テルフェジア・クラベリの体外バイオ活性プロファイルに対する異なる抽出方法の影響

Summary

テルフェジア・クラヴェリイ抽出物のin vitro生物活性は、生物物理的抽出法と溶媒極性に依存していました。マセレーション補助抽出(MAE)による水抽出物が最も強い抗酸化活性を示したのに対し、ソクスレット抽出(SE)抽出物はSH-SY5Y細胞で細胞毒性を高く誘導しました。これらの結果は、テルフェジア・クラヴェリー抽出物のin vitro生体活性に明確な方法依存の違いを示しています。

Abstract

テルフェジア・クラヴェリーは、乾燥地帯で伝統的に消費されてきた食用の砂漠トリュフです。近年、抗酸化、抗菌、治療効果の可能性から科学的関心が高まっており、食品や健康関連分野での応用の可能性が示唆されています。しかし、その生物学的潜在力の証拠が増えているにもかかわらず、異なる抽出戦略が生体活性化合物の回収やテルフェジア・クラヴェリの体外での生体活性プロファイルに与える影響は、文献上でまだ明らかにされていません。本研究では、異なる抽出法と極性の異なる溶媒を用いて得られたテルフェジア・クラヴェリイ抽出物のin vitro生体活性を評価しました。抽出収率が決定され、得られた抽出物は既存の試験システムを用いて抗酸化、抗菌、抗生体膜、細胞毒性活性の有無を評価されました。抗酸化能力は2,2-ジフェニル-1-ピクリルヒドラジル(DPPH)、2,2′-アジノビス(3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホン酸)(ABTS)、および鉄還元抗酸化力(FRAP)試験を用いて測定され、同時にSH-SY5Y神経芽細胞腫細胞における細胞毒性効果も調査されました。抽出収率は方法および溶媒の極性によって異なり、超音波補助抽出法(UAE)で調製された水抽出物から得られた収率は18.40%でした。抗酸化活性は抽出方法によって有意な違いを示し、マセレーション補助抽出法(MAE)で得られた水抽出物はフェノール化合物が豊富なプロファイルと最も強力なラジカルスカベンジング能力を示しました。この抽出物のLC-MS/MS分析により、9種類のフェノール化合物が検出されました。クイン酸とクロロゲン酸が優勢成分として特定されました。対照的に、ソックスレット由来の抽出物はSH-SY5Y細胞においてより強い細胞毒性効果を誘導しました。抗菌および抗バイオフィルムの反応は抽出方法間で比較的限定的な変動を示し、これらの活動における抽出戦略への依存度が弱いことを示しています。総じて、これらの発見は、生体物理的抽出法と溶媒選択がテルフェジア・クラヴェリー抽出物のin vitro生体活性プロファイルの重要な決定要因であり、抗酸化作用および細胞毒性活性において顕著な効果が観察されることを示しています。

Introduction

健康改善や病気の予防・治療のために様々なキノコ種を用いることは古代にまで遡ります ^1,2,3。巨菌類は一般的にエピジオス(キノコ)と下ジオス(トリュ^フ)の2つのグループに分類されます4。デザートトリュフとして知られるテルフェジア・クラヴェリー(T. claveryi)は、世界的に有名で食用可能なトリュフの種で、テルフェジア属5に属^します。T. claveryiは、ヘリアンセム属が多い乾燥および半乾燥地域に一般的に分布しています(^{6,7,8,9,10,11})。近年、がんや神経変性疾患などの慢性疾患の世界的な負担は著しく増加しており、新しく安全かつ効果的な治療薬の緊急性が浮き彫りになっています。グローバルヘルスの報告によると、がんは依然として世界の主要な死因の一つであり、神経変性疾患は高齢化とともに増加し続けています。この深刻化する公衆衛生問題を踏まえ、菌類や薬用植物から得られる天然産物を生物活性化合物の潜在的な供給源として調査することが重要な研究優先事項^{となっています。}

