このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。

研究記事

リポ酸はNrf2/HO-1経路を調整し、宿主主導の細胞保護機構を通じて真菌性角膜炎の炎症を抑制します

404 回視聴

⸱

DOI:

10.3791/69362

⸱

2025年12月9日

 , 
1Department of Ophthalmology, Jinan 2nd People's Hospital

この記事について

サマリー

リポ酸は真菌性角膜炎においてNrf2/HO-1細胞保護経路を活性化し、炎症性サイトカインのレベルや角膜損傷のレベルを低下させます。この宿主指向療法は、従来の抗真菌薬に比べて優れた安全性プロファイルを示し、内因性抗酸化経路の強化を通じて酸化ストレス駆動眼疾患の治療におけるメカニズム的洞察を提供します。

要約

ジチオール抗酸化剤であるリポ酸(LA)は、模範的な眼の安全性プロファイルを持ち、真菌性角膜炎を引き起こす酸化炎症環境を和らげる能力について調査されました。ヒト角膜上皮細胞は最大60μMまでLAを生存能力低下なく耐え、 Aspergillus fumigatus の挑戦により、LAは核因子2関連因子2(Nrf2)の核転座を3倍に増加させ、下流のエフェクターであるヘムオキシゲーザーゼ1(HO-1)の5倍の急増を引き起こしました。ML385によるNrf2の薬理学的サイレンシングや、スズプロトポルフィリンIXによるHO-1の触媒遮断により、これらの分子イベントは消失し、インターロイキン-1βおよび腫瘍壊死因子α発現が復活し、厳密なNrf2/HO-1依存性が確認されました。マウス角膜炎モデルでの並行実験はin vitro の観察結果を裏付けました。局所LAは角膜の不透明度および炎症スコアを47%低下させ、同時に角膜のNrf2およびHO-1発現を増幅し、サイトカイン転写産物を半減させました。SnPPIXの併用によりこれらの利点は無効となりました。これらのデータは、臨床的に達成可能な濃度でLAがNrf2タンパク質レベルを増加させ、核転座を促進し、HO-1活性を増強し、病原体誘発性の細胞分裂乱流を抑制するという一貫した機構階層を描き出しています。これらの発見は、LAを容易に伝達可能で宿主主導の補助物質として位置づけ、抗真菌化学療法を補完できるとともに、視力を脅かす角膜炎症のNrf2中心調節におけるより広範な治療的視野を示唆しています。

概要

真菌性角膜炎(FK)は現在、広範な眼科緊急事態として認識されており、年間100万件以上の培養証明症例と、熱帯および亜熱帯地域における角膜失明の不均衡な割合を占めています。アメリカ合衆国では人口10万人あたり6〜8件に近づく発生率の推定で、農業経済ではさらに高い数値が、植物性外傷やコンタクトレンズの装着後に労働年齢層に優先的に襲われる世界的な脅威の増大を強調しています。3,4。糸状菌類、特にフザリウム属やアスペルギルス属が病因学的景観を支配し、温暖で湿潤な気候で繁栄し、眼の微小損傷を利用して感染を開始する5。

半世紀にわたる臨床使用にもかかわらず、ナタマイシン5%はFKに特化した唯一の局所薬として知られています。しかし、そのポリエンの化学成分は角膜の浸透性を低くし、頻繁な投与が必要であり、普遍的に入手可能というわけでもありません 6,7。憂慮すべきことに、南アジアでの連続した監視研究では、ナタマイシンとトリアゾールの最小限阻害濃度が徐々に増加していることが明らかになり、フザリウム分離株はナタマイシン耐性が年間≥6%増加し、ボリコナゾール8も同様の傾向を示している。これらのデータは治療失敗の臨床報告と一致し、FK治療薬市場が2023年の9億米ドルから2033年までに14億8千万米ドルに拡大するという予測を強化しています。これは主に現在の薬剤治療の不十分さに起因しています。結膜皮弁や貫通角膜形成術などの臨時手術は、頑固な潰瘍の解剖学的側面を救いますが、資源を消費し視力を制限します。これらの欠点を総合すると、単なる菌類活動を超えた宿主主導または多目標戦略の必要性が強調されています。

