このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。

方法論記事

ゼブラフィッシュの悪性および非悪性リンパ球を採取するための新しいスケール生検法

143 閲覧数

⸱

DOI：

10.3791/72153

⸱

2026年8月7日

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cell Biology, University of Oklahoma Health Sciences Center, 2Division of Pediatric Hematology-Oncology, Department of Pediatrics, Stephenson Cancer Center, 3Department of Microbiology & Immunology, University of Oklahoma Health Sciences Center

この記事について

サマリー

新しいスケール生検法により、生きたゼブラフィッシュから急性リンパ芽球性白血病細胞を採取することが可能です。結果は野生型(WT)魚の鱗に豊富なリンパ球が存在し、急性リンパ芽球性白血病(ALL)の魚の鱗ではリンパ球が劇的に増加していることが示されました。この技術により、表皮の正常および悪性リンパ球の低侵襲研究が可能になります。

要約

ゼブラフィッシュ(Danio rerio)はリンパ生成やリンパががんを研究する強力なモデルであり、ゼブラフィッシュと人間はB細胞やT細胞を含む類似の適応免疫システムを共有しています。リンパ芽細胞特異的ヒトMYC(hMYC)を発現する魚を含む、いくつかのD. rerio T細胞急性リンパ芽球白血病(T-ALL)モデルが記載されています。私たちは、rag2:hMYC魚もB細胞急性リンパ芽球性白血病(B-ALL)を発症し、これらをすべてのタイプの研究に有用であることを報告しました。ゼブラフィッシュALLモデルの制約は、ALLの連続サンプリングのための非致死的手法が存在しないことです。これに対処するため、私たちは生きたゼブラフィッシュからすべての細胞を採取する新しい「スケール生検」法を先駆けて開発しました。しかし、通常のゼブラフィッシュの鱗にどのリンパ球が存在するかについてはほとんど知られていません。したがって、正常な表皮リンパ球の同定を特定するために、rag2:hMYCを欠くリンパ球標識トランスジェニック系統に対してスケール生検を行いました。従来の顕微鏡と共焦点顕微鏡を用いて鱗片を解析し、豊富な表皮リンパ球を明らかにしました。また、魚の鱗をT-およびB-ALLで解析し、多くのスケールでALL細胞の合流シートにリンパ球が著しく増加していることが示されました。次に蛍光活性化細胞選別(FACS)を用いて、非悪性および全てのリンパ球をスケールから精製し、生前外研究を行いました。同じ魚のスケールや他の組織からのすべての細胞のフローサイトメトリーおよび発現解析では、スケールの全細胞の遺伝子発現が他のすべての細胞と類似していることが示されました。また、スケールごとに精製可能な正常なT、B、T-ALL、B-ALLの細胞数も定量化しました。全体として、スケール生検はゼブラフィッシュの表皮リンパ球を非致死的かつ低侵襲で研究し、悪性サンプルの分析を含む生外研究を可能にします。

概要

哺乳類の皮膚のバリア機能と免疫における役割が確立されています。1,2,3。哺乳類のリンパ球は皮膚免疫に寄与し、表皮には細胞傷害性T細胞が存在し、真皮にはB、T、自然殺人(NK)細胞が存在します。ゼブラフィッシュはこれらのリンパ球を持ち、表面免疫グロブリン、T細胞受容体、主要組織適合複合体(MHC)受容体、サイトカインおよびその受容体、その他の免疫分子を持ち、哺乳類の免疫学的特徴の多くを共有しています。6,7,8,9。最近のゼブラフィッシュの皮膚とスケールの研究では、上皮T細胞およびB細胞を含むさまざまな皮膚リンパ球集団が示されており、T細胞輸送と抗原監視を促進するリンパネットワークが存在することが示されました。硬骨魚類と哺乳類のリンパ球の類似点により、D. rerioはリンパ生成、リンパ球機能、急性リンパ芽球性白血病(ALL)を含むリンパ病理を研究する強力な生体内モデルとなっています。