同時に、抗菌薬耐性の急速な出現は、世界の健康に対するもう一つの大きな脅威となっています。薬剤耐性により従来の抗生物質の効果が大幅に低下し、代替抗菌戦略の緊急性が生じ^{ています。}特にフェノール系およびポリフェノール系化合物など、自然由来の二次代謝物は、多様な抗菌作用機構と耐性発生傾向の低さから注目を集めています¹⁴。酸化ストレスは、がん、神経変性疾患、代謝症候群など多くの慢性疾患の根本的なメカニズム要因です。活性酸素種(ROS)の過剰生成は、DNA損傷、脂質過酸化、タンパク質酸化を引き起こし、細胞恒常性を破壊する可能性があります。この文脈では、フリーラジカルを除去し酸化還元バランスを調節できる天然抗酸化物質は、酸化損傷や疾患進行の緩和に有望な薬剤と考えられています¹⁵。

トリュフは不飽和脂肪酸、タンパク質、ミネラル、ビタミン、アミノ酸、フェノール、ポリフェノールを豊富に含み、抗菌、抗酸化、抗^{がん特性と}関連しています。抗酸化能力はフリーラジカルの除去効果と関連しています 25,26,27。トリュフ種の中で、T. claveryiは食用構造、地域経済的価値、フェノール化合物の豊富さが特に注目されます²³。伝統的な消費や生物的活性に関する新たな証拠が出ているものの、抽出戦略がその化学組成や生物学的影響にどのように影響するかを調査する包括的な研究は限られています。

トリュフから生物活性化合物を回収するには、適用された抽出技術や溶媒の極性など、抽出パラメータに大きく影響されます。超音波補助抽出(UAE)、マセレーション補助抽出(MAE)、ソックスレット抽出(SE)などの生物物理的抽出法は、極性化合物のエネルギー入力、抽出効率、選択性の面で有意な違いを示しています²⁸。しかし、ほとんどの研究は単一の抽出方法や限られた溶媒系に依存しており、これらの方法がT. claveryiのin vitro生物学的活性プロファイルに与える影響を比較検討する研究は限られています。したがって、本研究では、異なる極性の溶媒を用いた複数の生物物理的抽出法を体系的に比較し、T. claveryi抽出物のin vitro生物学的活性を評価します。抽出法と溶媒の極性が、方法依存的な生物学的活性の違いをもたらすと仮説が立てられました。したがって、本研究の目的は、(i) 異なる方法や溶媒間の抽出収量を比較すること、(ii) 方法依存的な抗酸化物質および細胞毒性活性の変動を評価すること、(iii) 抽出戦略に対する感受性を考慮した抗菌薬および抗生物膜反応の検証です。

Protocol

注: T. claveryi 抽出物の調製および分析に関する全体的な実験ワークフローは 図1に概略的にまとめられています。研究で使用されるすべての材料は 材料表に記載されています。

