ブ ドウ球菌 属株の自動システムによるテイコプラニン耐性検出は信頼できるのか?

サマリー

ここでは、ブ ドウ球菌 分離株におけるテイコプラニン感受性をブロス微量希釈(BMD)と比較して測定する自動化システム(VITEK 2)の信頼性を評価するプロトコルを提示し、耐性の確認や適切な抗菌療法の指導に応用しています。

要約

2022年6月から2024年12月までに収集された合計467株の 黄色ブドウ球 菌(S. aureus)と66件の凝固酵素陰性 ブドウ球 菌(CoNS)分離株が本研究に含まれました。テイコプラニン感受性検査は、自動抗菌薬感受性検査システム、ブロス微量希釈(BMD)、および勾配試験法を用いて実施されました。メチシリン耐性は、S . aureus 分離株の71.7%およびすべてのCoNS分離株で検出されました。本研究では、13個の S. aureus 分離株と4個のCoNS分離株が自動感受性検査システムによりテイコプラニン耐性と特定されました。13種の S. aureus 分離株すべてが勾配試験およびBMDの両方でテイコプラニン感受性が認められました。4つのCoNS分離株すべてが勾配検査で感受性と判定され、BMDは2株を感受性、2株を抵抗性と分類しました。テイコプラニン耐性は、BMDによるCoNS分離株の4株[S. capitis (n = 1)および S. haemolyticus (n = 3)] で検出されました。BMDによって特定された4つのテイコプラニン耐性CoNS株は血液培養から分離されました。小児患者から3件、成人患者から1件が採集されました。全体として、メチシリン耐性 S. aureus (MRSA)率は比較的高く、すべてのCoNS分離株はメチシリン耐性を示しました。さらに、自動システムはテイコプラニン耐性の判定に信頼性が低く、耐性と特定された分離株はBMDで確認されるべきです。テイコプラニンはMRSAやメチシリン耐性CoNSなどの病原体治療に用いられる最後の手段抗生物質であるため、その感受性を注意深く監視する必要があります。

概要

黄色ブドウ球菌(S. aureus)は、病原性因子の幅が広く、さまざまな組織や臓器に重篤な感染を引き起こす能力があるため、臨床的に最も重要な黄色ブドウ球菌種の一つです。皮膚や軟部組織感染症、深部組織感染症、呼吸器感染症、尿路感染症、血流感染症の原因であり、^{病院環境で}最も重要な病原体の一つであり続け^{ています。}特に、メチシリン耐性S. aureus(MRSA)は世界中の医療関連感染症の主要な原因であり、術後創傷感染の主要な原因であり続け^{ています。}凝固酵素陰性ブドウ球菌(CoNS)は正常な皮膚菌叢の一部ですが、近年局所的および全身性感染症の両方に関与することが増えています。この増加により抗菌薬感受性検査の頻度が増加し、テイコプラニン⁴などのグリコペチド系抗生物質に対する耐性の検出が増加しました。

S. aureusおよびCoNS株はβ-ラクタム抗生物質に対して耐性を示すことが多いため、主にバンコマイシンとテイコプラニンなどのグリコペチド抗生物質がこれらの感染症の治療に広く使用されています5。耐性グラム陽性院内病原体の増加により、グリコペプチドの使用が拡大し、これらの病原体に対する細菌の感受性低下に寄与しています^5,6。バンコマイシンとテイコプラニンは抗菌効果が同等です。しかし、複数の研究でテイコプラニンは副作用の減少、特に腎毒性の低下と関連していることが示されています^7,8。したがって、テイコプラニンは好中球減少症、菌血症、腎機能障害を含む特定の患者集団において、バンコマイシンの適切な代替薬と考えられることが多い^9,10。