私たちの先行研究では、T-系統とB-系統のALL(T-ALL、B-ALL)は共にトランスジェニック のrag2:hMYC ゼブラフィッシュに生じることを示し、この系統はALLタイプ13、15、21、22の両方を研究するのに有用です。特に縦断的発現研究や薬物試験研究において、 D. rerio ALLモデルの大きな制約は、個々の動物から連続的にALLサンプルを採取する方法が不足していることです。従来の方法、例えば後眼窩血液採取は、 D. rerio の小型化により連続血液採取が難しいため技術的に困難でした。そのため、多くの研究者はゼブラフィッシュを安楽死させてすべての細胞を得ます。これは実験室や多くの分野で一般的な慣行ですが、生きた動物での縦断実験を行うことは不可能です。これを克服するために、最近、非致死性スケール生検戦略10を用いて採取したゼブラフィッシュスケール中の上皮性TおよびBリンパ球を記載しました。別の最近の研究では、ゼブラフィッシュの表面やその近く、隣接する鱗12の間にT細胞の貯蔵庫が存在することが示されました。 D. rerio は数百枚の鱗を抱えており、除去後数日で急速に再生します。これらの発見と特徴は、ゼブラフィッシュの鱗が安楽死を必要としないリンパ球の供給源であることを示し、生きた魚の縦断研究を可能にします。

ここでは、リンパ球特異的蛍光色素マーカーを持つ魚からゼブラフィッシュ表皮リンパ球を採取するスケール生検法(ALL有無にかかわらず)について説明します。T系統細胞の研究には、確立されたlck:GFP魚と類似のlck:mCherry系統を用いました。両細胞はT細胞とT-ALL細胞10,13,15,20を標識します。B系統細胞の研究にあたり、蛍光標識されたBおよびB-ALL細胞10,13,17を用いたcd79a:GFPおよびcd79b:GFPのトランスジェニック魚を使用しました。これらの各ラインは蛍光顕微鏡およびフローサイトメトリー細胞選別による可視化を可能にします。13。生検後の鱗を調べ、鱗でリンパ球の高解像度画像を作成し、qRT-PCRによる表皮リンパ球遺伝子発現の特定、同一魚類の他のリンパ組織のリンパ球との比較、およびフローサイトメトリー/蛍光活性化細胞選別による鱗ごとのリンパ球の定量化を行いました。まとめると、このプロトコルは、実験シーケンスの複数の時間点にわたって個体を縦方向にサンプリングするなど、生きたゼブラフィッシュからリンパ球を採取するシンプルかつ実用的な方法を説明しています。この方法は、ゼブラフィッシュのリンパ球生物学、白血病の進行、薬物反応、または個々のゼブラフィッシュの繰り返しサンプリングを必要とするその他の縦断的実験設計を研究することを目的としています。私たちは蛍光標識リンパ球集団を持つ成体トランスジェニックゼブラフィッシュを用いてプロトコルを開発し、蛍光顕微鏡、フローサイトメトリー/蛍光活性化細胞選別、RNA発現解析、その他生存可能なリンパ球を必要とする生前外研究など、後続的な応用のために検証しました。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

プロトコル

すべての動物処置は、オクラホマ大学健康科学センターの動物ケア・使用委員会(プロトコル24-028-EAHおよび25-068-EACHIR)によって承認されました。本プロトコルは、生きたゼブラフィッシュの鱗から正常および/または悪性リンパ球を分離・解析する方法を提示し、これらの手法の目的、実行方法、原理について詳細を説明します。

注意:MS-222は有害な化学麻酔薬であり、実験室用手袋、眼保護具、実験用コートなどの適切な個人用防護具(PPE)を併用して取り扱う必要があります。MS-222溶液は、機関の化学廃棄物ガイドラインに従って処分してください。針や鉗子の扱いには鋭いけがを防ぐために注意してください。すべての生物サンプルを潜在的に生物有害とみなし、廃棄物は機関のバイオセーフティ手順に従って処分してください。