1. 菌類材料の鑑定と調製

1. 資料の収集と処理
   注:新鮮な T.クラヴェリュ フは、2023年5月にトルコ中央アナトリアのキルセヒル州のステップ地および砂地の未耕作(非農業地)から採取されました。サンプリングは3か所で行われました:デデリ村(北緯38度54分15.8秒、東経34度06分40.3秒、海抜~1050メートル)、ブユッカヤパ村(北緯38度53分45.1秒、東経34度19分37.5秒、海抜約1020メートル)、アクジャーグル村(北緯39度01分39.9秒、東経34度12分39.8秒、海抜約1100メートル)です。採集地は半乾燥大陸性気候が特徴で、冬は寒く、夏は暑く乾燥し、年間平均降水量は約380〜420mmです。すべてのサンプルは、最近農業活動がなかった自然な果実期に採取され、人為的汚染の可能性を最小限に抑えました。
   1. きれいで傷のないトリュフを選び、皮をむき、蒸留水で3回洗います。
   2. サンプルを小さくスライスし、一定の重さ(約20日)になるまで日陰乾燥させます。
   3. 機械式粉砕機で乾燥した材料を粉砕し、328ミクロン(50メッシュ)のふるいに通します。
   4. 処理済みサンプルはジップロック袋に入れ、冷たく乾燥した暗い環境で室温で保管し、さらなる分析が行われるまで保管してください。
2. T. claveryiの分子同定
   1. 分子同定のために乾燥した T. claveryi サンプルからゲノムDNAを分離します。
   2. DNAの量と純度を分光光度測定で評価してください。
   3. ユニバーサルプライマーITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGGG-3′)およびITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATGC-3′)を用いて内部転写スペーサー(ITS)領域を増幅することで種同定のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を行います。
   4. 1倍TAEバッファーで調製し、エチジウム臭化物染色後に紫外線照射下で観察した1.5%アガロースゲル上で、PCR増幅産物を電気泳動で分離します。
   5. 製造^{元の指示に従って}単一バンドPCR製品を精製してください。精製アンプリコンをサンガーシーケンスに投与。
   6. コンテンサスアセンブリプログラム(CAP)アルゴリズムを用いて、順方向および逆方向のシーケンス読み取りをコンセンサスシーケンスに変換します。
   7. 種の同一性は、コンセンサスITS配列と公開データベースで利用可能な参照配列を比較することで確認されました。
      注: T. claveryi のバウチャー標本は、将来の参考のために実験室コレクションに保管されています。種の同定はITSベースの分子分析によって確認されました(補足ファイル1)。

2. 菌類材料の調製と抽出

1. T. クラヴェリ抽出物の調製
   1. 乾燥T . claveryi 粉末約30gの重さです。
   2. すべての抽出方法で固液比を一定に保つために、150mLの溶媒(メタノール、アセトン、N-ヘキサン、酢酸エチル、または蒸留水)を加えます。
   3. すべての抽出手順には分析用溶媒を使用してください。
   4. 各抽出物を減圧下で定性フィルターペーパーでろ過します。
   5. 回転蒸発器を用いて、30〜45°Cの低圧下でろ過液を濃縮します。
   6. 濃縮抽出物を完全に溶媒除去するまで冷凍乾燥(凍溶乾燥)します。
   7. 乾燥原油抽出物は−20°Cの温度で保存し、さらなる分析まで待つ。
      注意:方法論的一貫性と比較可能性を確保するために、すべてのサンプルに対して同一の抽出後処理ステップを適用してください。
2. 生物物理的抽出方法
   1. マセレーション補助抽出(MAE)
      1. 粉末状の T. claveryi サンプルを密閉抽出容器に入れます。
      2. 溶媒と固形物の比率を一定に保ちながら選んだ溶媒を加えます。
      3. 混合液は室温の暗い環境で72時間孵化します。
      4. 溶剤の蒸発を防ぐために容器は閉じたままにしてください。
      5. マセレーション期間中は外部攪拌を行わないでください。
      6. 抽出期間の終わりに混合物を沈殿させます。
      7. さらなる処理前に抽出物をろ過してください。
   2. ソックスレット抽出(SE)
      注意:適切な凝縮水の循環を確保し、逆流中の乾燥加熱を避けること。
      1. 粉末状のサンプルをセルロース抽出用の指ぬきに入れます。
      2. 指ぬきをソックスレット抽出室の丸底フラスコに接続して配置します。
      3. 選んだ溶媒をフラスコに加え、溶媒対固体の比率を一定に保ちます。
      4. 溶媒を加熱して逆流させます。温度制御のマントルを使って。
      5. 24時間連続抽出を維持してください。
      6. 抽出温度は各溶媒の沸点(n-ヘキサン:68.7°C、酢酸エチル:77.1°C、メタノール:64.7°C、アセトン:56°C、蒸留水:100°C)で維持してください。
   3. 超音波補助抜歯(UAE)
      注意:超音波処理中の過熱を防ぐために温度を継続的に監視してください。
      1. 粉末状の T. claveryi サンプルを抽出容器に入れます。
      2. 溶媒と固形物の比率を一定に保ちながら選んだ溶媒を加えます。
      3. 35kHzの固定周波数と出力520Wで25分間ソニック処理します。
      4. 抽出温度は約30°Cに保ちます。
      5. 超音波処理中は5分ごとに氷を加え、温度を25〜28°C以内に保ちます。
3. 抽出効率
   1. 抽出前に乾燥した菌類物質(_Wp)を秤にしてください。
   2. 溶媒を完全に除去した後、乾燥原油抽出物(W_ext)を計量してください。
   3. 式(1)を用いて抽出効率を計算します。
      (1)
   4. 乾燥した原油抽出物をそれぞれの溶媒に再溶解し、標準濃度10 mg/mLのストック溶液を準備します。
   5. 各 in vitro バイオアクティビティ実験の前に、ストック溶液を新たに準備してください。
      注:すべての抽出物濃度を標準化し、その後のバイオアクティブアッセイで比較可能な用量を確保してください。