メチシリン耐性ブドウ球菌感染症でこれらの薬剤が広く使用されていることや、グリコペプチド耐性株の報告が増加していることから、グリコペプチド感受性の迅速かつ正確な決定が重要です¹¹。ブドウ球菌種におけるグリコペプチド感受性を評価するためのいくつかの実験室方法があり、寒天希釈、勾配試験、ブロス微量希釈(BMD)、自動抗菌薬感受性^{検査システムなど}があります。過去の研究では、ブドウ球菌種におけるグリコペプチド、特にテイコプラニンに対する感受性や耐性の低下を検出する際に、自動化システムと参照法の間に不一致が報告されています^4,11。

本研究は、ブ ドウ球菌 分離株におけるテイコプラニン感受性を測定するための自動抗菌薬感受性検査システムの信頼性を評価することを目的とし、参照標準であるブロス微量希釈法と比較して評価しました。自動化システムの性能特性の評価は、臨床現場でのグリコペプチド感受性の定期検出に適しているかを臨床検査室が評価するのに役立つ可能性があります。

プロトコル

この研究は2025年1月27日に地元の倫理委員会によって承認されました(プロトコル番号:HRU/25.02.03)。この調査はヘルシンキ宣言の原則に従って実施されました。

1. 研究デザイン

本回顧的研究では、ブ ドウ球菌 種におけるテイコプラニン感受性を測定するための自動抗菌薬感受性検査システムの性能を評価し、ブロス微量希釈(BMD)参照法および勾配試験法と結果を比較しました。

2. 孤立選択

1. 臨床分離株のコレクション
   1. 2022年6月から2024年12月までに様々な臨床検体から採取した合計467株の S. aureus および66株のコグリュラーゼ陰性 ブドウ球 衣(CoNS)分離株を含みます。
   2. すべての臨床検体は診断検査室で通常の微生物学的手順に従って処理します。
   3. 分析には患者1人あたり1株のみを含めてください。同一患者から異なる標本から得られた繰り返し分離株は除外します。
2. 初期の識別とスクリーニング
   1. マトリックス支援レーザー脱着イオン化飛行時間質量分析(MALDI-TOF MS)を用いて種レベルですべての分離株を同定します。
   2. Vitek 2 AST-P664カードを用いて、自動感受性検査システムを用いて、 黄色酵母菌およびCoNS をメチシリン耐性およびテイコプラニン感受性の分離検査を行う。
   3. 自動感受性検査システムによって生成された最小阻害濃度(MIC)値を記録し、後続比較のために記録します。
3. アイソレート貯蔵とサブカルチャー
   1. 分離株は−80°Cのトリプティック大豆ブロスに20%グリセロールを添加し、自動感受性検査システムに従って保存します。
   2. 基準試験の前に、室温で解凍して分離し、5%羊血寒天で2回亜培養します。
   3. 各経過後、純度と生存可能性を確保するために37°Cで24時間培養します。

3. 抗菌感受性検査

1. ブロス微量希釈(BMD)
   1. テイコプラニン溶液の調製
      1. 陽イオン調整済みミューラー・ヒントンブロス(CAMHB)に2560 mg/L濃度のテイコプラニン粉末のストック溶液を準備します。
   2. ブロス微量希釈法
      1. 無菌の96ウェルU底マイクロプレートを用いたブロス微量希釈試験を行います。
      2. 各井戸に100μLのCAMHBを注入します。テイコプラニンのストック溶液を10倍に薄め、最初の井戸に100μLを加えます。
      3. ウェル1–10で2回連続希釈を準備し、最終抗生物質濃度を64〜0.125 μg/mLの範囲で得ます。
      4. CAMHBと細菌接種を含む成長制御としてウェル11を使用します。陰性コントロールとしてウェル12をCAMHB¹²のみ含みます。
   3. 接種物の調製と培養
      1. 純粋な細菌コロニーを無菌生理食塩水に懸浮させ、0.5マクファーランド標準に相当する濁度に調整します。
      2. CAMHBで1:100希釈液を準備し、1–11のウェルに100μLの細菌懸濁液を加えて、最終接種濃度を約5 ×⁵ CFU/mLにします。
      3. マイクロプレートを37°Cで24時間、大^気環境下で培養します。
   4. MICの判定と解釈
      1. 最小阻害濃度(MIC)を、培養後に目に見える細菌増殖を完全に抑制するテイコプラニンの最低濃度と定義します。
      2. 欧州抗菌感受性試験委員会(EUCAST)バージョン14.0のガイドラインに従ってMIC値を解釈してください。¹³。

