股関節置換術における ABCB1 C3435T(rs1045642)遺伝子多型および術後鎮痛との関連に関する実験的評価

サマリー

本研究は、股関節置換術後の痛み管理に共通の遺伝的変異が影響を与えるかどうかを調査しました。異なる遺伝子型の患者は、痛みの強さ、鎮痛剤の使用、痛みに関連する生物学的反応において明確な違いを示しました。

要約

本研究は、股関節置換術を受けた患者における ABCB1 (MDR1)C3435T(rs1045642)遺伝子多型性と術後鎮痛との関連を調査しました。2023年1月から2024年1月の間に当院で股関節置換術を受けた合計100名の患者に、術後患者管理によるスフェンタニルによる静脈内鎮痛を受けました。術前血清サンプルを採取し、TaqMan SNP遺伝子型解析法を用いてゲノム検出を行いました。C3435T遺伝子型によると、患者は野生型ホモ接合体(CC群)、変異ヘテロ接合体(CT群)、変異ホモ接合体(TT群)に分類されました。臨床的パラメータ(ベースライン特性、視覚アナログスケール(VAS)の痛みスコア、スフェンタニルの摂取量、血清痛メディエーター(プロスタグランジンE2(PGE2)、サブスタンスP(SP)、βエンドルフィン(β-EP))、ハミルトン不安・うつスコア、睡眠の質、手術後24時間以内の有害事象の発生率などを比較しました。基底の特徴はグループ間で類似していました(p > 0.05)。24時間時点のVASスコア、スフェンタニル用量、血清PGE2、SPおよびβ BPのレベルは、CT群およびTT群でCC群に比べて有意に低く(p < 0.05)。TT群はCC群とCT群の両方に比べてハミルトン不安およびうつスコアが低下し(p < 0.05)、CT群はCC群よりも高い不安およびうつスコアを示しました(p < 0.05)。睡眠の質および有害事象発生率はグループ間で有意な差はなく(p > 0.05)。これらの結果は、 ABCB1 (MDR1)C3435T(rs1045642)の多型性と術後鎮痛効果のばらつきとの間に潜在的な関連がある可能性を示唆しています。TT遺伝子型を持つ患者は、鎮痛効果の向上、スフェンタニルの必要量の低減、心理的転帰の改善を経験する傾向がありました。これらの結果は有望ですが、サンプルサイズが少なく単一中心設計であるため、解釈には注意が必要です。これらの観察結果を確認し、臨床的適用性を評価するために、さらなる大規模な研究が必要です。

概要

股関節置換術とは、損傷した股関節を人工人工股関節で手術で置き換えることを指します。初期の大腿骨壊死、股関節変形性関節症、その他の疾患では、伝統中西医学の統合的な保存的治療によって症状を緩和し、症状の進行を遅らせることができます^。股関節の痛みや変形が歩行に影響を及ぼす場合、薬物などの保存的治療では改善できず、生活の質に深刻な影響を与えます。股関節置換手術は、関節痛の緩和、股関節機能の再構築、生活の質の向上のために選べます。痛みによる一連の病態生理学的変化は、高^{齢患者の心血管}疾患および脳血管疾患のリスクを高める^2,3。術後の痛みは股関節機能の回復に深刻な影響を与え、患者の安静時間を延長し、下肢の血栓症リスクを高め^ます。効果的な鎮痛は、手術後のストレス反応を緩和するだけでなく、患者の入院期間を短縮することができます。エピジェネティックな調節とは、DNA配列は変化しないものの、遺伝子発現は環境要因によって影響を受けるというものです。⁵。最近の研究では、エピジェネティックな調節と慢性疼痛の発生・発症の間に相関関係があること^{が示されており}、慢性痛や急性痛は環境要因と遺伝子の相互作用の結果であることが多いとされています。エピジェネティックな調節要素と慢性痛の関係を理解し、特に慢性痛の発生や発症に密接に関連するバイオマーカー(エピジェネティック調節に関連するもの)を特定することで、慢性疼痛感受性の診断、薬物治療効果の評価、そして最終的に個別化された正確な鎮痛を促進するのに役立ちます。ABCB1遺伝子(多剤耐性遺伝子1、MDR1)におけるC3435T多型(rs1045642)は、エクソン26に位置するよく特徴づけられた単一塩基変異体です。この多型は、P-グリコプロテイン(P-gp)の変異体をコードしており、P-gpはオピオイドを含むさまざまな薬剤の細胞吸収と排出を調節し、その薬動学や^{治療反応に影響を与え}ます8。ABCB1の遺伝的変異の中で、同義の多型C3435T(rs1045642)は、薬物反応の個体間変動に関連して広く研究されています。ABCB1C3435T(rs1045642)はMDR1遺伝子⁹のエクソン26に位置する同義置換です。アミノ酸配列自体は変化しませんが、蓄積される証拠により、この変異体はmRNAの安定性や翻訳速度に影響を与え、P-グリコプロテインの折りたたみ、発現レベル、輸送効率に影響を与える可能性があります。研究ごとに一貫した結果はありませんが、いくつかの報告ではT対立遺伝子がP-gp発現の低下や基質特異性の変化と関連していることが示されています¹⁰。P-gpは血脳関門で発現し、多くの薬剤、特に特定のオピオイドの中枢神経系への浸透を制限するため、ABCB1 C3435T多型性はスフェンタニル感受性やオピオイド関連の副作用の個人差に寄与する可能性があります¹¹。