1. 選別媒体の準備

  1. 1×RPMI 1640培地溶液に胎児用牛血清(FBS)1%とペニシリン/ストレプトマイシン1%をサプリメントしてください。
    注:RPMI 1640培地は体 外でリンパ球の生存能力を維持します。RPMI 1640は0.9× PBSに置き換えることができます。胎児用牛血清(FBS)は細胞の生存能力を促進する成長因子を提供します。ペニシリンとストレプトマイシンは細菌汚染を抑制します。
  2. 培地を1.5mLのマイクロ遠心分離機チューブに500μLの容量で分割し、各チューブは10〜20スケールを想定します。仕分け用メディアチューブは氷の上に保管してください。

2. ゼブラフィッシュ麻酔、蛍光顕微鏡スクリーニングおよび画像診断

  1. 動物管理ガイドラインに従い、魚のシステムから水を用いてバッファリングされた0.02%トリカインメタンスルホン酸(MS-222)でD . rerio を麻酔します。
  2. 鎮静後は、魚を適切なシステム用水(および0.02%のMS-222)を含んだ細胞培養皿に優しく入れ、その後の取り扱い時に水分を保ちます。
  3. 麻酔された魚をエピ蛍光顕微鏡で検査し画像化し、トランスジーンからの蛍光を検出します。このステップでは生検用の蛍光スケールを特定します。
    注:蛍光トランスジーンを欠く系統は標準的な光学顕微鏡で観察可能です。
  4. 蛍光を用いてT細胞(lck:GFP または lck:mチェリー フィッシュ)またはT-ALL(rag2:hMYC + lck:GFP または lck:mチェリー フィッシュ)を特定します。T系統細胞はこれらの系統で明るく蛍光を放ちます。B-ALL細胞は lck:GFP および lck:mCherry 背景13、15、21で微かに蛍光を発しています。
  5. 表皮B細胞および/またはB-ALLをGFPで選抜し、生検用の鱗片を選択するためにGFPを用いるB系統標識の cd79a:GFPまたはcd79b:GFP魚(rag2:hMYCの有無にかかわらず )をスクリーニングします。
  6. 生検前にゼブラフィッシュの位置取りや顕微鏡の設定調整を練習し、画像診断が必要な場合は
    注:画像診断および生検には0.02% MS-222による5〜7分間の鎮静が必要です。手術室の動きを継続的に監視してください。手術の動きが著しく遅くなったり停止した場合は、直ちに麻酔のない水中に移し、生検を中止します。画像診断および生検中は、皮膚、蓋、えらに1〜2分ごとに50〜100μLの麻酔を含む魚の水を再塗布し、表面水分を保ちます。