酸化ストレスとそれに伴う炎症カスケードは、現在では真菌の病因と角膜瘢痕の決定要因として理解されています。真菌の侵入時、角膜上皮細胞および結膜肥満細胞、辺縁樹状細胞、基質角質細胞などの常駐免疫集団が、Dectin-1やToll様受容体などのパターン認識受容体を通じて自然免疫応答を開始します10。好中球由来の活性酸素種(ROS)は、抗菌酸化バーストの一部として感染した間質に蓄積し、浸透したマクロファージやTリンパ球はサイトカイン増幅を通じて慢性炎症を持続させます11。逆説的に、糸状菌類はこの過酷な環境を生き延びるために、自身の抗酸化回路(例:Yap1制御の超酸化物ジムターゼ)を上方調節します。過剰なROSは、組織破壊や角膜の不透明化を促進するIL-1β、TNF-αなどの炎症促進メディエーターのNF-κB依存転写を活性化します12。内因性細胞保護の中心には核因子エリスロイド2関連因子2(Nrf2)があり、その核への移動はヘムオキシゲナーゼ-1(HO-1)および上皮細胞、角化細胞、内皮細胞を含む複数の角膜細胞タイプにわたる解毒酵素の発現を促します13,14.加齢、糖尿病、慢性炎症はこの軸を抑制し、眼組織を酸化損傷にさらしやすくする一方で、Nrf2の遺伝的または薬理学的強化は上皮創傷の閉鎖を促進し、多様な角膜損傷におけるサイトカイン急増を抑制します15。

この経路をFKで活用する概念実証研究が始まっています。ペリルアルデヒド16、ガリック酸17、ヒドロキシチロゾール18、有機セレニウム化合物エブセレン19などの天然小分子は、Nrf2-HO-1シグナル伝達を増強しつつ、真菌の生存率を直接的に損なうことで抗真菌および抗炎症の二重効果を達成します。抗真菌薬と抗酸化物質を共送達するナノメディシンプラットフォームは、病原体除去と宿主防御強化を組み合わせることの治療的可能性をさらに示しています20,21。しかし、多くの候補者は製剤の複雑さや未証明の眼の安全性に関連する翻訳上の課題に直面しています。

リポ酸(LA)は、広く使われるジチオール抗酸化物質であり、確立された全身安全記録と卓越した薬理動態的多様性を持っています。肝臓および神経組織10,12の研究に基づき、LAはケルチ様ECH関連タンパク質-1(Keap1)上のシステイン残基(特にCys151、Cys273、Cys288)を直接修飾し、Nrf2との相互作用を妨害し、Nrf2のユビキチン化およびプロテアソーム分解を阻止し、Nrf2タンパク質レベルの増加、核転座の強化、HO-1転写の強化をもたらすことが提案されています。しかし、角膜上皮細胞におけるKeap1-LAの相互作用の直接的な実証は今後の研究を望むべきです。LAは肝、神経、眼の酸化損傷モデルにおいて細胞保護効果を示している13,15。両親性であるため、ポリエンで観察される膜毒性を伴わずに組織への浸透を容易にし、局所および全身の適応症に対する臨床処方もすでに存在します。それにもかかわらず、LAが角膜炎症性微小環境を調節し、それによってFKを改善する能力については厳密に検証されていません。

