方法論記事

哺乳類における大量排卵:Lagostomus maximusにおける自然自発多排および誘導多排卵の解析技術

DOI：

10.3791/69653

⸱

2026年2月6日

 ,  ,  ,  ,  , 
1Centro de Estudios Biomédicos Básicos, Aplicados y Desarrollo (CEBBAD), Universidad Maimónides, 2Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)

この記事について

サマリー

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

本プロトコルは、ラ ゴストムス・マキシムスにおける自然排卵および誘導排卵の解析方法を説明しており、自然排出、ホルモン誘発、精漿誘発排卵後の卵母細胞回復も含まれます。これは、高度多排卵性哺乳類モデルにおける卵巣反応性と生殖生理学を研究するための包括的な枠組みを提供します。

要約

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

南米平原のヴィスカーチャ( Lagostomus maximus)は、哺乳類の中で最も高い排卵率を持つ種として認識されており、最大で300個の卵子に達することもあります。この驚くべき多排卵現象は、その独特な生殖生理学を反映した複数の方法論的アプローチを通じて検証できます。自然排卵は繁殖期の卵母細胞放出によって評価され、卵管や子宮角を洗浄することで回収される種の自然排卵機構に関する洞察を提供します。さらに、ゴナドトロピンなどの外因性ホルモンを用いた実験的排卵誘導により、卵巣反応性の制御された評価が可能となり、ヒストリコグナス齧歯類における内分泌調節を理解するための貴重なモデルを提供します。第三のアプローチは、自己精漿を排卵の生理的トリガーとして用いるもので、この種における誘導性と自発的なメカニズムの共存を示しています。これらの技術は、卵胞の募集と卵子放出の動態を明らかにするだけでなく、 L. maximus を生殖生物学の比較モデルとして確立し、哺乳類の排卵制御の理解に翻訳的な示唆をもたらす可能性があります。

概要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

南米平原ビスカチャ(Lagostomus maximus)は、卓越した生殖生理学を特徴とするヒストリコグナス齧歯類であり、1サイクルあたり300個を超える排卵率を誇ります1,2。この特徴により、L. maximusは哺乳類の卵巣機能と排卵制御を研究する自然なモデルとして位置づけられています(3,4,5,6,7,8,9,10,11)。

典型的な自然排卵者とは異なり、L. maximusは自然性と誘導排卵の両方を示します2.この二重性は、大量の卵胞成長と非同期排卵と組み合わさり、内分泌または組織学的エンドポイント4,12,13,14だけに基づく従来のアプローチに挑戦しています。したがって、卵母細胞放出のタイミングと大きさを正確に決定するためには、直接的かつ定量的な手法の使用が不可欠です。

成体のメスのビスカチャは、アルゼンチン・ブエノスアイレス州ベラサテギのペレイラ・イラオラ公園(南緯34度49分57秒、西経58度06分12秒)にある自然の定住個体群から採取されました。私たちは、天然資源に対する主権的権利がブエノスアイレス州の独占財産であることを認めます。捕獲された動物の数はブエノスアイレス州農業省によって承認されました。メスは、年間を通じて異なる時期に巣穴の入り口に設置された生きた罠を使って捕獲されました。

捕獲期間はLlanos & Crespo15によって確立された種の自然繁殖サイクルに基づいて選定され、フィールドワーク経験7、8、10、14に基づいて精緻化されました。この種の主な繁殖期は晩夏(3月)から春の始まり(9月下旬)まで続き、特に子孫を失ったメスでは10月に二次繁殖期が訪れます。それに従い、以下の作業グループが決定されました:a) グループI(N=27):2月下旬から4月初旬(妊娠なし、主要な生殖期開始);b) グループII(N=26):9月中旬から10月下旬(妊娠なし、授乳後発情期);グループIII(N=35):12月〜1月(妊娠せずホルモン誘発の排卵);グループIV(N=7):12月〜1月(妊娠せず、精漿誘発排卵)。

