線形イオントラップ質量分析法に基づく、ホオシャン正奇口腔液体中の未知化合物の構造解析の技術的アプローチ

Summary

ここでは、多段階質量分析木と火翔正奇経口液体に基づく断片化プロセスを組み合わせた標準プロトコルを示します。

Abstract

中国漢方化合物(CHC)は中国医学においてかけがえのない役割を果たしており、その複雑な成分の特定は近年重要な研究重点となっています。火香正気の経口液体は、分子レベルでさらなる研究が必要な中国の古典的な特許薬です。従来の質量分析計、例えば飛行時間分析儀やオービトラップ分析儀は、通常は二次的な断片情報のみを提供します。線形イオントラップ質量分析計に基づき、化合物をより詳細に分解でき、より深い断片情報を得ることができます。本論文は、試料前処理、超高性能液体クロマトグラフィー製剤、質量分析準備、フルスペクトル試験、二次質量分析試験、多層質量分析試験、結果解析を含む、未知のCHC中の構造探索技術を開発します。代表的な結果は、化合物構造の導出過程を示しています。異性体、ポリヒドロキシ化合物、機器の解像度など、実験技術に影響を与える要因について議論します。未知化合物の微小分子構造を多段階質量分析による断片解析に基づくこの確立された実験手法は、伝統中国医学における生体活性小分子の構造特性評価や薬理学的メカニズムとの関連に多用途かつ応用可能です。

Introduction

中国漢方化合物(CHC)は、伝統中国医学(TCM)の貴重な資産として、何千年にもわたる実証済みの臨床経験を蓄積しています^。彼らは疾病予防、治療介入、リハビリテーションにおいてかけがえのない役割を果たし^{ています。}マルチハーブの相乗効果を通じて、CHCは人体全体を総合的に治療し、ホリズムと症候群分化に基づく治療の核心的理念を実践しています^。現代医療の枠組みの中で、CHCは多標的経路に関与する多薬理的メカニズムで世界的に認められ^{ており、消化}器疾患、呼吸器感染症、免疫調節に広範な応用があります^。火香正気の経口液体(HXZQ)は、古典的なCHC配合の典型^です。その成分は、パチョリ、ペリラリーフ、アンジェリカ・ダフリカ、アトラクティロデス、ポリア、乾燥みかんの皮など複数の薬用ハーブを組み合わせています。発汗、熱の浄化、湿気の溶解、脾臓の胃の強硬^化効果で知られています。HXZQは、湿気誘発性インフルエンザ様症候群、上腹部膨張、嘔吐、下^{痢疾患に対して}臨床的に適用されます。技術の進歩により、CHC研究は現....

Protocol

1. サンプル前処理

1. 商用HXZQのパッケージを開けてください。HXZQを正確に0.1mLを2mLのサンプルボトルに移し、その後0.9mLの水を加えます。溶液をよく混ざるまで振ってください。
2. 注射シリンジ(1 mL)と微多孔膜フィルター(0.22 μm)を準備します。溶液を新しい2mLのサンプルボトルに濾過します。
   注意:実験的な処置中は適切な個人的注意を必ず行ってください。

2. 超高性能液体クロマトグラフィー(UPLC)製剤

1. Xcaliburソフトウェアをダブルクリックしてください。「ダウンロード準備」をクリックし、その後「ダイレクトコントロール」ボタンをクリックしてください。ポップアップウィンドウのポンプモジュール列をクリックし、%Bを50、%Cを0、%Dを0に設定します(図1)。
2. モーターボタンをクリックするとオン状態に切り替えられます。「More Options」ボタ....

Results

まずすべてのm/z情報を集計し、その後親イオンと断片イオンの質量差値を計算する必要があると提案しました。データベースや文献に報告されている化合物を見つけ、その既知の構造に基づいて未知の化合物構造を逆に推論しました。

検出されたすべての化合物とその断片イオンはm/z値で示されました。これらの断片イオンの一部は認証済みリファレンス標準²⁰に照合可能でした。未知の標的化合物構造は、これらの構造的に診断可能な中間体を系統的に機能基修飾することで段階的に組み立てられました。

未知の化合物に対してm/z=623.21のMS/MS断片化を実施しました。1個のヘキソース単位を除去した後、m/z=461.15の中間体断片が得られました。三次質量分析(MS³)による断片化により、中間体はラムノーズ1単位を失い、m/z=315.09のネオビヤカンジェリコルを生成しました。その後の四重極質.......

Discussion

LIT-MSとそのMSⁿ 断片化技術の組み合わせにより、CHC中の未知化合物を同定する方法が可能となります。従来のオービトラップやQ-TOFのMSモードとは異なり、リニアイオントラップは標的イオンを特異的に捕捉でき、共溶出イオン²³による干渉を効果的に回避します。この方法は分子レベルの精度を実現し、比較的正確な化学構造情報を提供し、データベースのギャップによる未知化合物の選別の課題を部分的に解決します。

グリコシド、多糖類、フラボノイド、その他の化合物は^CHCsに広く存在します。線形イオントラップにおけるこれらの成分の断片化パターンは注目に値します。多糖類のMSⁿ 切断の過程で、グリコシド結合切断が最も起こりやすい²⁵。単糖に断片化されると、分子内脱水がさらにラクトンを形成することがあります。炭水化物中にヒドロキシル基や多数の異性.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
アセトニトリル	サーモ・サイエンティフィック	CAS 75-05-8	液体状態
蟻酸	サーモ・サイエンティフィック	CAS 64-18-6	液体状態
火香正気経口液	重慶太極工業(グループ)有限公司	州の薬物標準コードZ50020409	研究対象
リニアイオントラップ質量分析計	サーモ・サイエンティフィック	LTQ XL	IT-MS計測器
液体クロマトグラフ	サーモ・サイエンティフィック	U3000	UPLC機器
エクスカリバー	サーモ・サイエンティフィック	バージョン2.0	UPLC-IT-MS 運用ソフトウェア