3. スケールの収集と準備

  1. 生検のために魚を位置づけるには、鎮静された魚を細胞培養皿に横向きに置きます。
  2. 生検中に魚が滑るのを防ぐために、線形またはV字型の切り欠きが入った湿ったスポンジを細胞培養皿に入れて魚を抱えます。
  3. あるいは、システムの水位が細胞培養皿の底をかろうじて覆う程度(表面を湿らせる程度)にし、表面張力で魚を安定させる方法もあります。
  4. 画像診断および生検中に水分を維持し、麻酔を維持するために、システム水で調製した0.02%MS-222を定期的に~50〜100μLのオペルクルムとエラに塗布します。
  5. 後進蛍光顕微鏡を用いて生検を行い、リンパ球またはALL細胞で高蛍光色の鱗片を選択します。
  6. 1つ目または2番目の水平色素縞内に、1つの強い蛍光領域から10〜20個の隣接した鱗片を採取してください。
    注:画像診断には一般的に1つのスケールで十分です。10〜20スケールのコレクションは通常、WT魚から>1,000個のリンパ球が得られ、フローサイトメトリーやqRT-PCRなどの下流解析に推奨されます。
  7. 利き手(針):31ゲージの注射器針を使い、針先を鱗の後端の下に優しく置き、前方にひっくり返します(例:セファラド)。魚ごとに異なる滅菌針を使いましょう。魚の間に清潔な鉗子を置く;機関の手続きで必要とされれば不妊手術を行う。
    注意:鉗子だけでスケールを持ち上げるよりも針でスケールを持ち上げる方が望ましく、表面の擦り傷を最小限に抑えます。これにより、鱗の下の繊細な表皮層が鱗の表面に密着し、細胞収量を最大化するために非常に重要です。
  8. 利き手(鉗子):鱗を前方に反転させて針を持った状態で、鉗子で鱗の硬い外側を掴みます。滑らかな動きで、鱗をポケットから取り出します。
    注意:スケール抜歯部位では軽度の出血が起こることがあり、通常は自己制限です。
  9. 過剰出血がある場合は、鉗子で優しく圧をかけ、システム水に0.02%のMS-222で短時間洗い流してください。
    注:止血は次の体重計に進む数秒以内に達成可能です。
  10. 複数の鱗を生検するには、1匹の魚につき10〜20枚の鱗を採取し、隣接する鱗を一つの水平色素縞で除去します。複数の体域や動物の両側に分かるのではなく。
  11. 鱗片を順次摘み取り、内側鱗片面を上に向けて鉗子の先端に保持します。
  12. 蓄積した鱗片がその後の鱗片除去に干渉しないように、まず鱗片を前方にひっくり返し、その後、後端で掴みます。鱗片を5枚採取するごとに、または鉗子先端に追加の体重計がしっかり固定できない場合は、選別用材を含むチューブにスケールを移します。
  13. スケール採取後は、できるだけ早くサンプルを処理します。すぐに鉗子から鱗を1.5mLのチューブに移し、500μLの冷級選別培地を氷で保存し、細胞の生存性を保ちます。魚同士の鉗子を70%エタノールで除染し、その後のサンプルを採取します。各魚から別々の管内で処理スケールが、採集、解離、下流解析の過程で行われます。
  14. スケール採取後は、MS-222のない淡水の回収水槽に直ちに移してください。
  15. 正常な呼吸と姿勢が回復するまで、手術の動きや泳ぐ行動を監視してください。魚を循環システムに戻す前に、生検部位の持続的な出血や苦痛の兆候を観察してください。
  16. 通常の平衡が整ったら魚を元の水槽に戻し、泳ぎを再開します。

4. 細胞解離とろ過

  1. チューブの底にあるスケールを確認してください。鱗は解離前は肉眼で簡単に見えます。無菌プラスチック製マイクロチューブペストルホモジナイザーを用いて、30〜60秒間優しく制御された手動圧力をかけてスケールを解離します。
  2. ゆっくりとした回転と上下の動きで表皮細胞を解放しつつ、過度な鱗のせん断を避けましょう。
  3. 分離を続け、選別媒体が目に見えて濁るまで続けます。
    注:この処置の成功は培地が濁り、懸浮細胞の濃度が高いことを示すことから示されます。
  4. 均質化されたサンプルを35μmナイロンメッシュフィルターに通して、ゴミを除去し、フローサイトメトリーや蛍光活性化細胞選別のための単一細胞懸濁液を生成します。
  5. 初回ろ過後に細胞集合体が見える場合は、フローサイトメトリ分析直前に再度35μmメッシュフィルターにかけます。細胞損失を最小限に抑えるために、合計2回までのろ過を繰り返してください。

5. フローサイトメトリ分析

  1. フローサイトメトリーでサンプルを解析します。
    注:フローサイトメトリーは、蛍光活性化細胞選別やRNA抽出前に実施され、サンプル組成を評価することができます。
  2. GFP検出用に488nmレーザー、mCherry検出用に561nmレーザーを備えたフローサイトメーターを用いて単一細胞懸濁液を解析します。
  3. 前方散乱(FSC)および側散乱(SSC)パラメータを用いてデブリを除外します。先に記載したリンパ球ゲート10,13,21を用いてリンパ球を同定します。
  4. 細胞集合体をシングレットゲート(すなわちSSC面積[SSC-A]対SSC-height[SSC-H])パラメータで除外します。
  5. プロピジウムヨウ化物(PI)または同等の生死染料を用いて細胞の生存可能性を評価します。PI陽性細胞は後の解析および選別手続きから除外します。
  6. 非トランスジェニックなゼブラフィッシュ対照群と単色蛍光トランスジェニック対照群を用いて蛍光ゲートを確立します。GFP陽性およびmCherry陽性の集団を陰性対照群と比較して定義します。
  7. フローサイトメトリー標準(FCS)ファイルをエクスポートし、フローサイトメトリー解析ソフトウェアを使ってデータを解析します。

