このプロトコルにより、次世代シーケンシングと多色免疫蛍光法の統合が可能となり、肺腺癌のプロファイルが可能となります。ゲノムの多様性と腫瘍浸潤免疫細胞密度の関係を解析することを目的としています。この多次元的なアプローチにより、術後の予後評価のための腫瘍微小環境の包括的な評価が可能となります。
研究記事
* These authors contributed equally
このプロトコルにより、次世代シーケンシングと多色免疫蛍光法の統合が可能となり、肺腺癌のプロファイルが可能となります。ゲノムの多様性と腫瘍浸潤免疫細胞密度の関係を解析することを目的としています。この多次元的なアプローチにより、術後の予後評価のための腫瘍微小環境の包括的な評価が可能となります。
肺腺癌(LUAD)の予後は、伝統的に腫瘍・結節転移(TNM)病期測定で評価され、患者の免疫状態は考慮されません。このプロトコルはゲノムプロファイリングと免疫マイクロ環境解析を統合し、術後予後評価をより包括的に行います。この方法は、パラフィン埋め込み腫瘍組織の後ろ向き解析を2つの主要な手法で用います。まず、次世代シーケンシング(NGS)は、37遺伝子パネルを用いて駆動遺伝子や重要性の不確かな変異を特定するために実施されます。次に、多重免疫蛍光(mIF)を用いてHLA-DR、CD68、CD163、CD206、PD-L1、PanCKなどのマーカーを標的化します。これにより、さまざまな腫瘍領域における特定の免疫細胞サブポピュレーションの空間的分布と密度を定量化することが可能になります。この統合的アプローチにより、ゲノムの異質性と腫瘍浸潤免疫細胞の特徴を同時に評価することが可能になります。その結果、 EGFR の状態など特定の突然変異プロファイルや免疫細胞密度の組み合わせが特定されます。これらの統合された組み合わせにより、患者生存への総合的影響を研究でき、将来の肺がん予後モデルの開発に有望なアプローチを提供します。このプロトコルはLUAD腫瘍微小環境の複雑な生物学的特徴を特徴付ける堅牢な手法を示しています。
LUADは肺がんの最も一般的な亜型ですが、平均5年生存率は約15%と低く残っています。現在の予後評価は主にTNMのステージングシステムに依存しています。しかし、この方法は患者の全体的な免疫状態を見落とすことが多いため、予測精度が制限されることがあります。証拠は、ゲノムの異質性と腫瘍微小環境(TME)の両方がLUAD腫瘍形成および疾患進行において重要な役割を果たすことを示唆しています2,3。
近年、従来のサンガーシーケンシングからターゲットNGSへの移行により、EGFR、TP53、KRAS 4,5などの複数のドライバー遺伝子の高感度かつ同時解析が可能になりました。NGSは高解像度の遺伝子変異マップを提供しますが、ゲノムデータだけではTME内の複雑な細胞相互作用や空間的組織を捉えきれません。
これらの複雑さに対処するため、mIFは従来の免疫プロファイリング手法に比べて大きな利点を提供します。単一プレックス免疫組織化学(IHC)は各セクションに1つのマーカーに制限されますが、mIFは組織の空間構造を保持しつつ複数のタンパク質マーカーを同時に検出することを可能にします。組織分解を引き起こす可能性のある逐次IHCや、空間的局在や単一細胞分解能の喪失をもたらすフローサイトメトリーやバルクRNAシーケンシング(6,7,8)とは異なり、mIFと空間領域注釈を組み合わせることで、免疫の地形の現地多パラメータ特性解析を可能にします。
このプロトコルは、ターゲットを絞ったNGS、mIF、空間領域評価(組織全体、腫瘍境界、腫瘍コアを含む)を統合した複合ワークフローを確立します。このような多次元的アプローチは、ゲノム変異と免疫細胞密度の相互作用を調査するために必要であり、これは単一モダリティ手法ではしばしば捉えられない関係です。これらの統合的特徴を評価することで、本プロトコルはLUADの生物学的特徴を特徴付ける補完的な戦略を提供し、術後の予後層化のためのより堅牢な枠組みを提供します。