本研究は、 L. maximusの排卵解析のためのいくつかの方法論的アプローチを提示し検証します:(1) 直接的な卵母細胞回収による自然排卵の評価;(2) 外因性ゴナドトロピンを用いた排卵誘導;および(3)自己精漿による排卵誘導。それぞれの技術は、卵胞の動態、卵母細胞の成熟、排卵を制御する調節機構について補完的な洞察を提供します。

卵管と子宮角の洗浄により卵母細胞の直接回収と排卵の正確な定量化が可能となり、濾胞の発達や卵母細胞形態との相関が可能となります 19,20,21。外因性ゴナドトロピンを用いたホルモン刺激は、実験室齧歯類で用いられたプロトコルを応用し、卵巣の反応性と卵母細胞放出のタイミングを制御された評価を可能にします。一方で、自己精漿を生理的トリガーとして利用することは、以前ウサギやラクダ科の誘導排卵体で記述されていた23,24,25で、排卵に関与する内分泌および副分泌因子を探る革新的な手段を提供します。

これらの補完的な手法を統合することで、本研究はL. maximusにおける排卵機構の検証のための再現性のある枠組みを提供します。自然モデルと誘導モデルの組み合わせにより、自発的な卵胞の募集、排卵効率、精液介質反応の区別が可能になります。さらに、これらのアプローチは自然発生的な単為生殖卵母細胞活性化や「欠陥」卵子と「真胚性」卵子の共存現象を明らかにし、卵胞選択と卵母細胞能力の理解に寄与します。

種特異的な意味合いを超えて、ヴィスカチャモデルは比較生殖生物学にとってより広範な関連性を提供します。混合排卵戦略は誘導排卵者と自然排卵者の特徴を橋渡しし、家畜種や人間を含む他の哺乳類の生殖過程との貴重な類似点を提供しています。

ここに詳述された方法論的プロトコルは、再現性を確保し、濾胞動態、排卵調節、ホルモン操作など多様な実験文脈への適応を促進するために設計されています。

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プロトコル

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ここに記載された実験プロトコルは、実験動物利用およびケアに関する機関委員会(CICUAE、マイモニデス大学、プロトコル番号#6184)によって審査・承認されました。捕獲、取り扱い、安楽死は、実験動物のケアと使用に関するすべての地方、州、連邦の規制に準拠した訓練を受けた技術スタッフによって行われました。畜産は、国立衛生研究所(NIH)の実験動物の飼育と利用に関するガイドライン28およびアメリカ哺乳類学会(ASM)の野生哺乳類研究利用ガイドライン29に従っていました。すべての実験はARRIVE 2.0ガイドラインに準拠しています。使用される動物の数を最小限に抑えるためにあらゆる努力が払われました。南米の平野ビスカチャ(Lagostomus maximus)は絶滅危惧種とは見なされていません。

1. 排卵のホルモン誘発

注:この節では、捕獲されたヴィスカチャの非妊娠女性における排卵のホルモン誘発を示します。3つの異なるプロトコルの選択肢が議論されています。

  1. プロトコルA:
    1. 0時間と24時間に200 IUの馬絨毛性ゴナドトロピン(eCG)を筋肉内投与し、その後48時間に500 IUのヒト絨毛性ゴナドトロピン(hCG)を投与します。
    2. メスは安楽死まで休ませてください。
    3. hCG投与後60〜132時間以内にメスを安楽死させてください(第3節参照)。
  2. プロトコルB:
    1. 0時間と24時間に筋内で200 IUのeCGを投与し、72時間後に1,000 IUのhCGを投与します。
    2. メスは安楽死まで休ませてください。
    3. hCG投与後60〜132時間以内にメスを安楽死させてください(第3節参照)。
  3. プロトコルC:
    1. 0時間、24時間、48時間に筋内で250 IUのeCGを投与し、72時間に豚黄体形成ホルモン(pLH)2mgを投与します。
    2. メスは安楽死まで休ませてください。
    3. pLH投与後60〜132時間以内にメスを安楽死させてください(セクション3および 表1参照)。
      注:各グループの動物は、hCG投与後60時間から132時間の範囲で安楽死されました。この時間的分布は、この種の排卵期間の延長性を確認する上で不可欠でした。特に成熟卵母細胞の独占採取を目的とした実験では、hCG後120時間で安楽死が一貫して行われていました。