6. 蛍光活性化細胞の選別

  1. 細胞の選別には、GFPおよびmCherry検出のために488nmおよび/または561nmレーザーを備えた蛍光活性化細胞選別装置を使用します。
  2. 蛍光に基づく選別の前に、リンパ球(FSC/SSC)、単粒(SSC-A対SSC-H)、および生存細胞(PI陰性)を順次ゲート化します。
  3. 陰性対照サンプルから確立された蛍光ゲートを用いてGFPlo、GFP hi、mCherry陽性集団を定義します。
  4. GFPlo、GFP hi、mCherry陽性集団を冷蔵選別液を含む収集チューブに選別します。
    注:本研究では、lck:GFP系統の研究では、高GFP(GFP hi)細胞と低GFP(GFP lo)細胞は、前述の10,13,15,21の異なるリンパ球系統です。
  5. 選別されたサンプルを氷上に保管し、直ちにRNA分離などの下流応用に進みます。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

結果

上記の手順に従い、成体のゼブラフィッシュに対して顕微鏡検査で蛍光リンパ球または全てのリンパ球を麻酔・スクリーニングしました。野生型(WT) lck:GFP 魚は主に胸腺領域で蛍光を示し、 cd79b:GFP 魚は頭部・鰓領域で蛍光を示し、これは先行の観察10 (図1A、左)と一致しています。対照的に、二重遺伝子移行 RAG2:hMYC;lck:GFP/lck:mチェリー 魚にT-ALLを伴い、 rag2:hMYC + cd79b:GFP 魚にB-ALLを伴い、全身に明るい散布性蛍光を示し(図1A右)、生検に多くの高蛍光スケールを提供しました。

除去後も鱗はそのままで、表皮組織が表面に付着したままでした。従来の共焦点スケール画像では、WT

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

ディスカッション

本プロトコルは、非悪性リンパ球および急性リンパ芽球(ALL)を含むゼブラフィッシュ表皮リンパ球を採取するための非致死性スケール生検法を記述しています。ゼブラフィッシュはリンパ生成やリンパ状悪性腫瘍の確立されたモデルですが、リンパ球を得る方法の多くは安楽死と組織剥離を必要とし、単一動物の縦断研究は妨げられています。スケールは豊富なリンパ球を含む実験的に利用可能な上皮区画を提供し、成体のゼブラフィッシュは除去後に急速に再生する数百枚の鱗を持つため、繰り返し採取可能です。したがって、スケール生検は、リンパ球(白血病負担など)を連続的にモニタリングし、単細胞懸濁液を生成して実験動物を安楽死させることなく下流試...

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

開示事項

著者には金銭的な利益相反はありません。

謝辞

本プロジェクトへのご協力をいただいたアミーラ・ハサン(M.B.B.S., Ph.D.)とブラシェ・ウッド氏に感謝いたします。研究はOUHSCステファンソンがんセンターパイロット助成プログラム、オクラホマ成人幹細胞研究センター(OCASCR)、プレスビテリアン健康財団チームサイエンスおよびシード助成プログラム、W.J.ジョーンズファミリー財団の支援を受けました。OUHSCステファンソンがんセンター分子生物学・細胞計測研究コアによるFACS(FACS)は、NCIがんセンター支援助成金P30 CA225520によって資金提供されました。本研究はアメリカがん協会(ACS-POST-BACC-23-1156971-01-DPBACC)の資金の一部で支援されました。イマン・オーウェンズはACSのポストバカロレア「STRONG」プログラムの奨学生です。