したがって本研究では、LAがNrf2/HO-1軸を活性化しつつ炎症性サイトカインを抑制することでA . fumigatus誘発性角膜症を緩和できるかどうかを調査しました。ヒト角膜上皮細胞と検証済みマウスFKモデルを用いて、線量反応特性を明らかにし、選択阻害剤を用いた機構的依存性を解明し、未感染対照群および感染した車両治療群との治療成果をベンチマークしました。私たちの知る限り、これは包括的な用量反応特性解析、Nrf2およびHO-1の両方の選択的薬理学的阻害剤を用いた機構的解離、細胞モデルおよび動物モデルでの検証を通じて、リポ酸の治療効果を真菌性角膜炎における初めての体系的調査にあたります。本研究は分子、細胞、翻訳の指標を独自に統合し、LAの抗炎症効果の根底にあるNrf2/HO-1経路依存性の決定的な証拠を提供します。分子、細胞、 生体内 の指標を統合することで、病原体根絶と炎症抑制という二つの必須課題に対応するLAを容易に翻訳可能で宿主主導の治療法として包括的に評価しようとしました。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

プロトコル

すべての動物処置は、施設動物ケア・利用委員会(プロトコル番号:IACUC-2024-FK-007)によって承認され、視覚・視覚研究協会の眼科・視覚研究における動物利用に関する声明に従って実施されました。生後8〜10週、体重20〜25gのオスのC57BL/6マウスは、22度±2°C、相対湿度50%〜60%の管理された環境条件で、個別に換気されたケージに入れられ、12時間の明暗サイクルで行われました。これらの特定の病原体を含まない動物はチャールズリバー研究所から取得されました( 材料表参照)。すべてのマウスは新しい環境に適応するために1週間の順応期間を経て、実験的な手順が行われ、標準的な齧歯類の餌や水に制限なくアクセスされました。

注意: Aspergillus fumigatus はバイオセーフティレベル2の封じ込めが必要な病原性生物です。すべての菌類培養は、適切な個人用防護具(手袋、実験用コート、眼を保護するもの)を用いて認証された生物学的安全キャビネットで取り扱わなければなりません。ジメチルスルホキシド(DMSO)は可燃性で皮膚に浸透します。換気の良い場所で扱い、直接の接触を避けてください。ケタミンとキシラジンは規制物質であり、機関の規制により安全な保管と適切な書類作成が求められます。

実験的調製
必要な試薬、薬剤、材料はすべて実験ワークフローに従って準備されました(回路図は 材料表 および 補足図1 を参照)。ラセミ体(±)-α-リポ酸(LA)ストック溶液は、60 mM濃度でDMSOに溶解したラセミ体α(1,2-ジチオラン-3-ペンタノイン酸)を用いて製製され、酸化分解を防ぐために-80°Cの使い捨てアリコートで保存されました。Nrf2阻害剤ML385およびHO-1阻害剤SnPPIXも同様に調製され、凍結融解サイクルを避けるために一度使用に指定されました。すべての細胞培養培地およびサプリメントは滅菌条件下で準備され、使用前に37°Cまで予温されました。

寒天プレート、培養チューブ、使い捨てプラスチックを含む真菌培養物に汚染されたすべての材料は、バイオハザード廃棄物容器に処分する前に121°Cで30分間高出力滅菌処理されました。有機溶媒を含む化学廃棄物は別途収集され、機関の環境衛生・安全プロトコルに従って処分されました。動物組織や死骸は、承認された生物医学廃棄物サービスを通じて焼却されました。

菌類培養と感染準備
Aspergillus fumigatusは、Sabouraudのデキストロース寒天で37°Cで5〜7日間培養され、成熟した分生子の形成が観察されました。分生子は成熟培養物に0.05%のTween-80を含む無菌リン酸塩緩衝塩水(PBS)を注水して収穫し、分生子懸濁液は無菌ガーゼでろ過して菌糸断片を除去しました。分生子濃度は血液細胞計を用いて測定され、公開された真菌性角膜炎モデルに基づいて確立された濃度に調整されました。in vitro実験では、1 x 106 conidia/mL(感染の多重率は10:1)が、この濃度が角膜上皮細胞に強力な炎症反応を誘導しつつ、下流解析のために十分な細胞生存率を維持することが示された研究に基づいて選定されました(16,17)。生体内試験では、1 x 107 conidia/mLが選ばれました。この接種は感染後5日目までに一貫した中等度の重症度角膜炎を引き起こし、再現可能な疾患スコアを持ち、過剰な死亡率なしに治療効果を評価するのに十分なダイナミックレンジを提供します16,19。