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この回顧的研究は昆明延安病院の医療倫理委員会により承認されました(承認番号2021-140-01)。すべての参加者からインフォームド・コンセントが取得されました。
研究デザインとサンプル収集
2015年から2021年の間に外科的切除を受けた病理学的または組織学的に確認されたLUADを持つ63名の患者を登録しました。除外基準には、手術前にネオアジュバント化学療法、放射線療法、免疫療法の受診が含まれていました。さらに、同時悪性腫瘍、重度の併存疾患、組織の質の低下、または不完全な臨床記録を持つ患者は分析から除外されました。ホルマリン固定パラフィン埋め込み(FFPE)腫瘍ブロックを1mmの断片に処理し、脱脂処理を行いました。ワークフロー(図1)に示すように、これらのサンプルはmIFとターゲットNGSを用いた統合解析を受けました。この複合アプローチにより、ゲノム変異と免疫微小環境特性を同時に評価でき、腫瘍生物学の特徴付けのための多次元的な枠組みを提供します。
続編
患者の標的薬剤、免疫療法、疾患の進行または死亡状況は電話フォローアップで追跡され、生存状況、疾患進行または再発、手術後に受けた補助治療、新たに診断された併存疾患に関する詳細な情報が得られました。追跡期間は2023年7月に終了し、最終観察評価項目は疾患進行または死亡でした。総生存期間は手術開始から患者の死亡までの期間と定義されました。追跡調査で失われた患者はいませんでした。最短追跡期間は21か月でした。
NGSライブラリの調製と配列決定
FFPE組織切片からのDNA抽出
病態標本から3〜10μm厚のFFPE組織切片を取得します。断片を無菌のマイクロ遠心分離機チューブに入れます。各チューブにキシレンを加え、室温で5〜10分間培養してパラフィンを除去します。12,000 x g で遠心分離機で5分間処理し、上清液を慎重に捨てます。キシレン処理を1回繰り返して完全な脱落を確実にしてください。残留キシレンを除去するために、100%エタノールで2回連続洗浄してください。残留エタノールが完全に蒸発するまで、ペレットを室温で自然乾燥させます。適切な溶解バッファーとプロテイナーゼK(DNA抽出キットに付属)を加え、56°Cで1〜3時間(必要に応じて一晩)培養し、組織が完全に溶解するまで続けます。ホルマリン架橋を逆転させるために、90°Cで1時間の追加インキュベーションを行います。メーカーの指示に従い、市販のFFPE DNA抽出キット(材料 表参照)を使用してゲノムDNAを抽出します。FFPEサンプルのDNA品質はしばしば断片化されています。したがって、DNA品質は最小限の完全性閾値(例:DIN ≥ 5)を満たす必要があり、標的を絞ったNGSのライブラリー調製を成功させる必要があります。
DNA定量と正規化
正確な濃度測定を確保するために、蛍光測定法を用いてDNAを定量します。Tris-HClバッファー(pH 8.5)を用いてDNAサンプルを最終濃度約5〜10 ng/μLまで正規化します。必要に応じて、DNA濃度の正確性と安定性を確保するために徐々に希釈段階を行ってください。
ライブラリの調製と標的濃縮
FFPE組織10から抽出したDNAに対してハイブリッドキャプチャベースの標的NGSを用いたシーケンシングライブラリを準備します。腫瘍発生に関連する選択遺伝子のエクソニック領域をカバーするカスタマイズプローブパネルを用いて標的濃縮を行います。必要に応じて標準的な方法(例:電気泳動ベースのシステム)を用いてライブラリの品質と断片サイズ分布を評価します。
ライブラリのプーリングとシーケンス