3. 抗酸化活性の決定

1. DPPH、ABTS、FRAPアッセイを用いた抗酸化活性解析を行います。
2. 新たに調製したストック溶液から、0.25から1.0 mg/mLまでの5種類の異なる抽出物を準備します。
3. 再現性を確保するために、すべての測定は三重に行ってください。
4. マイクロプレートリーダーを用いて分光光度測定法で吸収率値を記録します。
   注意:すべてのアッセイは確立された文献プロトコルに従って行い、わずかな修正を加えてください。
5. DPPHの過激なスカベンジング活動
   注: T. claveryi 抽出物のDPPHラジカル除去活性は、文献で記載された方法で評価され、わずかな修正を加え^ました。DPPH溶液および反応混合物を光から保護します。
   1. 70%メタノールのDPPH溶液を準備します。
   2. DPPH溶液を517 nmで吸収度1.00±0.02に調整します。
   3. 異なる濃度の抽出物50μLをマイクロプレートウェルにピペット移液します。
   4. 各ウェルに250μLのDPPH溶液を加えます。
   5. 反応混合物を暗闇の室温で30分間培養します。
   6. マイクロプレート分光光度計を用いて517 nmの吸収を測定します。
   7. メタノールを陰性対照として、アスコルビン酸を陽性対照として使用してください。
   8. 線量応答曲線を構築し、IC₅₀値を計算してラジカルスカベンジング活動を定量化します。
6. ABTS陽イオンラジカルスカベンジング活動
   注:文献に記載された方法に従い、若干^{修正を加えて}ABTSラジカルスカベンジングアッセイを実施してください。使用の少なくとも16時間前にABTSのラジカル溶液を準備し、光から守ってください。
   1. 反応混合物を室温の暗い環境で16時間培養してABTSラジカル溶液を生成します。
   2. 分析前にABTS溶液1 mLをエタノール80 mLで希釈します。
   3. 希釈したABTS溶液の吸光度を734 nmで0.80±0.02に調整します。
   4. 異なる濃度の抽出物50μLをマイクロプレートウェルにピペット移液します。
   5. 各ウェルに250μLのABTS溶液を加えます。
   6. 混合物を室温で10分間孵化します。
   7. マイクロプレート分光光度計を使って734 nmの吸収を測定します。
   8. 線量反応曲線を構築し、IC₅₀値を計算します。
7. フェリック還元抗酸化力(FRAP)アッセイ
   注:FRAPアッセイは文献で提案された方法に従って実施し、わずかな修正を加え^ます。使用前にFRAP試薬を新たに準備し、反応混合物を光から保護してください。
   1. 参照プロトコルに従ってFRAP試薬を準備します。
   2. 異なる濃度の抽出物20μLをマイクロプレートウェルにピペット移します。
   3. 新たに調製されたFRAP試薬280μLを加えます。
   4. 反応混合物を室温の暗い場所で45分間培養します。
   5. マイクロプレート分光光度計を使って593 nmの吸収を測定します。
   6. Troloxを標準としてキャリブレーションカーブを作成します。
   7. 抗酸化能力は抽出物1グラムあたりのトロロックス当量(TE)として表現されます。