動物治療と角膜感染
全身麻酔(ケタミン100 mg/kgおよびキシラジン10 mg/kgの腹腔内注射)下で、無菌の25G針を用いて中央角膜に1 mmの直線的な引っかき傷を3つ作り、その後5 μLの A. fumigatus 円錐懸液を局所的に塗布することで真菌性角膜炎を誘発しました。マウスはランダムに治療群(n=8群)に割り当てられました:対照群(未感染)、感染対照群、感染+LA治療(60μmol/Lを1日4回局所投与)、感染+LA+SnPPIX治療(LAとSnPPIXを腹膜内1日投与)。感染後5日目に臨床評価と組織採取が行われました。

動物の取り扱いの注意事項:麻酔動物を扱うすべての処置は無菌状態で行うべきです。麻酔中は動物の呼吸抑制を継続的に監視してください。汚染された寝具、外科用廃棄物、感染組織は、施設のバイオハザード廃棄物管理プロトコルに従い、オートクレーブ処理の後に焼却処理を行います。

細胞培養と処理
ヒト角膜上皮細胞(HCEC)はATCCから採取され、DMEM/F-12培地で10%胎児用牛血清、1%ペニシリン-ストレプトマイシン、1%L-グルタミンを補足し、湿度5%CO₂の大気中で37°Cの等モル濃度で維持されました。細胞は80%〜90%の合流度に達したら3〜4日ごとにサブ培養され、3〜8回のパッセージ間に一貫性を確保するために使用されました。実験処理では、適切なプレートに1ウェルあたり5×10⁴細胞を植え付け、処理前に24時間付着させました。すべての in vitro 機構実験において、細胞はまず感染多数(MOI)10:1の Aspergillus fumigatus conidiaに4時間曝露され、その後LA(60μM)、ML385(5μM)、またはSnPPIX(1μM)を単独または組み合わせで追加して24時間かけてサンプル採取を行いました。この逐次設計により、予防的治療ではなく既存の真菌課題に対するLAの治療効果の評価が可能となります。

細胞生存能力評価(CCK-8解析)
細胞生存率はCell Counting Kit-8(CCK-8)を用いて評価されました。細胞は96ウェルプレートに5×10、1ウェルあたり4 セルのシードを行い、処理前に24時間培養しました。薬物曝露後、各ウェルに10μLのCCK-8溶液を加え、プレートを37°Cで2時間培養しました。 吸収はマルチモードマイクロプレートリーダーを用いて450nmで測定されました。各実験条件は八重構造で行われ、実験は独立して3回繰り返し行われました。細胞毒性を避けるため、車両制御(DMSO)濃度は0.1%未満に維持されました。

RNA抽出と定量的リアルタイムPCR
RNeasy Miniキットを用いて、製造元のプロトコルに従い、培養細胞や角膜組織から総RNAを単離しました。組織サンプルは組織ホモジナイザーを用いてRLTバッファー内で50Hzで2分間均質化されました。RNAの質と濃度は分光光度計で評価され、下流解析では260/280の比率が1.8-2.0でした。第1鎖cDNA合成は、高容量cDNA逆転写キットを用いて、1回の反応あたり1μgの総RNAで実施されました。定量PCRは、SYBR GreenベースのqPCRマスターミックスを用いてリアルタイムPCRシステム上で行われ、初期変性は95°Cで2分間、その後95°Cで15秒、60°Cで1分間40サイクル行われました。アンプリコン特異性を検証するために融解曲線解析が行われました。すべてのプライマーは使用前に効率(90%-110%)および特異性について検証されました。相対mRNA発現は2(-ΔΔCT) 法を用い、 GAPDH を基準遺伝子として算出しました。