各ライブラリーをフルオメトリックアッセイで定量します。シーケンシングキットの要件に従い、等モル濃度のプールライブラリー。プールされたライブラリをIlluminaシーケンシングプラットフォームにロードし、150 bpのペアエンドシーケンシングパターンでシーケンスを行います。
データ処理とバリアント検出
生のシーケンシングリードは標準的なバイオインフォマティクスパイプラインを用いて処理され、アダプタートリミング、品質フィルタリング、ヒト参照ゲノム(GRCh37/hg19)へのアラインメントが含まれていました。品質管理指標は以下の通りです:Q20>85%、平均シーケンス深度>2500倍、オンターゲット率>65%、Fold 80ベースペナルティ≤2。品質管理と整合性:FASTQの生データはFastQCおよびTrim Galore(またはTrimmomatic)を用いて品質管理を受け、アダプターの汚染や低品質シーケンスを除去しました。クリーン化されたリードはBurrows-Wheeler Aligner(BWA)を用いてGRCh37(hg19)ヒト参照ゲノムにアラインメントされました。アライメント後処理:偽陽性コールを最小限に抑えるために、Picardおよびゲノム解析ツールキット(GATK)を用いてソート、重複マーキング、ベース品質スコア再キャリブレーション(BQSR)を実施しました。変異呼びかけ:生殖細胞系単一塩基多型(SNP)およびInDelsはBWA MEM(0.7.16a - r1181)を用いて検出されました。体細胞SNVおよびInDelは、Mutect2およびVarScan2を用いたコンセンサスアプローチにより同定されました。低頻度変異はFreebayes(v 1.3.2)統計モデルを用いてさらに評価されました。注釈とフィルタリング:変異はANNOVARを用いて注釈を付け、gnomAD、ClinVar、COSMICのデータを統合しました。生殖細胞系変異は、高周波集団SNPを除去し、変異対立遺伝子頻度(VAF)を評価することで体細胞変異と区別されました。VAF閾値:クローンイベント(例:ROS1およびALK)には≥5%のVAFカットオフが適用され、遺伝子変異(例: EGFR)には1%の閾値が適用され、低周波変異の検出が可能となりました。これは>500xという高い平均シーケンス深度によって可能でした。生殖細胞系変異は、1000ゲノムプロジェクト(1000G)のデータと、当研究室で構築された健康な漢民族のローカルベースラインデータベースを用いて、体細胞変異と区別されました。検出された体細胞変異の病原性評価は、体細胞変異のエビデンス評価を階層的かつエビデンスに基づくアプローチで精緻化するAMP/ASCO/CAPフレームワーク11に従って実施されました。病原性/病原性(P/LP)変異は保持され、その分類はA/B(FDA承認、臨床試験)またはC/D(前臨床/症例研究)の証拠を必要とするTier I/II基準に基づいて分類されます。Tier III(VUS)は決定的な証拠に欠け、Tier IVは集団頻度(例:gnomAD)や機能的研究を通じて良性変異を示します。これらの変異は後の解析から除外されます。検出された生殖細胞変異の病原性評価はACMG/AMPガイドライン12に従って実施されました。本研究では、病原性(P)、病原性(LP)、および不確かな有意性(VUS)の変異が記録されました。下流解析には品質管理基準を満たす高信頼変異のみが含まれていました(QUAL ≥1;生殖細胞変異はカバレッジ深さ>10、体細胞変異はカバレッジ深さ>500倍)
FFPE組織からのサンプル調製
パラフィン切片の準備
FFPE組織ブロックをミクロトームで厚さ3μmの断片に切り分けます。40〜45°Cの水浴に断片を浮かせて組織を平らにします。セクションを粘着式顕微鏡スライドに取り付け、室温で乾燥させます。スライドを65°Cの乾燥オーブンに1時間入れ、組織切片がスライドにしっかりと接着し、余分なパラフィンを溶かします。