本研究の目的は、股関節置換術を受けた患者における ABCB1 C3435T多型が術後の鎮痛効果および痛み関連転帰の個人間変動と関連しているかどうかを調査することでした。股関節置換手術は中等度から重度の術後痛みを伴うことが一般的であり、スフェンタニルなどのオピオイドは術後の鎮痛に日常的に使用されます。しかし、鎮痛反応やオピオイド関連の副作用には個人間で大きな差が存在し、臨床的要因だけでは完全に説明できません。 ABCB1 遺伝子によってコードされるP-糖タンパク質は、血液脳関門を含む生物学的膜を越えた薬物輸送の調節に重要な役割を果たしているため、 ABCB1 の遺伝的変異はオピオイドの反応や中枢鎮痛効果に影響を与える可能性があります。したがって、 ABCB1 C3435T多型と術後の鎮痛との関係を調べることで、股関節置換術後の痛み管理の変動に遺伝的寄与する助けとなる可能性があります。異なる遺伝子型患者間での術後鎮痛効果の違いを論じることで、本研究は術後痛みの個人差を明らかにし、臨床的個別化鎮痛の理論的基盤を提供することを目指しています。同時に、C3435T遺伝子多型が術後鎮痛にどのように影響するかの理解を深め、今後の研究の基盤を提供します。

プロトコル

本研究はヘルシンキ宣言に基づき実施され、福州伝統中医病院の医療倫理委員会(承認番号:LC-2023-048)により承認されました。登録前にすべての参加者から書面によるインフォームドコンセントが取得されました。

データと手法
研究仮説に基づき、前向きコホート分析の研究プロトコルを開発しました。選択的股関節置換手術を受ける患者は合計100名で前向きに登録され、平均年齢は6.97歳±58.41歳でした。 図1 はこのプロトコルの技術的ロードマップを示しており、研究デザインの詳細は以下のセクションで示されています。

研究デザインと参加者
これは、2023年1月から2024年1月にかけて全身麻酔下で一次股関節置換術を受ける予定の成人を連続して登録した前向きコホート研究です。対象年齢は18歳から60歳、米国麻酔学会(ASA)クラスI-IIおよび同じ整形外科チームによる手術でした。除外基準には、有意な心肺、肝、腎機能障害(血清クレアチニン>1.5 mg/dLまたはALTとして定義>正常の上限の3倍)が含まれていました。慢性疼痛の既往歴(例:線維筋痛症、神経障害性疼痛);鎮静剤やオピオイドの乱用;鎮痛剤アレルギーが知られている;現在の病気中に他のオピオイドへの曝露、および術前鎮痛薬またはステロイドの長期使用(手術前3か月以内>1週間)。参加者から、術前で5mLのEDTA抗凝固静脈血を採取し、ジェノタイピングを行いました。ゲノムDNAは、製造元の指示に従って市販のDNA抽出キットを用いて末梢血から抽出されました。 ABCB1 C3435T(rs1045642)多型はポリメラーゼ連鎖反応を用いた方法で遺伝子型決定を行い、確立されたプロトコル¹⁰に従って遺伝子型決定が行われました。 ABCB1 C3435T(rs1045642)多型の遺伝子型解析後、参加者はCC、CT、TTグループに階層化されました。外部の健康な対照群は含まれていません。すべての比較は遺伝子型群(CC、CT、TT)間で行われました。バイオマーカーや遺伝子型を解析する検査室職員は臨床結果を盲検にされました。