タンパク質抽出とウェスタンブロット解析
全タンパク質抽出のために、細胞と組織をRIPAバッファーに溶解し、プロテアーゼおよびリン酸化乳阻害剤カクテルを補足しました。製造元のプロトコルに従い、NE-PER核および細胞質抽出試薬を用いて核および細胞質タンパク質の分画が調製されました。タンパク質濃度はブラッドフォードアッセイを用いて測定されました。同量のタンパク質(30〜50μg)をSDS-PAGで分離し、PVDF膜に移しました。Trisバッファー付き生理食塩水(0.1% Tween-20を含む5%無脂肪ミルク)で1時間ブロッキングした後、膜を4°Cで1晩一次抗体で培養し、その後室温で適切なHRP結合二次抗体を1時間培養しました。タンパク質バンドは、信号強度に応じて30〜180秒の曝露時間で強化化学発光試薬を用いて可視化されました。バンドはImageJソフトウェアを用いて定量化され、βアクチンが全タンパク質の負荷制御、ラミンB1が核タンパク質の負荷制御として機能しました。

臨床評価および組織学的解析
角膜疾患の重症度は、マウス真菌性角膜炎の確立されたプロトコルに基づく標準化された臨床スコアリングシステムを用いて評価されました。スコアリングシステムは0-4スケールで3つのパラメータを評価します:角膜不透明度(0=透明、4=完全不透明)、表面不規則性(0=滑らか、4=穿孔を伴う重度潰瘍)、炎症反応(0=浸潤なし、4=ハイポピオンによる高密度浸潤)で、合計スコアは0から12です。すべての臨床評価は、治療群割り当てにマスクされた2名の独立した観察者によって実施され、観察者間の同意率は90%を超えていました。角膜の写真はデジタルカメラを搭載したスリットランプ生体顕微鏡で撮影されました。組織学的解析のために、眼を摘出し、4%パラホルマルデヒドに固定し、パラフィンを埋め込み、厚さ5μmで切片しました。切片はヘマトキシリンとエオシンで染色され、一般的な形態評価が行われました。

酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)
製造元の指示に従い、IL-1βおよびTNF-αの分泌レベルは、製造元の指示に従い、市販のELISAキットを用いて定量化されました。細胞培養上清液は治療後24時間後に採取され、角膜組織はプロテアーゼ阻害剤を含むPBSで均質化されました。サンプルは12,000 x g で4°Cで10分間遠心分離され、ELISA分析には上清液が使用されました。すべてのサンプルを重複分析し、サイトカイン濃度は標準曲線から計算されました。

統計解析
すべての実験は適切な生物学的複製( in vitro 試験ではn/≥6、動物実験ではn=8)を用いて行われ、少なくとも3回独立して繰り返されました。データは平均±標準誤差(SEM)として提示されます。データ解析はGraphPad Prismバージョン9.0を使用して実施されました。具体的には、データ分布を評価するために正規性検定関数(Shapiro-Wilk)、2群以上の実験にはTukeyの多重比較検定を用いた一方向ANOVA、2群比較にはペアなしのStudent氏t検定を用いました。グラフはグループ化された棒グラフとして生成され、個々のデータ点は散布図として重ねられ、誤差バーは平均の標準誤差を表していました。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

結果

実験的なワークフローにより、リポ酸処理がNrf2/HO-1シグナル伝達経路を効果的に調節し、真菌性角膜炎モデルにおける炎症を抑制することが示されました。

リポ酸および経路特異的阻害剤の細胞毒性評価
本研究で使用される各化合物の最適濃度を決定するために初期の用量反応研究が実施されました。LAはHCECsに対して優れた生体適合性を示し、24時間曝露後最大60μMの細胞生存率を維持し、これが後の機構的研究における最適なLA濃度であることを確立しました(図1A)。対照的に、Nrf2阻害剤ML385は安全性プロファイルがより制限されており、予備的な線量応答実験では最適濃度が5μMと判断されました。HO-1阻害剤SnPPIXは、試験中の化合物の中で最も治療効果が狭く、SnPPIXは2.5μM、5μMで対照群と比べて細胞生存率を有意に低下させ、1μMのSnPPIXが機構的研究に最適な濃度であることを確立しました(図1C)。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

