ここでは、固定哺乳類細胞におけるポリ(ADP-リボース)(PAR)濃縮焦点の細胞ベースの可視化、細胞内局在化、定量解析の方法を説明します。このアッセイにより、ジェノトキシン曝露細胞の核におけるDNA損傷によるPARP活性化部位の定量化が可能となり、塩基切除修復や単鎖断裂修復に関連する部位も含まれます。
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| <ストロング>試薬、化学物質、ペプチド | |||
| 0.45 & micro;m Durapore steriflipフィルター | シグマ・オルドリッチ | キャット# SE1M003M00 | |
| 20×20mmの顕微鏡カバースリップ | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | 猫#22-170-371 | |
| アセトン | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | カタログ# A18-1 | |
| 細胞培養皿、100mm | VWR | カタログ#25382-166 | |
| 細胞培養皿、60mm | フィッシャー・サイエンティフィック | キャット# 430166 | |
| 細胞培養プレート、6ウェル | VWR | カタログ#62406-161 | |
| クライオバイアル、2 mL | VWR | カタログ# 89499-722 | |
| ジエチルエーテル | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | 猫 # 60-29-7 | |
| ジメチルスルホキシド | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | Cat# BP231-1 | |
| 使い捨て滅菌フィルター、0.45およびマイクロ;m | シグマ・オルドリッチ | キャット# SE1M003M00 | |
| DMEM | コーニング | カタログ# 15-017-CV | |
| エタノール、200プルーフ | デコン・ラボ | カテゴリー#2701 | |
| ガラス顕微鏡スライド | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | カタログ# 12-544-4 | |
| 熱不活化胎児用牛血清 | アトランタ・バイオロジックス | 猫 #S11150 | |
| 塩酸 | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | 猫 # A144-212 | |
| ヒグロマイシン | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | 猫#10687010 | |
| ラージキムワイプ | キンバリー・クラーク | カタログ#34256 | |
| Lenti-X GoStix Plusキット | 宝 | 猫#631280 | |
| メタノール | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | カタログ#A452SK-4 | |
| MNNG | モルポート | キャット# N493990 | |
| NRH(1-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-ジヒドロキシ-5-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン-2-イル]-4H-ピリジン-3-カルボキシアミド) | マリー・ミゴー またはニューケムサイエンシズ株式会社 | ||
| PARG阻害剤(PDD00017273) | シグマ・オルドリッチ | 猫#SML1781 | |
| PARPi阻害剤(ヴェリパリブ、ABT-888) | MedChemExpressなど; | カテゴリー# HY-10129 | |
| ペニシリン/ストレプトマイシン | ギブコ | カタログ#15140-122 | |
| ポリブレン | シグマ・オルドリッチ | Cat# TR-1003-G | |
| tBuoooh | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | キャット# 180345000 | |
| TransIT-x2(トランスフェクション試薬) | ミルス | カテゴリ# MIR-6006 | |
| トリトン-X100 | VWR | 猫#0694 | |
| トリプシン-EDTA | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | 猫番号#25200-056 | |
| Vectashield(H-1000)フェード防止マウントメディウム | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | 猫#NC1695563 | |
| <強力>細胞株 | |||
| 293-FT | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | Cat# R70007 | |
| (SV40 大T抗原で形質転換されたヒト胚性腎細胞から得られます) | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | Cat# R70007 | |
| LN428 | 寛大な贈り物 | 該当なし | |
| (ヒト膠芽腫腫瘍細胞株) | イアン・ポラック博士(ピッツバーグ大学) | 該当なし | |
| RPE-1 | ATCC | Cat# CRL-4000 | |
| (ヒトhTERTで不死化網膜色素上皮細胞) | ATCC | Cat# CRL-4000 | |
| U2OS | ATCC | カテゴリー# HTB-96 | |
| (ヒト骨肉腫細胞株) | ATCC | カテゴリー# HTB-96 | |
| 組換えDNA | |||
| pMDLg/pRRE | ラボストック#253 | Addgene、カタログ#12251 | |
| pRSV-Rev | ラボストック#254 | アドジーン、カタログ#12253 | |
| pMD2.G | ラボストック#252 | Addgene、Cat#12259 | |
| pLV-EF1A-LivePAR-Hygro (LivePARはRNF146のWWEドメインで、アミノ酸残基100-182がEGFPと融合;ヒグロマイシン耐性カセットを含む) | ラボストック#1727 | Addgene、Cat# 176063 | |
| Software and Algorithms | |||
| Adobe Illustrator(図の準備用) | アドビシステムズ | バージョン2024 | |
| GraphPad プリズム | グラフパッド | バージョン 10.5.0 (Mac OS X) | |
| イメージJ | NIH | https://imagej.net/ij/download.html |
このJoVE記事のテキストまたは図の再利用許可をリクエスト
許可をリクエスト