2. 精漿による排卵誘導

注:ホルモンが活性化した女性において、精漿が筋内投与による排卵誘導能力を検証してください。

  1. 精液の採取と調製
    1. 生殖活動のある雄から電気射精を用いて精液を採取する方法は、Giacchinoによる32によるもの。
    2. 200 × g の遠心分離精液を室温で10分間ペレット化し、精子細胞や細胞の残骸をペレット化します。
    3. 上清液(精漿)にペニシリンとストレプトマイシンを補足し、使用まで-20°Cで保存してください。
  2. 精漿による非妊娠女性の排卵誘導
    1. 女性それぞれに0時間と24時間に筋内で200 IUのeCGを投与します。
    2. 最終的なeCG投与から48時間後に精液を筋肉内注射してください。
    3. メスは安楽死まで休ませてください。
    4. 精液漿注射後72時間後に動物を安楽死させてください(第3節参照)。
      注意:精液の代わりに生理食塩水を注射した対照雌を含めてください。

3. 麻酔、安楽死、生殖管採取

注意:麻酔および人道的な安楽死方法を用いて、卵母細胞および組織学的分析のために完全な生殖器官を確保してください。

  1. 製造者の推奨および確立された機関プロトコルに従い、13.5 mg/kgのケタミン塩化物と0.6 mg/kgのキシラジン塩化物を単回の計算された筋肉内注射で安楽死を誘発します。
  2. 痛みに対する反応がない(足の反射)で深部麻酔を確認できます。
  3. 動物を仰向けに寝かせ、腹部を消毒します。
  4. 腹腔を外科的に開き、すべての腹部臓器を完全に露出させてください。
  5. 動物の全体的な状態を確認し、排卵聖痕の存在による自然排卵またはホルモン誘発排卵を確認するための一般的な検査を行います。
  6. 血清学的検査のために上大静脈を直接穿刺して血液サンプルを取得します。
  7. 動物に対して心内投与で0.5 mL/kgのペントバルビタールナトリウムを投与して安楽死を行います。
  8. 卵巣、卵管、子宮角を慎重に解剖・除去し、構造を損傷しないように注意してください。
  9. 組織は氷のように冷たいリン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)に浸し、処理≤15分まで待つ。

4. 卵母細胞の回復

注意:卵管や子宮角から卵母細胞を優しく洗浄することで、放出された配偶子を完全に回収しつつ組織損傷を最小限に抑えてください。

  1. 洗浄装置は、0.9% NaClに4 mg/mL BSA、100 μg/mLペニシリンG、100 IU/mLのストレプトマイシンを補足した1 mLの注射器に、鈍くなった26Gの針を取り付けて準備します。
  2. 各卵管の漏水管に優しく針を挿入し、ゆっくりと洗浄液を注入します。
  3. 遠位卵管と子宮角からの排水液を無菌ペトリ皿に集めます。
  4. 回収した液体が透明で卵母細胞や細胞の破片が見えないまで繰り返しフラッシュします。
  5. 卵母細胞を鉱物油の下で4 mg/mLのBSAおよび抗生物質を含む100 μLのM2培地に移します。
  6. 立体顕微鏡で滴を観察して回復の成功を確認し、積乱細胞を欠く遊離卵母細胞が液体中に分散しているのを観察すると予想されます。
  7. 排出物が透明になり、立体顕微鏡で追加の卵母細胞が見つからないまで(通常は1つの卵管に3〜5回の洗浄)洗浄を続けます。
    注意:回収された卵母細胞は低倍率で球状かつ半透明に見えるはずです。
  8. 卵母細胞は第6節で述べた形態的完全性に基づいて分類します。