4. 総フェノール含有量(TPC)解析

注:文献に記載されているFolin–Ciocalteu法を用いてT . claveryi 抽出物の総フェノール含有量(TPC)を、若干修正を加えて測定^{してください。}培養中は反応混合物を光から守りましょう。炭酸ナトリウム溶液は使用前に新鮮に準備してください。

1. 新たに調製したストック溶液から1 mg/mLの濃度で抽出液を準備します。
2. 抽出物25 μLをマイクロプレートウェルにピペットし、蒸留水75 μLを加え、さらにFolin–Ciocalteu試薬25 μLを加えます。
3. 混合物を室温で6分間孵育します。
4. 各井戸に7%(w/v)炭酸ナトリウム溶液100 μLを加えます。
5. 反応混合物を室温の暗い環境で90分間培養します。
6. マイクロプレート分光光度計を使って665 nmの吸収を測定します。
7. ガリック酸を標準として比較曲線を作成し、総フェノール含有量を計算します。結果は抽出物1mLあたりのmgガリック酸当量(GAE)として表します。

5. LC-MS/MSを用いた植物化学分析

注:既に発表されたクロマトグラフィー法に従ってLC-MS/MS分析を行い、わずかな^{修正を加えてください}。すべての試料と移動相を0.22μmの膜フィルターでろ過し、分析前に移動相を脱ガスします。

1. 定量的な植物化学プロファイリングのために、総フェノール含有量が最も高い抽出物を選択してください。
2. 逆位相のC18カラムを用いてクロマトグラフィー分離を行い、30°Cに保つ。
3. (A)脱イオン水中の0.1%蟻酸と(B)アセトニトリル中の0.1%の蟻酸からなる移動相を準備し、流量を0.4 mL/minに設定、注入量を5 μLに調整し、総稼働時間を17分に設定します。
4. 窒素を乾燥、被覆、ネブライゼーションガスとして用いる電気噴霧イオン化(ESI)条件下での質量分析検出を行います。
5. 乾燥ガス温度を350°C、流量12L/min、シースガス温度を250°C、流量5L/minに設定し、ネブライザー圧力を55psiに調整します。
6. 各フェノール標準の外部校正曲線を作成し、対応する校正曲線を用いて分析対象を定量化します。

6. 抗菌活性試験

注意:確立された微生物学プロトコルに従い、寒天ウェル拡散法を用いて抗菌活性を評価してください。すべての微生物学的手技は、バイオセーフティキャビネット内で無菌条件下で実施してください。使用前後のすべての材料を滅菌してください。

1. 抗菌検査のために以下のタイプ株を選択してください: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853、大腸菌( Escherichia coli ATCC 25922)、黄色 ブドウ球菌(Staphylococcus aureus ATCC 25923)、 腸球菌糞便(Enterococcus faecalis ATCC 29212)、 Bacillus cereus ATCC 14579、 Staphylococcus epidermidis ATCC 12228、 Listeria monocytogenes ATCC 19115、 Acinetobacter baumannii ATCC 17978、 ジゲラ・ジジニアエ( ATCC 13313)、 Klebsiella pneumoniae (ATCC 13883)、および エンテロバクター・エアロジェネス ATCC 13048。
2. 各細菌株をトリプトン大豆ブロス(TSB)に接種し、最適な成長温度で培養し、光学密度がOD₆₀₀ = 0.7に達するまで培養します。
3. 細菌培養液を無菌綿棒を使ってトリプトン大豆寒天(TSA)プレートに均一に広げます。
4. 無菌コルクボーラーを使って無菌的に寒天に穴を開けます。
5. 各抽出物をそれぞれ100μL(100μg/mL)を対応するウェルに加えます。
6. プレートは37°Cで18時間培養します。
7. 各ウェルを取り囲む阻害帯の直径を測定し、抗菌活性を評価します。
8. すべての実験を三乗行して、結果を平均値として表現します。