4. 品質管理

1. 品質管理株として、テイコプラニンMIC基準範囲0.25–1 mg/Lの黄色 ブドウ球 菌ATCC 29213を使用します。

5. 統計分析

1. 方法比較
   1. 自動感受性検査システムで得られたテイコプラニンMIC結果と、BMD参照法で得られた結果を比較します。
   2. カテゴリカルアザイスト(CA)を、両方法間で一致する感受性または抵抗性の結果として定義します。
2. 誤差の分類
   1. 非常に重大な誤差(VME)を、自動感受性検査システムでは感受性と分類され、BMDによって耐性を持つ分離株と定義します。
   2. 主要誤差(ME)を、自動感受性検査システムでは耐性と分類されるが、BMDでは感受性がある分離株と定義します。
3. パフォーマンス基準
   1. 分類的一致が≥90%で、VMEおよびMEの率が公表された評価基準^14,15に準拠して≤3%である場合、方法の性能を許容範囲とみなします。

結果

2年半の期間に臨床サンプルから回収された合計533株の分離株が分析に含まれました。すべてのメチシリン耐性CoNS(MR-CoNS)分離株および71.7%のS . aureus 分離株がメチシリン耐性であることが確認されました。創傷綿棒サンプルがS . aureus 分離株を得た最も一般的な臨床標本であり、MR-CoNS分離株は血液培養から最も頻繁に回収されました(図1)。

図1: ブドウ球 菌種を分離した臨床サンプル数。 メチシリン耐性黄色 ブドウ球...

ディスカッション

抗菌薬耐性は、世界の公衆衛生にとって最も重要な脅威の一つであり、医療費の増加、治療失敗、死亡率の一因となっています^。黄色ブドウ球菌による地域感染および病院感染の発生率は、国内外で増加し続けています。特にメチシリン耐性は罹患率や死亡率の増加と関連しています。したがって、抵抗プロファイルは世界中で定期的に監視^{されています。}

2023年のオーストラリア血流感染監視報告によると、MRSAの発生率は16.1%でした¹⁷。トルコで行われた研究ではMRSAの発生率が9.6%から62.3%の範囲と報告されています(2,15,16,18,19)に対し、2021年の欧州抗菌薬耐性監視データではトルコの発生率は30.7%

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
陽イオン調整済みミューラー・ヒントン・ブロス	シグマ・アルドリッヒ、ダルムシュタット、ドイツ	CM0405B	ブロス微量希釈法における細菌増殖のために
マルディ・トフ・ミシズ	VITEK修士、バイオM&ケア、リュー、フランス	410893	細菌の同定のために
マクファーランド標準	bioMéリュー、フランス	95060-958	細菌接種物の標準化
ペトリ皿	RTA、TÜRKIYE	2102	培地調製および細菌培養のために
ピペットのヒント20 - 200 & mu;L	シグマ・アルドリッヒ、ダルムシュタット、ドイツ	Z740105	陽イオン調整済みMueller&ndashの分布について、ヒントンブロス(CAMHB)をU型底マイクロプレートに並べ、シリアル希釈の調製
羊の血寒天	RTA、TÜRKIYE	2001	微生物の分離と培養
黄色ブドウ球菌	アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション	29213	本研究で使用された基準株
テイコプラニン粉末	シグマ・アルドリッヒ、ダルムシュタット、ドイツ	T0578	抗生物質
トリプティック大豆スープ	メルク、ドイツ	1,054,590,500	微生物の分離と培養
U型ボトムウェルプレート	サーモフィッシャー・サイエンティフィック	163320	ブロス微量希釈法による抗菌感受性試験
VITEK 2 AST-P664カード	bioMéリュー、フランス	414197	抗菌感受性検査のために
VITEK2コンパクト	bioMéリュー、フランス	4700030	抗菌感受性検査のために