麻酔および術中管理
標準的なモニタリングには、心電図検査、非侵襲的血圧(5分ごとに測定)、パルスオキシメトリー、そして末期二酸化炭素(EtCO₂)が含まれていました。18Gカテーテルを用いた静脈内ラインが設置され、患者はマスクを通じて100%酸素で3分間プレ酸素投与されました。麻酔は、ミダゾラム0.05 mg/kg、シサトラクリウム0.1 mg/kg、スフェンタニル0.4 μg/kg、プロポフォールを1-2 mg/kgで増量し、意識喪失と十分な顎の弛緩が訪れるまで誘導されました。気管挿管は十分な神経筋遮断が確認された後に行われました(4回の列車カウント=0)。人工呼吸は体積制御モードで設定され、呼吸数は15回/分、潮流量は6-8 mL/kg、PEEPは5 cm H₂O、EtCO₂ は35-45 mmHgに維持するよう調整されました。麻酔はプロポフォール0.08-0.12 mg/kg/min、スフェンタニル0.15-0.30 μg/kg/hで維持されました。創傷閉合時に静脈麻酔は中止されました。血行動態は必要に応じて液体ボーラスまたは血管圧迫剤で管理され、MAPをベースラインの20%以内に維持しました。

股関節形成術¹²
患者は手術側が上向きの側側デキュービトゥス姿勢で配置されました。後外側アプローチが用いられ、大転子の中央に15〜20cmの皮膚切開を施しました。皮下組織と大筋膜が切開され、大臀筋は鈍く切断された。後部被膜が露出され、寛骨臼の縁に沿ってT字型の被嚢切開術が行われました。股関節は外旋と内収によって脱臼しました。大腿骨頭は切除され、大腿骨頸部は小転子の上1.0〜1.5cmまで切り詰められました。半関節置換術では、大腿管を連続ブローチで準備し(サイズ増加:1 mmステップ)、大腿幹は約15°の前反で埋め込まれました。全股関節置換術では、寛骨臼を点状出血が観察されるまで再加工し、カップ外転角45°、前退角15°を目標にしました。構成要素は、骨質とインプラントの安定性を術中の評価に基づき、セメント固定またはプレスフィットされました。縮小後、手術医は受動的屈曲、伸展、内外旋、外転、外転を用いて股関節の安定性と可動域を術中評価し、特にインピンジメントや脱臼の有無に注意を払いました。必要に応じて閉鎖吸引ドレーンを設置し、深部筋膜と皮下組織には吸収性縫合糸を用いて傷を層状に閉じ、皮膚の閉鎖には吸収性の縫合糸や皮膚ステープルを用いました。

術後患者管理静脈内鎮痛(PCIA)
すべての参加者に標準化されたスフェンタニルPCIAのレジメンが使用されました。鎮痛剤溶液は1.5 μg/mLのスフェンタニルを0.9%生理食塩水で希釈し、プログラム可能な注入ポンプに注入しました。ポンプの設定は、背景注入1 mL/h、ボーラス投与量1 mL、ロックアウト間隔10分で、臨床的適応がない限りローディング投与はなしでした。患者には回復領域でのPCIA使用に関する標準化された指導が提供されました。術後24時間のポンプログから累積スフェンタニル摂取量を記録しました。すべてのポンプモデル、使い捨て製品、消耗品は 材料表に記載されています。

血液採取と処理
術前遺伝子型検査サンプルは、EDTA抗凝固静脈血5mLを穏やかな反転で混合したものでした。痛み介質分析のために、術後1日目、2日目、3日目、7日目に5mLの静脈血を採取しました。血清の調製では、サンプルを室温で30分間凝固させました。血漿については、アッセイで指定された抗凝固剤が使用されました。サンプルは約1,000 x g で室温で15分間遠心分離し、血清または血漿を分離しました。上澄液は標識された低結合チューブに分割され、−80°Cで保存され、分析まで待たれました。凍結融解サイクルを最小限に抑えるため、各時間点につき最低2つのアリクオートが準備されました。