7. バイオフィルム阻害

注:基準細菌株に対して結晶バイオレット染色アッセイを用いて抗バイオフィルム活性を評価してください。すべての処置は無菌条件下で行い、洗浄時に付着したバイオフィルムを乱さないようにしてください。

1. Escherichia coli ATCC 25922およびPseudomonas aeruginosa(ATCC 27853)を基準株として選択し、TSBで37°Cで培養し、対数成長段階に達するまで培養します。
2. 細菌懸濁液を光学密度OD₆₀₀ = 0.132に調整します。
3. 抽出液100μL(0.625–10 mg/mL)を無菌の96ウェルマイクロタイタープレートにピペットし、各ウェルに100μLの細菌懸濁液を加えて優しく混ぜます。
4. プレートは37°Cで24時間孵化します。対照群としてはTSB単独を含むウェル、エキスを含まない細菌懸濁液を含むウェルを用いてください。
5. 非接着細胞は慎重に取り除き、井戸を蒸留水で2回洗浄し、プレートを自然乾燥させます。
6. 各ウェルに0.4%(w/v)の結晶バイオレット溶液200 μLを加え、30分間培養します。
7. 余分な染みを取り除き、井戸を蒸留水で2回洗い流し、プレートを完全に乾かします。
8. 結合染料を溶けさせるためにエタノールを加え、マイクロプレートリーダーを使って595 nmの吸収を測定します。
9. 式(2)を用いて抗生物質膜活性を計算します。
   (2)

8. 細胞培養および細胞毒性活性解析(MTTアッセイ)

注意:標準的な細胞生存プロトコルに従い、MTTアッセイを用いて細胞毒性効果を評価してください。すべての手順はバイオセーフティキャビネット内で無菌状態で実施し、使用前に培地と試薬を37°Cまで予温してください。

1. 認定された細胞リポジトリからヒト神経芽細胞腫のSH-SY5Yを入手し、^25cm2 培養フラスコで10%胎児用牛血清(FBS)、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、1%L-グルタミンを補足したDulbeccoの改変Eagle培地(DMEM)で細胞を培養します。
2. 培養物を37°Cの加湿大気で_CO2 濃度5%に保ち、細胞を約80%の合流率まで培養します。
3. トリプシン化によって細胞を剥離し、1ウェルあたり2個×10個⁴ 個の密度で96ウェルプレートにシードし、24時間培養して付着を許可します。
4. 細胞を150、300、600、1200、2000 μg/mLの濃度でT . claveryi 抽出物で処理し、24時間培養します。
5. 培地を取り出し、各ウェルに10μLのMTT溶液を含む新鮮培地100μLを加え、37°Cで4時間培養します。
6. 培地を吸引し、各ウェルに100μLのジメチルスルホキシド(DMSO)を加えてフォルマザン結晶を溶解し、マイクロプレート分光光度計を用いて570 nmの吸収を測定します。
7. すべての実験は三つずつ行ってください。

図1:実験ワークフローの概観。この 図の拡大版はこちらをクリックしてください。

9. 統計分析

1. 適切な統計ソフトウェアパッケージを用いて統計解析を行い、必要に応じて学生の t検定または双方向分散分析(ANOVA)を用いて対照群と治療群を比較します。
2. すべてのデータを平均±標準誤差(SEM)として表現します。
3. p < 0.05で統計的有意を定義します。
4. 統計的有意性はアスタリスクで示し、p < 0.0001 の場合は ****、p < 0.001 **、p < 0.01 **、p < 0.05 は * を示し、無有意性は「ns」で示します。