脱パラフィン化と再水和
スライドをステインラックに置き、クリアリング溶液Iに5分間浸します。スライドを順に移し、溶液IIと溶液IIIをそれぞれ5分ずつ移し、パラフィンを完全に溶解させます。スライドを100%エタノールに3分間移し、残留クリアリング試薬を除去します。組織切片は段階化されたエタノール系列で再水和します:95%エタノールを3分間、80%エタノールを3分間投与します。すすぎは蒸留水で2回スライドさせ、洗う間隔は3分空けます。脱硫黄化時に使用されたキシレンとエタノールは、揮発性と毒性のため化学煙幕で取り扱われました。有機溶剤を含むすべての廃棄物溶液は、機関の有害廃棄物処理ガイドラインに従って別々に収集・処分されました。
HE染色仕切り
ヘマトキシリンと嗜酸染色
脱硫黄処理と再水和後、スライドをヘマトキシリン溶液に室温で5〜10分間浸します。流れる水道水の下で5分間すすいでください。1%塩酸アルコールに数秒(3〜10秒)スライドを浸して分離します。すぐに流れる水道水で洗い流してください。スライドを水道水やブルー化溶液に5分間浸して青色核を作れます。スライドをエオシン溶液に室温で1〜3分間浸します。必要なら蒸留水で軽くすすぎてください。
脱水とクリアリング
脱水物はグレーディングされたエタノールを滑り抜けます:80%エタノールを1分間、95%エタノールを1分間、100%エタノールを2回1分間使います。キシレンI–IIに透明スライドを2〜5分ずつ。
取り付け
ニュートラルバルサムを一滴垂らします。カバースリップは気泡が出ないように慎重に置いてください。画像撮影前に室温でスライドを乾燥させてください。
FFPE組織切片の多重免疫蛍光染色
同じ組織切片上の複数の免疫および腫瘍マーカーを検出するために、逐次多重免疫蛍光染色が行われました。このアプローチにより、空間的文脈を保持しつつ、多様な細胞集団を 現地 で可視化することが可能です。抗原回収:染色ジャーに抗原回収バッファーを充填します。瓶を電子レンジに入れ、3〜5分間高温で加熱し、溶液が沸騰し始めるまで加熱します。脱硫および再水和後、スライドを加熱された回収バッファーに慎重に移し、組織切片が完全に浸かるようにしてください。低電子波出力で15分間ヒートスライドし、効率的な抗原アンマスキングを可能にします。加熱後、スライドを室温で自然に30分間冷ます。抗原回収を止めるために、スライドを氷水に5分間移してください。
洗浄と疎水性バリアの調製
残留抽出バッファーを取り除くために蒸留水でスライドを1回すすぎます。疎水性バリアペンを使って、各組織の周りに円を描いてください。蒸留水でもう一度軽くすすぎます。TBSTバッファーでスライドを2回洗います。洗った後はスライドを水平に3分間置き、バッファーをしっかり除去します。
ブロッキング
ブロッキングバッファーを組織切片全体(1枚あたり~100μL)まで塗布します。加湿チャンバーで室温で15分間スライドします。
一次抗体培養
吸収性の紙でスライドエッジを軽く叩いてブロッキングバッファーを外します。HLA-DR、CD68、CD163、CD206、PD-L1、PanCKに対する一次抗体を、1:100から1:400の最適化された希釈で適用しました。各組織切片に希釈した一次抗体溶液~100μLを塗布します。加湿チャンバーでスライドをキュベートします:37°Cで1時間、または4°Cで感度を上げます。
洗浄
洗濯スライドはTBSTバッファーで3回、1回3分洗います。洗った後はスライドを水平に置いてバッファーの排水を促します。
二次抗体培養
二次抗体溶液をTBSTバッファーで1:3で希釈して準備します。各スライドに約100μLの二次抗体溶液を塗布します。37°Cで加湿チャンバーで10分間スライドします。TBSTでスライドを3回、1回3分ずつ洗います。