ゲノムDNA抽出とSNPゲノタイピング
ゲノムDNAは、製造元のプロトコルに従い、シリカ膜カラムベースのゲノムDNA抽出キット(市販)を用いて全血から抽出されました。DNA濃度と純度は分光光度測定で測定され、A260/280比が1.8〜2.0のサンプルは許容範囲とされました。DNAは使用まで−20°Cで保存されていました。

ABCB1 C3435T(rs1045642)多型は、事前設計されたTaqMan SNP遺伝子型分析法を用いてリアルタイムPCRプラットフォーム上でゲノタイプ化されました。このアッセイには、事前最適化されたプライマーと加水分解プローブが含まれていました。熱サイクル条件は製造元の推奨に従い(酵素活性化時は95°C、その後95°Cで15秒、60°Cで60秒のサイクルを40回行いました)。品質管理のために、テンプレートなしの対照群および重複サンプル(全体の≥10%)が含まれていました。遺伝子型判定は対立遺伝子識別解析ソフトウェアを用いて行われ、受理には呼声率≥95%および100%の重複一致が必要でした。

痛み媒介因子アッセイ
血清プロスタグランジン_E2 (PGE₂)、物質P(SP)、βエンドルフィン(β-EP)は、製造元の指示に従い検証済みの放射線免疫測定法またはサンドイッチ免疫測定キットを用いて測定されました。比較曲線は、予想濃度範囲にまたがる少なくとも5つの標準化合物を用いて生成されました。不明と制御は二重に実行されました。検出の下限値、アッセイ内変動係数、アッセイ間変異係数が記録されました。アッセイ内CV>10%またはアッセイ間CV>15%を用いたアッセイが繰り返し行われました。すべてのキット名とカタログ番号は 材料表に記載されています。

アウトカム指標
ベースラインの特徴には、年齢、性別、体格指数、手術期間、手術アプローチ(前方/後方)、義肢タイプ(セメント固定/非固定)、術前疼痛VAS(0-10)、術前不安・うつスコア、術中のスフェンタニル用量が含まれていました。24時間時の主要アウトカムは、Visual Analogue Scale(VAS、0-10)で測定した安静時の痛み強度およびPCIAポンプから記録された累積スフェンタニル摂取量でした。24時間の副次的アウトカムには、睡眠の質(スコア0-3;スコアが高いほど睡眠の質が悪くなること)、術後の吐き気および嘔吐の発生率(PONV)、およびハミルトン不安およびハミルトンうつ病スケールスコアが含まれていました。探索的アウトカムには、術後1日目、2日目、3日目、7日目の血清PGE₂、SP、β-EPレベルが含まれていました。

統計解析
連続変数は分布に応じて平均±標準偏差(SD)または中央値(四分位範囲)として示されます。カテゴリ変数をカウント(パーセンテージ)として使います。データはシャピロ・ウィルク検定を用いて正規性を、分散の均質性をレヴェン検定で検証しました。分散が等しい正規分布変数に対しては、Bonferroni(またはTukey)の事後比較を用いた一方行分散分析(ANOVA)が適用されました。それ以外の場合は、ダンの事後処理を用いたクルスカル・ウォリス検定が用いられました。カテゴリ変数はχ² または適切なフィッシャー厳密検定を用いて分析されました。遺伝子型および対立遺伝子の頻度を計算し、ハーディ・ワインバーグ平衡を^χ2 検定で評価しました。遺伝子型(例:T対立遺伝子保因者とCCの比較)と該当する場合の二分化アウトカムとの関連について、95%信頼区間(CI)を用いたオッズ比(OR)を推定しました。パラメトリック検定を適用する前に、データ分布は正規性(シャピロ・ウィルク検定)と分散の均一性(レヴェーン検定)を検証しました。仮定が破られた場合には、ノンパラメトリックな代替法(Kruskal-Wallis検定と事後ダン検定)が用いられました。カイ二乗検定を用いてハーディ・ワインバーグ均衡検証を行います。オッズ比(OR)と95%信頼区間(CI)を計算し、遺伝子型と術後疼痛スコア、ならびにスフェンタニルの摂取量との関連を分析します。両側p<0.05は統計的に有意とされました。解析は検証済みの統計ソフトウェアを用いて実施されました。