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
試薬 & 消耗品:
Tricaine methanesulfonate (MS-222)Sigma-AldrichE10521麻酔剤
RPMI 1640 mediumThermoFisher11875093リンパ球の生存率のための培地
Fetal Bovine SerumSigma-AldrichF2442細胞の生存率のために
Penicillin-StreptomycinThermoFisher15140122細菌汚染を制限
70% ethanolThermoScientificT038181000フォーセプスを滅菌するために
CellPro 1x PBSVWR104027-280無菌水で0.9xに希釈
Propidium IodideInvitrogenP1304MMPフロー/FACSによる生死細胞の識別
Cut Goods Misc-Pn; Size: 12 x 12 IN. 35um filter paper
Lab Pak 03-35/16		Sefar細胞選別用
参考文献: Burroughs-Garcia, J., Hasan, A., Park, G., Borga, C., Frazer, J. K. Isolating malignant and non-malignant b cells from lck:Egfp zebrafish. J Vis Exp. 10.3791/59191 (144), (2019).
フィルターペーパーの代替品：EASYStrainer Cell Sieves, Greiner Bio-OneGreiner89508-342細胞選別用
Eppendorf® Flex-Tubes® Microtubes, 1.5 mlEppendorf®20901-551細胞選別用マイクロ遠心チューブ
UltiCare VetRx U-100 Insulin Syringes 3/10cc 31G x 5/16" Half Unit MarkingUltiCare9436スケール生検用
100 x 25 mm Deep Petri DishUSA Scientific8609-0625スケール生検用
Bel-Art® Disposable PestlesBel-Art® BAF199230001スケール解離用
E-Z Pik 6-Piece Tweezer SetAven18480EZスケール生検用
Corning® microscope slides, frosted one side, one endSigma-AldrichCLS294875X25イメージング用
Cover glassesSigma-AldrichC8181イメージング用
SlowFade™ Glass Soft-set Antifade Mountant, with DAPIThermoFisherS36920スケールをスライドに取り付けるため
RNeasy Mini Kit Qiagen74104RNA抽出用
機器:
Nikon AZ100 マイクロスコープとDS-Qi1MCカメラNikon蛍光顕微鏡 & カメラ
CFX96 Touch-PCR SystemBio-Rad3600037
CytoFLEXBeckman-Coulterフローサイトメトリー分析
Leica SP8Leica共焦点顕微鏡
ソフトウェア:
Kaluza Analysis software version 2.1Beckman-Coulterフローサイトメトリー分析
参考文献: https://www.beckman.com/flow-cytometry/software/kaluza/downloads
LAS-Xソフトウェアバージョン3.7.4.23463Leica共焦点顕微鏡
参考文献: https://www.leica-microsystems.com/products/microscope-software/p/leica-las-x-ls/downloads/