Results

T. claveryiの分子同定
ITS領域のPCR増幅は、T . claveryi の分子同定のために汎用プライマーITS1およびITS4を用いて実施されました。得られた配列はBLASTアルゴリズムを用いてNCBIデータベース内の参照配列と解析・比較され、確定的な種同定が可能となりました(補足ファイル1)。

抽出効率
抽出効率は抽出方法や溶媒の極性によって異なりました(表1)。MAE法では抽出効率が以下の順で低下しました:水>メタノール>エチル酢酸>アセトン>n-ヘキサン(2.15〜15.01%)。SE法およびUAE法は溶媒依存的な傾向が似ており、抽出効率の低下は以下の順で示されました:水>メタノール>エチルアセテート>n-ヘキサン>アセトン(SE:2.58–9.53%;UAE:3.01–18.40%)。最も高い抽出効率(18.4...

Discussion

本研究は、 T. claveryiの比較かつ標準化された抽出・バイオアクティビティプラットフォームを確立し、抽出戦略が化学組成と生物学的機能の両方を決定する決定的な要因であることを示しました。このプロトコルの主な方法論的強みは、抽出パラメータの厳格な管理、特に固定された固液比、標準化された溶媒体積、同一抽出後の処理、バイオアッセイ前の均一なストック溶液調製にあります。これらのステップはワークフロー内の重要なコントロールポイントを表しています。溶媒量の変動、溶媒除去の不完全、または再構成濃度の不均一は、抗酸化剤や細胞毒性の比較に大きなバイアスを与えます。したがって、下流の調製条件を同一に保つことで、観察される生物学的差異は濃度の人工物ではなく質的な組成変化を反映することが保証されました。さらに、UAEおよび水性SEでの温度調節も不可欠でした。超音波抽出中のキャビテーションは局所的な高エネルギー微小環境を生み出し、質量移動を促進する可能性がありますが、慎重に制御されなければ感受性の高い代謝物を不安定化させることもあります。本研究における断続冷却は、フェノー...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
96ウェルポリスチレンマイクロタイタープレート	ネスト・サイエンティフィック	701001	細胞培養/アッセイプレート
ABTS(2,2'-アジノビス(3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルフォン酸))	シグマ・オルドリッチ	A3219	陽イオンラジカルスカベンジングアッセイ
アセトン(分析用グレード)	シグマ・オルドリッチ	179124	抽出溶媒
アセトニトリル(LC-MSグレード)	シグマ・オルドリッチ	34851	有機移動相
アシネトバクター・バウマンニー	ATCC	アメリカ合衆国バージニア州マナサス	ATCC 17978
トリプルクアッドLC-MS/MSと1290 Infinity UPLCシステム	アジレント・テクノロジーズ	6460	定量的分析
解析カラム(C18、4.6 & 100 mm、3.5 & mu;m)	アジレント・テクノロジーズ(ゾルバックス)	959990-902	逆位相カラム
抗酸化基準(アスコルビン酸/トロロックス)	シグマ・オルドリッチ	A7506 / 238813	陽性対照群
Applied Biosystems 3730xl DNAアナライザー	応用バイオシステム	3730xlDNAアナライザー	DNAシーケンシングシステム
応用バイオシステム&貿易;BigDye™ターミネーター v3.1 サイクルシーケンスキット	応用バイオシステム	4337455	サンガーシーケンスキット
バチルス・セレウス	ATCC	アメリカ合衆国バージニア州マナサス	ATCC 14579