ディスカッション

本研究結果は、リポ酸(LA)がNrf2/HO-1軸の強力な誘導因子であり、炎症促進サイトカインの発現を抑制し角膜構造を保存することで真菌性角膜炎(FK)を緩和することを裏付けています。酸化性疾患におけるジチオラン化合物によるNrf2の強力な活性化を示す最近の研究と一致して、LAはHO-1転写産物を5倍に増加させ、IL-1β/TNF-α分泌を半減させ、眼の炎症に関する複数の植物化学的活性化剤を上回る性能を示しました2,23。ペリルアルデヒド16、ガリ酸17、ヒドロキシチロゾール15、エブセレン19を用いた最近の研究では、FKモデルでも同様のNrf2/HO-1活性化が示されていますが、LAは確立された臨床安全性プロファイル...

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

開示事項

著者らは本書に関連する利益相反を一切認めていません。外部からの資金や商業的関係は、研究の設計、実施、解釈に影響を与えませんでした。

謝辞

この研究は済南第二人民病院眼科の内部資金援助を受けました。著者らは、細胞培養の維持および動物モデル手順に関して、研究室スタッフからの技術支援に感謝の意を表します。プロトコルのレビューと承認を担当した施設動物ケア・利用委員会に特別な感謝を申し上げます。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
アンチHO-1セルシグナル伝達技術、マサチューセッツ州ダンバーズ、アメリカ合衆国#8803
抗βアクチンシグマ・オルドリッチ、ミズーリ州セントルイス、アメリカ合衆国A5441
アンチラミンB1アブカム、マサチューセッツ州ケンブリッジ、アメリカ合衆国AB16048
アンチNRF2アブカム、マサチューセッツ州ケンブリッジ、アメリカ合衆国AB62352
Aspergillus fumigatusATCC 204305該当なし
ブラッドフォード検査キットバイオ・ラッド研究所5000006
C57BL/6マウスチャールズリバー研究所該当なし
細胞計数キット-8(CCK-8)同仁堂研究所、熊本、日本343-07623
DMEM/F-12中型Gibco、サーモフィッシャー・サイエンティフィック11320033
DMSOシグマ・オルドリッチD2650
ECL試薬サーモフィッシャー・サイエンティフィック32106
胎児用牛血清Gibco、サーモフィッシャー・サイエンティフィック16000044
GAPDH フォワードプライマーカスタム合成習慣
グルタマックスGibco、サーモフィッシャー・サイエンティフィック35050061
高容量cDNA逆転写キット応用バイオシステムズ、サーモフィッシャー・サイエンティフィック4368814
HO-1前方プライマーカスタム合成習慣
HO-1 リバースプライマーカスタム合成習慣
HRP結合抗マウスIgGアブカム、マサチューセッツ州ケンブリッジ、アメリカ合衆国AB205718
HRP結合抗ウサギIgGアブカム、マサチューセッツ州ケンブリッジ、アメリカ合衆国AB205719
ヒト角膜上皮細胞(HCECs)ATCC、バージニア州マナサス、アメリカ合衆国CRL-11135
IL-1とベータ;ELISAキットR&D Systems、ミネアポリス、ミネソタ州、アメリカ合衆国DY201
リポ酸(LA)シグマ・オルドリッチ、ミズーリ州セントルイス、アメリカ合衆国T1395
ML385(Nrf2阻害剤)MedChemExpress、ニュージャージー州モンマスジャンクション、アメリカ合衆国HY-100523
NanoDrop 2000分光光度計サーモフィッシャー・サイエンティフィックND-2000
NE-PER核および細胞質抽出試薬サーモフィッシャー・サイエンティフィック78833
Nrf2 フォワードプライマーカスタム合成習慣
Nrf2 リバースプライマーカスタム合成習慣
PBSの0.05%が80歳の10歳以上カスタム調合習慣
ペニシリン・ストレプトマイシンGibco、サーモフィッシャー・サイエンティフィック15140122
パワーアップSYBRグリーンマスターミックス応用バイオシステムズ、サーモフィッシャー・サイエンティフィックA25741
QuantStudio 5 リアルタイムPCRシステムサーモフィッシャー・サイエンティフィックA28140
RIPAバッファカスタム調合習慣
RNeasyミニキットドイツ、ヒルデン、キアゲン74104
サブローデキストロー寒天カスタム調合習慣
スリットランプ生体顕微鏡カスタム装備該当なし
SnPPIX(HO-1阻害剤)フロンティア・サイエンティフィック、ローガン、ユタ州、アメリカ合衆国F6140
Synergy HTX マルチモードマイクロプレートリーダーBioTek Instruments、アメリカ合衆国バーモント州ウィヌースキーシンヒクストル
TBS-T(0.1% Tween-20)カスタム調合習慣
ティッシュライザーLTキアゲン69980
TNF-およびα;ELISAキットR&D Systems、ミネアポリス、ミネソタ州、アメリカ合衆国DY210