参考文献

  1. Egawa G, Kabashima K. Skin as a peripheral lymphoid organ: revisiting the concept of skin-associated lymphoid tissues. J Invest Dermatol. 2011;131(11):2178–85.
  2. Matejuk A. Skin immunity. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2018;66(1):45–54.
  3. Zhang C, Merana GR, Harris-Tryon T, Scharschmidt TC. Skin immunity: dissecting the complex biology of our body's outer barrier. Mucosal Immunol. 2022;15(4):551–61.
  4. Kupper TS, Fuhlbrigge RC. Immune surveillance in the skin: mechanisms and clinical consequences. Nat Rev Immunol. 2004;4(3):211–22.
  5. Lafouresse F, Groom JR. A task force against local inflammation and cancer: lymphocyte trafficking to and within the skin. Front Immunol. 2018;9:2454. doi:10.3389/fimmu.2018.02454
  6. Danilova N, Bussmann J, Jekosch K, Steiner LA. The immunoglobulin heavy-chain locus in zebrafish: identification and expression of a previously unknown isotype, immunoglobulin Z. Nat Immunol. 2005;6(3):295–302.
  7. Hansen JD, Landis ED, Phillips RB. Discovery of a unique Ig heavy-chain isotype (IgT) in rainbow trout: implications for a distinctive B cell developmental pathway in teleost fish. Proc Natl Acad Sci U S A. 2005;102(19):6919–24.
  8. Page DM, et al. An evolutionarily conserved program of B-cell development and activation in zebrafish. Blood. 2013;122(8)–e11.
  9. Sunyer JO. Evolutionary and functional relationships of B cells from fish and mammals: insights into their novel roles in phagocytosis and presentation of particulate antigen. Infect Disord Drug Targets. 2012;12(3):200–12.
  10. Park G, et al. Diverse epithelial lymphocytes in zebrafish revealed using a novel scale biopsy method. J Immunol. 2024;213(12):1902–14.
  11. Zhou Q, et al. Cross-organ single-cell transcriptome profiling reveals macrophage and dendritic cell heterogeneity in zebrafish. Cell Rep. 2023;42(7):112793. doi:10.1016/j.celrep.2023.112793
  12. Robertson TF, et al. A tessellated lymphoid network provides whole-body T cell surveillance in zebrafish. Proc Natl Acad Sci U S A. 2023;120(20). doi:10.1073/pnas.2301137120
  13. Park G, et al. Zebrafish B cell acute lymphoblastic leukemia: new findings in an old model. Oncotarget. 2020;11(15):1292–305.
  14. Ferrero G, et al. The macrophage-expressed gene (mpeg) 1 identifies a subpopulation of B cells in the adult zebrafish. J Leukoc Biol. 2020;107(3):431–43.
  15. Borga C, et al. Simultaneous B and T cell acute lymphoblastic leukemias in zebrafish driven by transgenic MYC: implications for oncogenesis and lymphopoiesis. Leukemia. 2019;33(2):333–47.
  16. Tian Y, et al. The first wave of T lymphopoiesis in zebrafish arises from aorta endothelium independent of hematopoietic stem cells. J Exp Med. 2017;214(11):3347–60.
  17. Liu X, et al. Zebrafish B cell development without a pre-B cell stage, revealed by CD79 fluorescence reporter transgenes. J Immunol. 2017;199(5):1706–15.
  18. Wan F, et al. Characterization of gamma delta T cells from zebrafish provides insights into their important role in adaptive humoral immunity. Front Immunol. 2016;7:675. doi:10.3389/fimmu.2016.00675
  19. Moore FE, et al. Single-cell transcriptional analysis of normal, aberrant, and malignant hematopoiesis in zebrafish. J Exp Med. 2016;213(6):979–92.
  20. Langenau DM, et al. In vivo tracking of T cell development, ablation, and engraftment in transgenic zebrafish. Proc Natl Acad Sci U S A. 2004;101(19):7369–74.
  21. Burroughs-Garcia J, et al. Isolating malignant and non-malignant B cells from lck zebrafish. J Vis Exp. 2019;(144):59191. https://www.jove.com/t/59191/isolating-malignant-and-non-malignant-b-cells-from-lckegfp-zebrafish
  22. Borga C, et al. Molecularly distinct models of zebrafish Myc-induced B cell leukemia. Leukemia. 2019;33(2):559–62.
  23. Pugach EK, Li P, White R, Zon L. Retro-orbital injection in adult zebrafish. J Vis Exp. 2009;(34):1645. https://www.jove.com/t/1645/retro-orbital-injection-in-adult-zebrafish
  24. Iwasaki M, Kuroda J, Kawakami K, Wada H. Epidermal regulation of bone morphogenesis through the development and regeneration of osteoblasts in the zebrafish scale. Dev Biol. 2018;437(2):105–19.
  25. Traver D, et al. Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants. Nat Immunol. 2003;4(12):1238–46.

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

再版と許可

タグ

234234ALL
動画は近日公開
お問い合わせ
図書館への推薦

プライバシー

利用規約

ポリシー

著作権 © 2026 MyJoVE Corporation. 無断転載を禁じます。