結果

参加者の特徴と遺伝子型分布
合計100名の患者が登録され、 ABCB1 C3435T多型の遺伝子型解析に成功しました。遺伝子型分布は、CCが40.0%(40/100)、CTが49.0%(49/100)、TTが11.0%(11/100)でした。対立遺伝子の頻度はCが64.5%(129/200)、Tが35.5%(71/200)でした。遺伝子型分布はハーディ・ワインバーグ平衡に適合していました(χ² =0.49, p=0.48; 表1)。年齢、BMI、手術時間、性別、手術アプローチ、義肢タイプ、術前痛(VAS)、術前不安(HAM-A)、術前うつ(HAM-D)、および術中のスフェンタニル用量などのベースライン特徴は、3つの遺伝子型群で類似していました(いずれもp > 0.05; 表2)。

ベースライン特性の比較
CC、CT、TT群間で、年齢、体格指数(BMI)、平均手術時間、性別分布、術前疼痛視覚ア...

ディスカッション

股関節置換術は一般的な大規模な整形外科手術であり、術後の痛みは患者が直面する主な問題の一つです。術後鎮痛の効果は、患者の年齢、性別、体重、痛み感受性などの個別要因に加え、手術モードや術後のリハビリテーション運動といった外部要因にも影響されます^13,14。さらに、薬剤鎮痛スキームは、オピオイドの用量や投与方法など、術後の鎮痛効果に影響を与える重要な要因でもあります。術後の痛みは、手術患者の一般的な合併症の一つであり、患者の生活の質に影響を与えるだけでなく、社会的・経済的な負担も引き起こします。未治療または不十分な術後急性痛は徐々に慢性痛へと進行し、さらなる問題を引き起こすことがあります。しかし、痛みや鎮痛薬に対する個人の感受性に大きな違いがあり、術後の鎮痛は問題となります。この個人差は外部要因だけでは完全に説明できないため、遺伝的要因が重要な役割を果たす可能性を示しています¹⁵。遺伝的要因と痛みの関係を探るた...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
0.9%塩化ナトリウム注入	フレゼニウス・カビ	19194	スフェンタニル(PCIA溶液)やその他の薬剤の希釈剤;手術中の創傷洗浄に使用[文書:「術後PCIA」、「股関節形成術手術」]。
アレリック識別解析ソフトウェア(リアルタイムPCR用)	指定されていません(リアルタイムPCRプラットフォームと同じ)	詳細は不明です	ABCB1 C3435Tの遺伝子型呼喚に使用;呼び出しレート&GEが必要です;95%、重複一致率100%[文書:「ゲノムDNA抽出およびSNP遺伝子型分け」]。
遠心分離機(血清/プラズマ分離用)	ベックマン・カウルター	Avanti J - E	運行時間は~1000 &;g (≈3000rpm、ローター半径10cm);血液サンプルを室温で10〜20分間遠心分離し、血清/血漿を分離します[文書:「血液採取と処理」]。
シサトラクリウム注射	江蘇衡瑞製薬有限公司	H20060869	気管挿管用の神経筋遮断薬、用量0.1 mg/kg [文書:「麻酔および術中管理」]。
臨床化学分析装置	ロッシュ・ダイアグノスティクス	コバス c 501	血清バイオマーカー(PGE2、SP、&β;-EP)を検出します[文書:「痛み媒介因子アッセイ」]。
EDTA抗凝固剤	BDバキュテイナー	366450	ゲノムDNA抽出および遺伝子型解析のための術前静脈採血(5 mL)に使用されます。凝固を防ぐために穏やかな逆倒によって混合されたサンプル[文書:「研究デザインと参加者」、「血液採取および処理」]。
心電図(ECG)	フィリップス	CardioPerfect MX800	標準的な術中モニタリングの一環[文書:「麻酔および術中管理」]。
付注	クラリベイト・アナリティクス	X9	文献管理や書式作成(ジャーナルの引用基準に準拠)を補助します[参照:「JoVE_Materials.xls」]。
終末二酸化炭素(ETCO2)モニター	マシモ	放射線 - 97	標準的な術中モニタリングの一部;ノルモカプニアの維持に用いられます[文書:「麻酔および術中管理」]。