参考文献

  1. Kam, K. W., Rao, S. K., Young, A. L. The diagnostic dilemma of fungal keratitis. Eye. 37 (3), 386-387 (2023).
  2. Shaikh, N. R., Choudhary, K. G. Fungal keratitis- an update on the global threat. Int J Adv Res. 11 (03), 51-55 (2023).
  3. Lambert, L. H., Finger, G. E., Tompkins, B. L. Case Report: Vision-Threatening Fungal Keratitis in a Service Member Stationed at Guantanamo Bay. Military Med. 189 (1-2), 379-383 (2023).
  4. Arboleda, A., Ta, C. N. Overview of Mycotic Keratitis. Cornea. 43 (9), 1065-1071 (2024).
  5. Gautam, M., et al. An Emerging Global Threat of Mycotic Keratitis Caused by Uncommon Fungal Species: A Systematic Review and Meta-Analysis. Transl Vis Sci Technol. 14 (4), 4(2025).
  6. Qiu, S., et al. Natamycin in the treatment of fungal keratitis: a systematic review and Meta-analysis. Int J Ophthalmol. 8 (3), 597-602 (2015).
  7. Hoffman, J. J., et al. Topical Chlorhexidine 0.2% versus Topical Natamycin 5% for the Treatment of Fungal Keratitis in Nepal: A Randomized Controlled Noninferiority Trial. Ophthalmology. 129 (5), 530-541 (2022).
  8. Prajna, N. V., et al. Patterns of Antifungal Resistance in Adult Patients With Fungal Keratitis in South India: A Post Hoc Analysis of 3 Randomized Clinical Trials. JAMA Ophthalmol. 140 (2), 179-184 (2022).
  9. Khalil, A. S., Baioumy, S. A., Hegab, M. A., Khairy, M. A., Ali, A. G. Temporary Conjunctival Flap Plus Medical Treatment Versus Medical Treatment Only for High-Risk Fungal Keratitis: A Randomized Controlled Trial. Cornea. 44 (7), 866-873 (2025).
  10. Wang, B., et al. Oxidative Stress Initiates Receptor-Interacting Protein Kinase-3/Mixed Lineage Kinase Domain-Like-Mediated Corneal Epithelial Necroptosis and Nucleotide-Binding Oligomerization Domain-Like Receptor Protein 3 Inflammasome Signaling during Fungal Keratitis. Am J Pathol. 193 (7), 883-898 (2023).
  11. Barnes, T. C., Anderson, M. E., Edwards, S. W., Moots, R. J. Neutrophil-derived reactive oxygen species in SSc. Rheumatology (Oxford). 51 (7), 1166-1169 (2012).
  12. Mendoza-Martínez, A. E., Cano-Domínguez, N., Aguirre, J. Yap1 homologs mediate more than the redox regulation of the antioxidant response in filamentous fungi. Fungal Biol. 124 (5), 253-262 (2020).
  13. Zhang, Y. N., Ouyang, W. J., Hu, J. Y., Liu, Z. G. Targeting Nrf2 signaling in dry eye. Int J Ophthalmol. 17 (10), 1911-1920 (2024).
  14. Wang, M. X., et al. Potential Protective and Therapeutic Roles of the Nrf2 Pathway in Ocular Diseases: An Update. Oxid Med Cell Longev. 2020, 9410952(2020).
  15. O'Rourke, S. A., Shanley, L. C., Dunne, A. The Nrf2-HO-1 system and inflammaging. Front Immunol. 15, 1457010(2024).