5. 卵母細胞形態学的評価

注:回収された卵母細胞の質は、細胞質の外観、透明帯の均一性、核成熟段階に基づいて評価してください。

  1. 球状の形状、均一な透明帯、均一な半透明細胞質、目に見える生殖性小胞または第一極体を示す卵母細胞は正常と特定されます。
  2. 細胞質が暗く、粒状で、断片的に見える場合、または透明帯が不規則であれば、卵母細胞を異常と特定します。
  3. 核成熟段階を胚嚢(GV)、胚嚢胞分解(GVBD)、または中期II期(MII)として記録します。

6. 卵母細胞核成熟および減数分裂紡錘体の完全性の評価

注:αチューブリンの免疫蛍光染色およびクロマチンカウンター染色によって核成熟および紡錘体形態を評価します。

  1. 卵母細胞を2%パラホルマルデヒド(PFA)に20分間固定します。
  2. PBSで0.2%のTriton X-100を40分間透過します。
  3. フィックス後は2%のPFAで20分間洗い、PBSで3回(各30分)洗います。
  4. PBSに2%のヤギ血清、2%のBSA、2%のミルクパウダー、0.1Mグリシン、0.01%のTriton X-100をPBSに≥1時間ブロックします。
  5. 卵母細胞を4°Cでマウス抗α抗チューブリン抗体(1:200)で一晩培養します。
  6. PBSで30分間洗浄し、フルオレセイン・イソチオシアネート(FITC)結合ヤギ抗マウスIgG(1/1000)とともに暗闇で1時間培養します。
  7. 10 μg/mLのHoechst 33324で10分間カウンターステインし、2%BSAを含むPBSで洗います。
  8. 卵母細胞をアンチフェード培地にマウントし、共焦点顕微鏡で画像を撮ります。
  9. EZ-C1ソフトウェア(EZ-C1バージョン3.90)を用いて画像を撮影・処理;画像処理ソフトウェアで必要に応じてコントラストや明るさを調整します。
    注:染色成功は、減数分裂紡錘体(FITC)の明確な緑色蛍光パターンとHoechst 33324による青色核染色によって示されます。

7. 統計解析

注:実験群間の排卵反応と卵子の質を比較するために定量データを分析してください。

  1. データを平均標準±として表現してください。
  2. 2群比較には学生のt検定を用いてください。
  3. 一方元ANOVAを適用し、その後ボンフェローニの事後検定を適用して複数比較します。
  4. p < 0.05を統計的に有意なものと考えます。

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結果

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自然排卵

2月下旬から4月中旬に捕獲された27頭のメス(グループI)のうち12頭が排卵期で観察され、二次交尾期(9月/10月)(グループII)では26頭中10頭が排卵を示しました。両方の捕獲期間で、排卵中のメスの約40%の成功率がほぼ同じで観察されました。卵管の膨大は認められず、排卵スティグマの有無にかかわらず卵母細胞を採取しました(図1A,B)。卵母細胞は裸の状態で採取され、積乱細胞に包まれていなかった(図1C、表2)。

全体平均は女性あたり154個(±87個)の卵母細胞で、範囲は29から326で、グループI(198 ±92 [平均+標準差]、範囲33-326)とグループII(平均116 ± 66、範囲29-204)間で統計的に有意な差は認められませんでした(表2)

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ディスカッション

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ここで示す平原ビスカチャの排卵研究プロトコルは、自然および実験的に誘発された排卵イベントの両方を評価するための再現可能な枠組みを提供します。このプロトコルの大きな利点は、平原ビスカチャから放出される非常に多くの卵母細胞を直接定量・特徴付けできることであり、これは他の哺乳類モデルでは他に類を見ない特徴です。ホルモンプロファイルや組織学的切片に基づく間接的な方法とは異なり、卵管および子宮の洗浄は、未去形の卵母細胞に即座にアクセスし、定量的および定性的分析の両方を可能にします。このアプローチはまた、受精の可能性や形態学的質を評価するために極めて重要な、積雲-卵母細胞複合体(COC)の完全性を保持します。

もう一つの利点は、方法論的な柔軟性があることです。自然排卵とホルモン誘発または精液誘導性の血漿誘導排卵を組み合わせることで、同一種内の異なる排卵誘発因子の比較解析を可能にします。この多様性により、研究者は排卵過程における内分泌、機械的、精液的要因の相対的な寄与を解析でき、これは従来の実験室モデルでは容易に達成できないこと...