バイオインフォマティクス解析、BioEditソフトウェア、使用アルゴリズム:CAPのコンティグアセンブリ	アイビス・バイオサイエンス	NA	シーケンスアセンブリソフトウェア
セルロース抽出指針	フィッシャーブランド&トレード;	11724043	ソックスレット抽出に使用
ジメチルスルホキシド(DMSO)	メルク	102952	溶媒
DNA分離キット(Plant&;菌類DNA分離キット(ポーランド)	EurX GeneMATRIX	E3595	DNA分離
DPPH(2,2-ジフェニル-1-ピクリルヒドラジル)	シグマ・オルドリッチ	D9132	ラジカルスカベンジングアッセイ
ダルベッコ改良イーグル・ミディアム	山羊座、そしてnbsp;	DMEM-HA
エンテロバクター・エアロジネ	ATCC	アメリカ合衆国バージニア州マナサス	ATCC 13048
腸球菌	ATCC	アメリカ合衆国バージニア州マナサス	ATCC 29212
大腸菌	ATCC	アメリカ合衆国バージニア州マナサス	ATCC 25922
エタノール	メルク	100983	溶媒
エチルアセテート	メルク	109623	抽出溶媒
胎児用牛血清(FBS)	カプリコーン・サイエンティフィック	FBS-16A
BigDyeTerminator v3.1 サイクルシーケンスキット	サーモフィッシャー	4337455	シーケンスキット
Folin-Ciocalteu 試薬	シグマ・オルドリッチ	47641	総フェノール含有量
蟻酸	シグマ・オルドリッチ	33015	移動位相加法
ガリック酸	カルロ・エルバ	406335	キャリブレーションカーブ
Gene MATRIX Plant&菌類DNA分離キット	ユーロ	E3595	DNA分離キット
GraphPad プリズム(v9)	データ可視化と統計解析	該当なし	統計解析
加熱マントル	電熱およびnbsp;	EME30500	溶媒逆流の維持に使用されます
HighPrep™PCRクリーンアップシステム	マグビオ	AC-60005
氷	実験室グレード	—	UAEの温度管理
クレブシエラ・肺炎	ATCC	アメリカ合衆国バージニア州マナサス	ATCC 13883
L-グルタミン	カプリコーン・サイエンティフィック	ドイツ
リステリア・モノサイトゲネス	ATCC	アメリカ合衆国バージニア州マナサス	ATCC 19115
凍凍粉	サイエンツ	該当なし	抽出物の凍結乾燥
磁気ビーズ&ナッシュ;ベースのPCRクリーンアップシステム	マグビオ	AC-60005	PCR
メタノール	メルク	106009	抽出溶媒
n-ヘキサン	メルク	103701	抽出溶媒
ペニシリン/ストレプトマイシン	カプリコーン・サイエンティフィック	ドイツ
Pseudomonas aeruginosa	ATCC	アメリカ合衆国バージニア州マナサス	ATCC 27853
フィルターペーパー(No. 541)	シチバ	1541-125 V	抽出ろ過プロセスにおいて
ロータリーエバポレーター	ブチR100	11100V101	溶媒除去
赤痢シゲラ	ATCC	アメリカ合衆国バージニア州マナサス	ATCC 13313
炭酸ナトリウム	メルク	106392	トータルフェノール解析
SPECTROstar ナノマイクロプレートリーダー	BMGラボテック		吸収度測定
黄色ブドウ球菌	ATCC	アメリカ合衆国バージニア州マナサス	ATCC 25923
ブドウ球菌	ATCC	アメリカ合衆国バージニア州マナサス	ATCC 12228
統計解析ソフトウェア(SPSS、v23)	データ分析	NA
サーモサイエンティフィック・ナノドロップ2000	サーモフィッシャー・サイエンティフィック	ND-2000
トリプトン大豆寒天(TSA)	メルク	ドイツ	—
トリプトン大豆ブロス(TSB)	メルク	ドイツ	—
超音波ホモジナイザー	サイエンツ	SCIENTZ-650L	超音波補助抜歯法