理想的な選択肢です。ただし、機器のコストが高く、化...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
電気泳動緩衝液粉末	広西チワン族自治区カンボライテクノロジーカンパニー	25030401	緩衝液の調製、電気泳動条件の提供
価値の高い品質管理製品	広西チワン族自治区カンボライテクノロジーカンパニー	25030301	監視の精度と精度のために
リポタンパク質サンプル密度分離溶液(グラジエントゲル電気泳動)	広西チワン族自治区カンボライテクノロジーカンパニー	LSS60-SB1-A1 25030301	血清サンプルからリポタンパク質サブタイプ成分を分離するため
低価値の品質管理製品	広西チワン族自治区カンボライテクノロジーカンパニー	25030301	監視の精度と精度のために
スーダンブラック染色液	広西チワン族自治区カンボライテクノロジーカンパニー	LSS60-SB1-A1 25030301	サンプル染色用