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開示事項

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著者らは、報告された研究の公平性を損なう利益相反は存在しないと宣言しています。

謝辞

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この活動は、アルゼンチンのマイモニデス大学の校内財政援助とアルゼンチンのFONCYT-AMPCYT機関(PICT-2018-04619、NPLに付与)によって支援されました。著者らは特に、動物捕獲を許可してくれたアルゼンチンブエノスアイレス州政府農業省に感謝しています。動物の捕獲や取り扱いにおいて貴重な支援をしてくれたECAS(ECAS)の職員にも感謝します。そして、麻酔および手術手技の際の支援に対して、CCV-マイモニデス大学のセルジオ・フェラリス獣医およびフェルナンド・ランゲ獣医に感謝しました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
Adobe Photoshopアドビ・システムズ社、アメリカ該当なし画像処理
牛血清アルブミン(BSA)シグマ・オルドリッチ、アメリカA9647洗浄媒体およびブロッキングバッファーに使用
遠心分離機(精液処理用)エッペンドルフ、ドイツ5417R精液プラズマ製製
コンフォーカル顕微鏡(C1 Eclipse E800)ニコン株式会社、日本該当なし卵母細胞イメージング
電気射精器実験室で設計されました。カビオモルフ類齧歯類用に家畜哺乳類から適応該当なし精液採取
エウタニル(ペントバルビタールナトリウム、ジフェニルヒダントインナトリウム)ブラウワーS.A.、アルゼンチン該当なし安楽死
FITC結合ヤギ抗マウスIgG(AP124F)ケミコン、アメリカAP124F二次抗体
ヘマトキシリン・エオシン染色キットシグマ・オルドリッチ、アメリカ様々な組織学
ホエヒスト 33324サーモフィッシャー・サイエンティフィック、アメリカH3570核染色
ケタミン塩化物ホリデイ・スコットS.A.、アルゼンチン該当なし麻酔
層流フードサーモ・サイエンティフィック、アメリカ該当なし無菌処理
光顕微鏡オリンパス、日本BX51組織学
ルトロピン-V(pLH)バイオニッチ動物医療、カナダ該当なしホルモン誘導
M2中型シグマ・オルドリッチ、アメリカM7167卵母細胞回復
ミネラルオイルシグマ・オルドリッチ、アメリカM8410卵子培養
ノボルモン5000(eCG)シンテックスS.A.、アルゼンチン該当なしホルモン誘導
オヴシン(hCG)シンテックスS.A.、アルゼンチン該当なしホルモン誘導
パラホルムアルデヒド(PFA、2%および4%)シグマ・オルドリッチ、アメリカ158127固定
ペニシリンGシグマ・オルドリッチ、アメリカP3032メディア用抗生物質
立体顕微鏡ライカ・マイクロシステムズ、ドイツM80卵母細胞の同定
ストレプトマイシンGibco、サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック、アメリカ11860038メディア用抗生物質
鈍い針付き注射器(1 mL)BDバイオサイエンス、アメリカ305219卵管/子宮の洗浄
トライトン X-100シグマ・オルドリッチ、アメリカT8787透過化
VectaShieldマウントメディアベクター・ラボラトリーズ、アメリカH-1000蛍光用のマウント
キシラジン塩化物リッチモンド研究所、アルゼンチン該当なし麻酔
キシレンシグマ・オルドリッチ、アメリカ534056脱ワックスパラフィン断面
&α;-チューブリン単クローナル抗体(マウス抗α;-チューブリン、SC-5286 B7)サンタクルーズ・バイオテクノロジー、アメリカSC-5286 B7減数分裂紡錘体免疫染色のために