蛍光信号増幅
蛍光増幅試薬を増幅バッファーで1:100で希釈します。各スライドに希釈試薬100μLを塗布します。スライドを室温で暗闇で10分間培養し、光漂白を防ぎます。TBSTでスライドを3回、1回3分ずつ洗います。
マーカー間の抗原回収
説明通りマイクロ波抗原回収を行います。加熱後、冷たいものは順番に滑ります:温かい水で5分、氷水で5分。
追加マーカーの連続染色
追加の抗体マーカーごとに一次抗体および二次抗体の培養工程を繰り返します。次の抗体に進む前に、各マーカーを染色した後に抗原回収を行うことを必ず確認してください。
核のカウンターステイン
TBSTバッファーでスライドを1回洗います。DAPI核ステインを塗布します。室温で暗闇で5分間孵化させます。スライドは蒸留水で3回洗います。エンドポイント決定:蛍光顕微鏡下で核が明確に染色されているように見えるべきです。
最終マーカーのみの染色
増幅バッファーで1:200希釈したビオチン溶液を塗布し、室温で10分間培養します。スライドをTBSTバッファーで3回洗います。説明通りに抗原回収を行います。スライドをTBSTバッファーで3回洗います。内因性ビオチン遮断試薬を塗布し、37°Cで30分間培養します。ステイン染料をTBSTに1:100浸入し、室温の暗い場所で30分間孵育します。スライドをTBSTで1回洗い、3分間排水させます。
取り付け
組織の部分にアンチフェードマウンティングメディウムを一滴加えます。スライドの上にカバースリップを慎重にかけてください。画像診断前にスライドは乾かしてください。
H&EおよびmIF断面の画像取得
H&E染色およびmIF FFPE組織断片の全スライド画像(WSI)をスライドスキャナーで取得しました。H&E切片にはブライトフィールド走査が行われ、mIF切片には蛍光走査が用いられました。目的:全体をスキャンするための20倍倍の倍率;高解像度地域イメージングのための40倍。励起および発光設定:各蛍光分子に対してメーカーの仕様に従って最適化されています。露光時間と利得:画像診断ソフトウェアによって自動的に調整され、飽和せずに十分な信号強度を確保します。
mIF品質管理と画像評価可能性
mIF結果の信頼性を確保するため、HALOデジタル病理システムを用いて組織分類および細胞定量を行う前に厳格なQCプロトコルが実施されました。アーティファクト除去および評価面積の定義:全スライド画像(WSI)を綿密にレビューし、組織のひだ、染色アーティファクト、非特異的な背景信号を含む領域を手動で除外しました。このステップは誤検知信号を防ぎ、空間解析の正確性を確保するために不可欠でした。このスクリーニングの結果、全サンプルの組織面積の平均80%(範囲:50%〜95%)が評価可能なmIF領域と指定されました。病理学的検証と分割:腫瘍および間質区画を正確に区分するため、mIF切片をH&Eで染色した隣接する連続切片と照合しました。注釈は2名の経験豊富な病理医によって独立してレビューされ、不一致は合意により解決されました。腫瘍組織面積が30%未満のサンプルは分析厳格性を維持するために除外されました。定量化後の検証:自動的な細胞表現型解析と定量化の後、免疫細胞サブポピュレーションの空間的分布および発現パターンが病理医によって再評価されました。このレビューにより、デジタル定量データが基礎となる組織形態学的特徴と整合していることが保証され、結果の信頼性と正確性が保証されました。
デジタル病理解析と領域注釈