  16. Fan, Y., et al. Perillaldehyde Ameliorates Aspergillus fumigatus Keratitis by Activating the Nrf2/HO-1 Signaling Pathway and Inhibiting Dectin-1-Mediated Inflammation. Invest Ophthalmol Vis Sci. 61 (6), 51(2020).
  17. Luan, S., et al. Gallic Acid Ameliorates Aspergillus fumigatus Keratitis Through Reducing Fungal Load and Suppressing the Inflammatory Response. Invest Ophthalmol Vis Sci. 63 (12), 12(2022).
  18. Gu, L., et al. Hydroxytyrosol downregulates inflammatory responses via Nrf2/HO-1 axis during fungal keratitis and exerts antifungal effects. Int Immunopharmacol. 149, 114202(2025).
  19. Yu, B., et al. Ebselen improves fungal keratitis through exerting anti-inflammation, anti-oxidative stress, and antifungal effects. Redox Biol. 73, 103206(2024).
  20. Liu, X., et al. Macrophage Membrane-Coated Nanoparticles for the Delivery of Natamycin Exhibit Increased Antifungal and Anti-Inflammatory Activities in Fungal Keratitis. ACS Appl Mater Interf. 16 (44), 59777-59788 (2024).
  21. Liu, F., et al. Synergistic wall digestion and cuproptosis against fungal infections using lywallzyme-induced self-assembly of metal-phenolic nanoflowers. Nat Comm. 15 (1), 9004(2024).
  22. Leal, S. M., et al. Distinct Roles for Dectin-1 and TLR4 in the Pathogenesis of Aspergillus fumigatus Keratitis. PLoS Pathogens. 6 (7), e1000976(2010).
  23. Awad, R., Ghaith, A. A., Awad, K., Mamdouh Saad, M., Elmassry, A. A. Fungal Keratitis: Diagnosis, Management, and Recent Advances. Clin Ophthalmol. 18, 85-106 (2024).
  24. Qu, S., Zheng, S., Muhammad, S., Huang, L., Guo, B. An exploration of the ocular mysteries linking nanoparticles to the patho-therapeutic effects against keratitis. J Nanobiotechnol. 23 (1), 184(2025).
  25. Kim, L. N., Karthik, H., Proudmore, K. E., Kidd, S. E., Baird, R. W. Fungal Keratitis, Epidemiology and Outcomes in a Tropical Australian Setting. Trop Med Infect Dis. 9 (6), (2024).
  26. Puumala, E., Fallah, S., Robbins, N., Cowen, L. E. Advancements and challenges in antifungal therapeutic development. Clin Microbiol Rev. 37 (1), e0014223(2024).
  27. Yagishita, Y., Gatbonton-Schwager, T. N., McCallum, M. L., Kensler, T. W. Current Landscape of NRF2 Biomarkers in Clinical Trials. Antioxidants (Basel). 9 (8), (2020).
  28. Li, X., et al. Developing the biomarker panels and drugs by proteomic analysis for autoimmune uveitis and posterior scleritis. iScience. 27 (12), 111389(2024).
  29. Jin, K., Zhang, C. Personalized Medicine in Ophthalmic Diseases: Challenges and Opportunities. J Pers Med. 13 (6), (2023).

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

再版と許可

タグ

Nrf2経路HO-1発現酸化ストレス角膜炎症ホスト指向療法抗酸化応答サイトカイン抑制
お問い合わせ
図書館に推薦する

プライバシー

利用規約

ポリシー

著作権 © 2026 MyJoVE Corporation. 無断転載を禁じます。