参考文献

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Weir, B. J. The reproductive physiology of the plains viscacha, Lagostomus maximus. J Reprod Fertil. 25, 355-363 (1971).
  2. Leopardo, N. P., Inserra, P. I. F., Giacchino, M., Caram, D. A., Willis, M. A., Vitullo, A. D. Polyovulation in the South American plains vizcacha, revisited: coexistence of spontaneous and induced ovulation. J Exp Zool A Ecol Integr Physiol. 343 (6), 724-739 (2025).
  3. Caram, D. A., Inserra, P. I. F., Vitullo, A. D., Leopardo, N. P. Autophagy favors survival of corpora lutea during the long-lasting pregnancy of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Rodentia Caviomorpha). Sci Rep. 14 (1), 11220(2024).
  4. Cortasa, S. A., et al. Achieving full-term pregnancy in the vizcacha relies on a reboot of luteal steroidogenesis in mid-gestation (Lagostomus maximus, Rodentia). PLoS One. 17, e0271067(2022).
  5. Flamini, M. A., Barbeito, C. G., Gimeno, E. J., Portiansky, E. L. Histology, histochemistry and morphometry of the ovary of the adult plains viscacha (Lagostomus maximus) in different reproductive stages. Acta Zool (Stockh). 90, 390-400 (2009).
  6. Fraunhoffer, N. A., et al. Hormonal behavior correlates with follicular recruitment at mid-gestation in the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Rodentia, Caviomorpha). Gen Comp Endocrinol. 250, 162-174 (2017).
  7. Jensen, F., Willis, M. A., Albamonte, M. S., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. Naturally suppressed apoptosis prevents follicular atresia and oocyte reserve decline in the adult ovary of Lagostomus maximus (Rodentia, Caviomorpha). Reproduction. 132, 301-308 (2006).
  8. Jensen, F., Willis, M. A., Leopardo, N. P., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. The ovary of the gestating South American plains vizcacha (Lagostomus maximus): suppressed apoptosis and corpora lutea persistence. Biol Reprod. 79, 240-246 (2008).
  9. Leopardo, N. P., Jensen, F., Willis, M. A., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. The developing ovary of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Mammalia, Rodentia): massive proliferation with no sign of apoptosis-mediated germ cell attrition. Reproduction. 141, 633-641 (2011).
  10. Leopardo, N. P., Vitullo, A. D. Early embryonic development and spatiotemporal localization of mammalian primordial germ cell-associated proteins in the basal rodent Lagostomus maximus. Sci Rep. 7 (1), 594(2017).
  11. Leopardo, N. P., Velazquez, M. E., Cortasa, S., González, C. R., Vitullo, A. D. A dual death/survival role of autophagy in the adult ovary of Lagostomus maximus (Mammalia-Rodentia). PLoS One. 15 (5), e0232819(2020).
  12. Weir, B. J. Reproductive Characteristics of Hystricogmorph Rodents. The Biology of Hystricomorph Rodents. , Symposia of the Zoological Society of London. London, UK. (1974).
  13. Dorfman, V. B., et al. Variation in progesterone receptors and GnRH expression in the hypothalamus of the pregnant South American plains vizcacha Lagostomus maximus (Mammalia, Rodentia). Biol Reprod. 89 (5), 115(2013).
  14. Inserra, P. I. F., Leopardo, N. P., Willis, M. A., Freysselinard, A. L., Vitullo, A. D. Quantification of healthy and atretic germ cells and follicles in the developing and postnatal ovary of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus: evidence of continuous rise of the germinal reserve. Reproduction. 147, 199-209 (2014).
  15. Llanos, A. C., Crespo, J. A. Ecología de la vizcacha (Lagostomus maximus maximus Blainv.) en el nordeste de la provincia de Entre Ríos. Rev Investig Agríc. 6, 289-378 (1952).