パノラマスキャン画像はデジタル病理画像解析プラットフォームにインポートされ、処理されました。HALO AI Nuclei Seg-Pluginを用いてセルの区分と識別を行いました。H&E染色を基準に、以下の関心領域(ROI)を手動で注釈付けしました:全腫瘍領域(WSIT);腫瘍境界(TB);腫瘍コア(TC)。陽性シグナル検出は、蛍光強度閾値と各マーカーの期待される細胞内局在に基づいて決定されました。この区画特異的アプローチは、背景干渉を最小限に抑え、免疫細胞同定の精度を向上させるために適用されました。免疫細胞密度は、選択した腫瘍領域ごとのマーカー陽性細胞数として定量化されました。組織形態に基づく対応するH&E由来の注釈とmIF画像を整列させます。患者は各マーカーの免疫細胞密度の中央値に基づいて高密度グループと低密度グループに階層分けされました。
統計解析
解析にはSPSS 17.0ソフトウェアが使用されました。正規分布データは平均±標準偏差で、正規分布でない定量データは中央値(25%-75%分位数範囲)で表されました。各遺伝子変異タイプ、免疫細胞密度、臨床特性の相関関係は、パイソンライフラインモデルを用いてCox比例ハザード回帰モデルで解析されました。サンプルサイズとデータが正規分布に適合しているかどうかに基づき、連続変数間の比較には学生検定またはマン・ホイットニーU検定が用いられました。ウィルコクソン署名付きランク検定を用いてランク変数の比較を行いました。標本サイズと理論頻度に応じて順序付けられていないカテゴリ変数の解析には、カイ二乗検定またはフィッシャーの正確検定が選ばれました。相関解析にはスピアマン検定またはピアソン検定が用いられました。患者の全生存率はKaplan-Meier法で得られ、検定にはLogランク検定が用いられました。生存曲線はRStudioソフトウェアを基にしたR言語を用いて描かれました。P値<0.10は統計的に有意とされました。
実用的な適用性と制限
この統合ワークフローを確実に実装するためには、FFPE組織ブロックは理想的な腫瘍細胞濃度≥30%と広範な壊死や重大な組織アーティファクトの不在など、厳格な品質基準を満たす必要があります。mIFの技術的成功は組織保存に大きく依存しています。過剰定着、過度の損傷、高い背景自己蛍光などの要因は抗体浸透の不十分さや信号強度の低下を引き起こすことがあります。さらに、本研究のいくつかの固有の制約を考慮する必要があります。まず、分析は63人の患者からなる後ろ向きの単一センターコホートに基づいており、統計的信頼性や他の集団への広範な一般化に制限がある可能性があります。第二に、評価の範囲は固定された37遺伝子のNGSパネルと特定の免疫マーカーセット(HLA-DR、CD68、CD163、CD206、PD-L1、PanCK)に限定されています。 補足表1)。資料にもあるように、この複合アプローチは予後層化のより堅牢な枠組みを提供しますが、これらの関連性をさらに検証し、特定されたバイオマーカーの予測的有用性を洗練させるためには、より大規模で多施設にわたる研究が必要です。
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肺腺癌患者の臨床的特徴
2015年から2021年にかけて当院でLUADと診断され、手術的トレードメント を受け、納入基準を満たした合計63名の患者が本研究に収集されました。含まれた患者の臨床的特徴は 表1に示されています。登録患者の中央値年齢は60歳(47-73歳)で、男性30/63(46.2%)、女性33/63(53.8%)が含まれていました。喫煙既往歴のある患者は63人中23人(35.4%)でした。登録された全患者の病理的タイプはLUADでした。アメリカがん合同委員会の第8版TNM病期評価基準によれば、ステージIBが27件(63人中41.5%)、ステージIIAが3件/63件(4.6%)、ステージIIBが10件/63件(15.4%)、ステージIIIAが15件/63件(23.1%)、ステージIIIBが2件/63件(3.1%)、ステージIVが8件/63件(12.3%)でした。転移部位には、骨転移9件/63例、両側肺転移8件、脳転移6件...