低温冷蔵庫(-80度;C/-20°C)	ハイアール	DW - 86L626(-80°C);DW - 25L262(-20°C)	-80°Cは分離した血清/血漿の保存用;-20°抽出されたゲノムDNAの保存のためのC[文書:「血液サンプリングと処理」、「ゲノムDNA抽出およびSNPゲノタイピング」]。
ミダゾラム注射	江蘇恩華製薬有限公司	H10980025	麻酔誘導薬、用量0.05 mg/kg【文書:「麻酔および術中管理」】。
非侵襲的血圧計	オムロン	HEM - 9072T	標準的な術中モニタリングの一環[文書:「麻酔および術中管理」]。
プログラム型静脈内鎮痛(PCIA)ポンプ	フェニックス・ファーマシューティカルズ	EK-022-16	術後のスフェンタニル投与に使用されます。設定:背景点滴1 mL/h、ボーラス投与量1 mL、ロックアウト間隔10分;累積スフェンタニル消費量の記録[文書:「術後PCIA」]。
プロポフォール注射	アストラゼネカ	H20120088	麻酔誘発(意識喪失まで調整)および維持(0.08-0.12mg·Kg-1middot;min-1)[文書:「麻酔および術中管理」]。
プロスタグラニンE2 (PGE2)放射免疫測定キット	ケイマン・ケミカル	514010	血清PGE2検出の検証済みキット;重複して実行し、分析内CVとLEを組み合わせて実施します。10%およびアッセイ間CV≤15%(限度を超える場合は繰り返す)[文書:「痛み介剤検査」]。
パルスオキシメーター			標準的な術中モニタリングの一部(SpO2の測定)[文書:「麻酔および術中管理」)]。
リアルタイムPCRプラットフォーム	フェニックス・ファーマシューティカルズ	EK-022-16	ABCB1 C3435Tの遺伝子型解析に使用;熱循環条件:酵素活性化、40回の変性サイクル(95度、C、~15秒)およびアニーリング/エクステンション(60°C、~60秒)[文書:「ゲノムDNA抽出およびSNP遺伝子型解析」]。
シリカ膜カラムベースゲノムDNA抽出キット	キアゲン	51104	全血からゲノムDNAを抽出するために使用されます。手順には細胞溶解、タンパク質消化、DNA吸着、逐次洗浄、100 & μでの洗脱が含まれます。L型洗脱バッファ[文書:「ゲノムDNA抽出およびSNP遺伝子型解析」]。
分光光度計	サーモフィッシャー・サイエンティフィック	ナノドロップ・ワン	DNA濃度と純度を測定します。A260/280 & asymmp のサンプル;1.8-2.0は許容範囲とされました[文書:「ゲノムDNA抽出およびSNP遺伝子型解析」]。
SPSS	IBMコーポレーション	26	統計解析に使用される:シャピロ・ウィルク正規性検定、Levene's検定、ANOVA、Kruskal-Wallis検定、そしてchi;²テストなど。[文書:「統計分析」;参考文献:「JoVE_Materials.xls」]。
物質P(SP)放射免疫測定キット	メルク・ミリポール	RAB0456	血清睡眠睡眠障害検出のための検証済みキット;PGE2キットと同じ品質管理基準[文書:「痛み媒介剤検査」]。
スフェンタニル注射	嘉泰天清製薬グループ有限公司	NA	麻酔誘導に使用(0.4 & μ;g/kg)、術中維持(0.15-0.30 & mu;g·Kg-1middot;h-1)、および術後のPCIA(1.5 & μ;0.9%生理食塩水で希釈したg/mL)[文書:「麻酔および術中管理」、「術後PCIA」]。
TaqMan SNP遺伝子型分析法(ABCB1 C3435T用、rs1045642用)	キアゲン	51104	ABCB1 C3435T多型のリアルタイムPCRゲノタイピング用に設計されたアレル特異的加水分解プローブアッセイ[文書:「ゲノムDNA抽出およびSNPゲノタイピング」]。
気管挿管機器(喉頭鏡、気管内チューブ)	ドレーガー	カノマック・ウルティマ	神経筋閉塞の確認後の気管挿管に使用されます[文書:「麻酔および術中管理」]。
容積制御人工呼吸器	Dräドイツ語	プリマス	術中の人工呼吸に使用されます。設定:呼吸数~15回/分、潮汐量6-8 mL/kgの予想体重[文書:「麻酔および術中管理」]。
β-エンドルフィン(β-EP)サンドイッチ免疫測定キット	フェニックス・ファーマシューティカルズ	EK-022-16	血清およびβ-EP検出のための検証済みキット;≥5つの基準[文書:「痛み媒介剤アッセイ」]。