  16. Weir, B. J. The management and breeding of some more hystricomorph rodents. Lab Anim. 4 (1), 83-97 (1970).
  17. Branch, L. C., Villarreal, D., Fowler, G. S. Recruitment, dispersal, and group fusion in a declining population of the plains viscacha (Lagostomus maximus; Mammalia, Chinchillidae) in scrub habitat of central Argentina. J Mammal. 74 (1), 9-20 (1993).
  18. Spotorno, A. E., Patton, J. L. Superfamily Chinchilloidea Bennett 1833. Mammals of South America. , University of Chicago Press. Chicago, IL, USA. (2015).
  19. Baker, T. G. A quantitative and cytological study of germ cells in human ovaries. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 158 (972), 417-433 (1963).
  20. Forabosco, A., Sforza, C., De Pol, A., Vizzotto, L., Marzona, L., Ferrario, V. F. Morphometric study of the human neonatal ovary. Anat Rec. 231, 201-208 (1991).
  21. Hirshfield, A. N. Development of follicles in the mammalian ovary. Int Rev Cytol. 124, 43-101 (1991).
  22. Suzuki, O. Sequence comparison of gonadotropin subunits in laboratory animals for improvement of superovulation techniques. Kansai J Lab Anim. 27, 72-75 (2006).
  23. Chen, B. X., Yuen, Z. X., Pan, G. W. Semen-induced ovulation in the Bactrian camel (Camelus bactrianus). J Reprod Fertil. 73, 335-339 (1985).
  24. El Allali, K., El Bousmaki, N., Ainani, H., Simonneaux, V. Effect of the camelid's seminal plasma ovulation-inducing factor/β-NGF: a Kisspeptin target hypothesis. Front Vet Sci. 4, 99(2017).
  25. García-García, R. M., et al. β-Nerve growth factor identification in male rabbit genital tract and seminal plasma and its role in ovulation induction in rabbit does. Ital J Anim Sci. 17, 442-453 (2017).
  26. Weir, B. J. The reproductive organs of the female plains viscacha, Lagostomus maximus. J Reprod Fertil. 25, 365-373 (1971).
  27. Vitullo, A. D., Inserra, P. I. F., Leopardo, N. P., Halperin, J., Dorfman, V. B. The Plains Vizcacha. Assisted Reproduction in Wild Animals of South America. , CRC Press. Boca Raton, FL, USA. (2023).
  28. National Research Council Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th edn, National Academies Press. Washington, DC, USA. (2011).
  29. Sikies, R. S., et al. Guidelines of the American Society of Mammalogists for the use of wild mammals in research. J Mammal. 92 (1), 235-253 (2011).
  30. Percie du Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. PLoS Biol. 18 (7), e3000410(2020).
  31. Roach, N. Lagostomus maximus. The IUCN Red List of Threatened Species. , (2016).
  32. Giacchino, M. Caracterización del proceso de implantación en Lagostomus maximus: un mamífero con poliovulación y reabsorción embrionaria selectiva. [Doctoral thesis]. , Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires. Argentina. (2017).
  33. Kershaw-Young, C. M., Druart, X., Vaughan, J., Maxwell, W. M. C. β-Nerve growth factor is a major component of alpaca seminal plasma and induces ovulation in female alpacas. Reprod Fertil Dev. 24, 1093-1097 (2012).
  34. Kubiak, J. Z. Mouse oocytes gradually develop the capacity for activation during the metaphase II arrest. Dev Biol. 136, 537-545 (1989).
  35. Soede, N. M., Noordhuizen, J. P. T. M., Kemp, B. The duration of ovulation in pigs, studied by transrectal ultrasonography, is not related to early embryonic diversity. Theriogenology. 38 (4), 653-666 (1992).
  36. Nicoll, M. E., Racey, P. A. Follicular development, ovulation, fertilization and foetal development in tenrecs (Tenrec eucaudatus). J Reprod Fertil. 74, 47-55 (1985).

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