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LUADの統合ゲノムおよび空間分離免疫学的プロファイリング
本研究は、ターゲットを絞ったNGSとmIFを組み合わせた統合ワークフローを示し、LUADの多次元的な景観を特徴づけています。私たちのゲノム学的発見は、特に変異頻度の民族的差異に関して、過去の文献と一致しています。観察されたEGFR変異率(約40%〜60%)は、アジア集団における報告頻度と一致しており、西洋集団(15〜20%)よりも有意に高い15,16,17,18,19,20。さらに、PMS2およびEPCAMにおける生殖細胞変異の...
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著者らは、潜在的な利益相反と解釈される可能性のある商業的または財務的関係は一切ないと宣言しています。
この研究は浙江省医療衛生科学技術計画プロジェクト(2022KY1237)の支援を受けました。雲南省教育局科学研究基金プロジェクト(2025Y0387);雲南省重点研究開発プログラム(202403AC100002)。
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| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| AlphaTSAマルチプレックスIHCキット | アルファクバイオ・テクノロジー株式会社 | AXT36025011 | 多重免疫蛍光染色 |
| アンチフェードマウントメディア | リージェン・テクノロジー株式会社 | IH0252、ロット0525A17 | 多重免疫蛍光染色 |
| CD163 | 北京中山金橋バイオテクノロジー有限公司 | ZM0428 | RRID:AB_3714707;多重免疫蛍光染色 |
| CD206 | アブカム社 | 猫番号#5307-1 | RRID:AB_10896526;多重免疫蛍光染色 |
| CD68 | 北京中山金橋バイオテクノロジー有限公司 | ZM0060 | RRID:AB_2904190;多重免疫蛍光染色 |
| カスタマイズされたがん遺伝子パネル | TWIST株式会社 | NGS図書館準備 | |
| 脱炭化バフ | QIAGEN株式会社 | 19093 | DNA抽出HE染色;FFPE組織切片からの多重免疫蛍光染色 |
| ダイナビード M-270 ストレプタビジン | サーモ社 | 65602 | NGS図書館準備 |
| 蛍光計 | サーモフィッシャー・サイエンティフィック株式会社 | QUBIT 4.0 | NGS図書館準備 |
| HALOデジタル病理画像解析プラットフォーム | インディカ・ラボス社、アルバカーキ | バージョン 3.6.4134 | HE染色および多重免疫蛍光染色解析 |
| ヘマトキシリン・エオシン染色キット | 武漢elabscience Technology Co., Ltd. | E-IR-R117 | HE染色 |
| HiPure FFPE DNAキット | 広州マゲンバイオテクノロジー有限公司 | D6323 | FFPE組織切片からのDNA抽出 |
| HLA-DR | 華碧株式会社 | ET1610-66 | RRID:AB_3069950;多重免疫蛍光染色 |
| イルミナDNAシーケンサー | イルミナ、そしてnbsp;インク | 550DX | シーケンス |
| 中性バルサム | 北京ソーラービオ科学・科学テクノロジー株式会社 | G8590 | HE染色 |
| Panckとnbsp; | 北京中山金橋バイオテクノロジー有限公司 | ZM0069 | RRID:AB_2941997;多重免疫蛍光染色 |
| PD-L1 | 研究開発システム | カタログ # AF1019 | RRID:AB_354540;多重免疫蛍光染色 |
| TBSTバッファ | abclonlaテクノロジー株式会社 | RM00013 | HE染色および多重免疫蛍光染色 |
| UN-ブロッカー | ホムゲン株式会社 | NGS図書館準備 | |
| VAHTS DNA クリーンビーズ | ヴァジム株式会社 | N411 | NGS図書館準備 |
| VAHTSユニエルサルDNAライブラリーイルミネーション用準備キット | ヴァジム株式会社 | ND610 | NGS図書館準備 |
| 全スライドイメージングシステム | ツァイス株式会社 | ZEISS AXIOSCAN 7 バージョン3.3 | HE染色および多重免疫蛍光染色解析 |
| xGen ハイブリッド化および洗浄キット | IDT株式会社 | 1080577 | NGS図書館準備 |
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